KARBAMID TÁPTALAJ: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

A karbamid táptalaj folyékony táptalaj, amelyet bizonyos mikroorganizmusokban az ureáz enzim jelenlétének kimutatására használnak. Az ureáz egy mikrobiális enzim, amelyet konstitutív módon állítanak elő, vagyis szintetizálják, függetlenül attól, hogy van-e a szubsztrát, amelyen működik.

Az ureáz funkciója a szerves vegyületek bomlásával függ össze. Nem minden mikroorganizmus képes ezen enzim szintetizálására, ezért laboratóriumi meghatározása lehetővé teszi bizonyos baktériumtörzsek azonosítását és még az azonos nemzetségbe tartozó fajok megkülönböztetését.

Negatív és pozitív karbamid teszt. Forrás: A fotó készítette MSc. Marielsa Gil.

Kétféle karbamid-teszt létezik: Stuart és Christensen. Különbözőek összetételükben és érzékenységükben. Az első különleges, ha nagy mennyiségű ureázt mutat a Proteus nemzetség fajai által termelt formában.

A második érzékenyebb, és kis mennyiségű ureázt képes kimutatni más baktérium nemzetségekben, mint például Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter és Mycobacterium.

A Stuart karbamidlemez karbamidból, nátrium-kloridból, dikálium-foszfátból, monokálium-foszfátból, élesztőkivonatból, fenolvörösből és desztillált vízből áll.

Eközben a Christensen karbamidleves vagy agar peptonokból, nátrium-kloridból, monokálium-foszfátból, glükózból, karbamidból, fenolvörösből, desztillált vízből és agar-agarból áll. Ez utóbbi csak akkor, ha szilárd közeg.

bázis

Az ureáz enzim hidrolizálja a karbamidot szén-dioxid, víz és két ammónia molekula képződésére. Ezek a vegyületek ammónium-karbonátnak nevezett végtermékké alakulnak.

Stuart karbamid táptalaj

A Stuart karbamidleves pufferolása pH-ja 6,8. Ezért a mikroorganizmusnak képesnek kell lennie nagy mennyiségű ammónia képzésére, hogy fenolvörösre váljon. A pH-nak 8 fölé kell emelkednie.

Ezért a Stuart karbamidleves szelektív a Proteus fajokra, pozitív eredményeket ad az inkubációtól számított 24–48 órán belül, és nem hatékony azoknak a baktériumoknak, amelyek alacsony mennyiségű ureázt termelnek, vagy lassan hidrolizálják a karbamidot.

Ennek oka az, hogy a Proteus fajok képesek karbamidot használni nitrogénforrásként. Ehelyett más ureázt termelő baktériumoknak további forrásra van szükségük.

Pérez et al. (2002) megállapította, hogy Stuart karbamid táptalajja ugyanolyan hatékony, mint Christensen karbamid-agar, a Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon és Saccharomyces nemzetségek törzséből származó ureáz meghatározásában.

A tanulmány szerzői azt állítják, hogy mindkét médiával (Stuart és Christensen) 100% -os egyetértést értek el, amikor 24 és 48 órán át inkubáltak; azzal a kivétellel, hogy a törzseket, amelyeknek sikerült a tápközeget erős rózsaszínű-fukszia színűvé változtatni, pozitívnak tekintették.

Erre a tisztázásra szükség van, mivel Lodder (1970) kijelenti, hogy szinte minden élesztőnek sikerül a Christensen karbamid-agar sávját halványsárgavá változtatni. Ennek oka az a tény, hogy minimális mennyiségben hidrolizálhatják karbamidot, és aminok képződhetnek az aminosavak oxidációs dekarboxilezésével a felületen. Ezt nem szabad pozitívnak tekinteni.

Christensen karbamid-agara vagy -leves

A Christensen karbamidleves vagy agar kevésbé pufferolt, mivel kis mennyiségű ammóniát képes kimutatni. Ezenkívül ez a táptalaj dúsult peptonokkal és glükózzal. Ezek a vegyületek más ureáz-termelő mikroorganizmusok növekedését okozzák, amelyek nem növekednek a Stuart-táptalajban.

