LIA (LIZIN-VAS) AGAR: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2025

Az LIA (lizin-vas) agar biokémiai teszt az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok azonosítására. Ezt a közeget Edwards és Fife készítette a Falkow képlet alapján.

Eredetileg ez a teszt peptonokat, élesztõkivonatot, glükózt, L-lizint, bróm-krezol lila és desztillált vizet tartalmazó leves volt. Edwards és Fife hozzáadtak agar-agart, vas-ammónium-citrátot és nátrium-tioszulfátot.

Pozitív és negatív lizin-dekarboxilezési teszt. Forrás: Fotó és diagram tulajdonsága a szerző MSc. Marielsa gil

A teszt alapvetően a lizin-dekarboxiláz enzim jelenlétének bizonyítását jelenti, amely képes reagálni az L-lizin aminosav karboxilcsoportjával. Az aminosav dezaminálása a lizin-dezamináz enzim jelenléte miatt is előfordulhat.

Ezenkívül a tápközeg összetétele megmutatja néhány baktérium nemzetség azon képességét, hogy hidrogén-szulfidot termeljen. Végül azt is megfigyelhetjük, hogy a közegben keletkezik-e gáz.

bázis

Peptonok és élesztőkivonat

A legtöbb táptalajhoz hasonlóan a lizin-vas-agar olyan komponenseket is tartalmaz, amelyek biztosítják a baktériumok szaporodásához szükséges tápanyagokat. Ezeket az összetevőket peptonok és élesztőkivonat képviselik.

Szőlőcukor

Hasonlóképpen, ez az agar fermentálható szénhidrátként glükózt is tartalmaz. Az Enterobacteriaceae család összes baktériumáról ismert, hogy fermentálják a glükózt.

Ez a lépés döntő fontosságú, mivel felelős a táptalaj megsavanyításáért, amely alapvető feltétele annak, hogy a lizin-dekarboxiláz enzim - ha jelen van - a szubsztrátjára hatjon.

Néhány baktérium nemzetségben megfigyelhető gáztermelés a glükóz fermentáció miatt.

A gáz akkor bizonyul, amikor az agar elmozdul a csőben, és a cső alján üres hely marad, vagy a közeg két vagy több részre tört.

L-lizin

A lizin dekarboxilezésével diamin (kadaverin) és szén-dioxid képződik.

A dekarboxilezés a piridoxál-foszfát koenzim jelenlétében történik. Ez a reakció visszafordíthatatlan.

PH mutató (bróm-krezol lila)

Az összes pH-változást, amely a közegben a különféle reakciók során bekövetkezik, a lila bróm-krezol pH-mutatóval detektáljuk.

Ebben az értelemben, amikor savasodik, a táptalaj sárgára válik, és lúgosodás esetén a táptalaj visszatér az eredeti lila vagy lila színűre.

Amikor a lizin-dezaminálás a lizin-deamináz enzim jelenléte miatt történik, vöröses színű szín alakul ki a felületen, amely jellemző a Proteus, a Providencia és a Morganella fajokra.

Ennek oka az a tény, hogy az alfa-keto-szénsav képződik a deaminálási folyamat során, amely oxigén jelenlétében reakcióba lép az ammónium-citráttal, előidézve a fent említett színt.

Vas ammónium-citrát és nátrium-tioszulfát

Másrészt, baktériumok termelnek hidrogén-szulfid kerül bizonyít jelenlétében nátrium-tioszulfát (kén forrása) és a vas-ammónium-citrát, amely a fejlesztő a H ₂ S.

Baktériumok, amelyek az enzim-tioszulfát-reduktáz képesek cselekedni csökkentésével nátrium-tioszulfát jelen, képző-szulfit és hidrogén-szulfid (H ₂ S).

Ez utóbbi színtelen gáz, de a vassóval reagálva vasfém-szulfidot képez, amely oldhatatlan vegyület (látható fekete csapadék).

Azonban, a képesség, hogy a H forma ₂ S ezzel a médium nem nagyon megbízható, mert néhány lizin-dekarboxiláz-negatív baktérium, amely képes a H ₂ S nem képezik a fekete csapadék, mivel a savasság a közeg beavatkozik. Ezért javasoljuk, hogy ellenőrizze más vastartalmú hordozókkal.

A teszt értelmezése

Lizin dekarboxilezés

A csöveket a 24 órás inkubálás után el kell olvasni, különben fennáll annak a veszélye, hogy tévesen értelmezi a reakciót, és hamis negatívokról számol be.

Emlékeztetni kell arra, hogy az első fellépő reakció a glükóz erjedése, ezért minden cső 10–12 óra elteltével sárgává válik.

Ha az inkubációs idő (24 óra) végén sárga háttér látható, amely lila vagy lila felülettel rendelkezik, akkor a reakció negatív. A felület lila színe megfelel a közeg lúgosításának peptonok felhasználásával.

A pozitív reakció az, amikor a cső alja és felülete teljesen lila, azaz visszatér az eredeti színhez.

Ezért ki határozza meg a teszt pozitivitását, a tápközeg alapja vagy háttere. Ha kétségei vannak a színnel, összehasonlítható egy nem beoltott LIA csővel.

A lizin dezaminálása

A lizin-deaminációt mutató cső vöröses színű gesztenyebarna felülettel és sárga (savas) háttérrel rendelkezik, vagy az egész cső vörösesbarna színű.

Ezt a reakciót negatívnak kell tekinteni a lizin dekarboxilezéséhez, pozitívnak a lizin dezaminálásához.

Ezt a reakciót az előlapon definiálják és értelmezik.

Hidrogén-szulfid előállítása (H

A pozitív reakciót a táptalaj egészében vagy egy részében fekete csapadék jelenik meg. Általában a kúp éle és az alap között.

Ha a csapadék a cső egész területén megtörténik, akkor nem derül ki a közepén bekövetkező egyéb reakciók.

Az eredmények nyilvántartása

A teszt értelmezésekor az eredményeket a következőképpen kell rögzíteni:

Először a ferde leolvassuk, majd az alsó vagy blokk, akkor a termelés a H ₂ S, és végül a gáztermelés.

Példa: K / A + (-). Ez azt jelenti, hogy:

• K: lúgos keret (lila színű)
• V: Savas háttér (sárga), vagyis negatív dekarboxilezési reakció és negatív deaminálás.
• +: Hidrogén-szulfid előállítása
• (-): Gáz nélkül.

Készítmény

Mérjünk be 35 g dehidratált vas-agar lizinközeget és oldjuk fel egy liter desztillált vízben.

Melegítsük, amíg az agar teljesen feloldódik. Ehhez hagyjuk forrni egy percig, gyakran keverve. Ossza el a 4 ml tápközeget 13/100 kémcsövekbe pamutkupakkal.

Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig. Vegye ki az autoklávból, és hagyja állni olyan szögben, hogy legyen egy mély alap és egy rövid ferde.

Hűtőszekrényben tárolandó 2-8 ° C-on. A baktériumtörzs vetése előtt hagyja felmelegedni.

A dehidrált táptalaj színe bézs, az elkészített táptalaj pedig vöröses-lila színű.

Az elkészített táptalaj végső pH-ja 6,7 ​​± 0,2

A táptalaj sárgává válik, ha a pH = 5,2 vagy ennél alacsonyabb, és a pH = 6,5-nél vagy magasabbra bíbor színű.

Alkalmazások

Ezt a tesztet a többi biokémiai teszttel együtt az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok azonosítására használják.

A tápközeget egyenes hurokkal vagy tűvel oltjuk be, egy vagy két lyukasztást végzünk a cső aljára, majd a közeg felületét cikkcakkkal pontozjuk.

Inkubáljuk 24 órán át 35-37 ° C-on aerobiosisban. Ha szükséges, hagyjuk inkubálni további 24 órán át.

Főleg hasznos a laktóz-negatív Citrobacter fajok megkülönböztetése a Salmonellas sp.

Forrás: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.

Irodalom

1. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok a klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztő Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
2. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. Lizin-vas agar. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
5. BD Laboratories. BBL lizin-vas-agar-salakok. 2007. elérhető: bd.com
6. Valtek Laboratories. Közepes LIA 2009. Elérhető az andinamedica.com oldalon