Hasonlóképpen, a Christensen karbamid teszt gyorsabb eredményeket kínál, különösen a Proteus esetében, mivel minimális időtartam mindössze 30 perc alatt, maximum 6 óra esetén pedig erősen pozitív.

Az ureázt termelő mikroorganizmusok fennmaradó része a táptalaj színét enyhén megváltoztatja 6 óra elteltével, erőteljesen 24, 48, 72 óra vagy annál később, sőt néhány törzs is gyenge reakciót válthat ki 5 vagy 6 nap után.

Mindkét média (Stuart és Christensen) értelmezése

A tápközeg eredetileg sárga-narancssárga színű, és a pozitív reakció a közeg színét rózsaszínű-fuksziassá változtatja. A szín intenzitása közvetlenül arányos a keletkező ammónia mennyiségével.

A negatív reakció eredményeként az eredeti színű táptalaj megmarad, kivéve az élesztőket, amelyek halvány rózsaszínűvé válhatnak a Christensen karbamid-agar táptalajon.

Készítmény

Stuart karbamid táptalaj

Mérje meg a szükséges grammot a kereskedelmi társaság jelzéseinek megfelelően. Oldjunk fel lehetőleg steril desztillált vízben. Oldáshoz ne használjon hőt, mivel a karbamid érzékeny a hőre.

A membránszűrést sterilizálják. Ehhez Millipore szűrőt használunk, amelynek pórusa 0,45 μl. Ne használjon autoklávot. Miután az oldatot kiszűrtük, steril csövekbe osztottuk el. A megbízható eredmények elérése érdekében a csövet minimum 1,5 ml és legfeljebb 3 ml között kell átvinni.

Használat előtt hűtőszekrényben tárolandó.

Ha a szűrési módszer nem áll rendelkezésre, a tápközeget azonnal fel kell használni a megbízható eredmények eléréséhez.

A Stuart karbamidleves készítésének másik módja a következő:

Néhány kereskedelmi ház eladja az alapközeget a karbamid-teszthez, kivéve a karbamidot.

A kereskedelmi társaság által megjelölt mennyiséget lemérjük. Desztillált vízben oldjuk, és az autoklávban 121 ° C-on 15 percig sterilizáljuk. Hagyjuk kicsit pihenni, és amikor a táptalaj meleg, adjunk hozzá 100 ml karbamid-oldatot, amelyet 20% -ban készítünk és szűréssel sterilizálunk.

Steril csövekben osztjuk szét, amint azt korábban leírtuk.

Christensen karbamid-agara vagy -leves

-A karbamid-oldat elkészítése

Mérjünk ki 29 g dehidrált karbamidot és oldjuk fel 100 ml desztillált vízben. A sterilezéshez használja a szűrési módszert. Ne autoklávot végezzen.

- Karbamid alapanyag

Oldjunk fel 24 g dehidrált bázikus agart 950 ml desztillált vízben. Sterilizáljuk az autoklávban 121 ° C-on 15 percig. Hagyja pihenni, amíg el nem éri az 50 ° C hőmérsékletet, és aszeptikusan adja hozzá az előzőleg elkészített karbamidot.

Öntsön 4-5 ml-t steril csövekbe és döntse, amíg szilárd. Egy hosszú fuvolacsőrnek kell lennie.

Ez a közeg folyékony formában is előállítható.

Alkalmazások

A karbamid-teszt rendkívül hatékonyan különbözteti meg a Proteus nemzetet az Enterobacteriaceae család többi nemzetségétől, figyelembe véve a Proteus gyors reakcióját.

A Christensen összetétel felhasználásával a teszt segít megkülönböztetni az azonos nemzetségű fajokat. Például az S. haemolyticus és az S. warneri koaguláz-negatív és béta-hemolitikus Staphylococcus, de különböznek abban, hogy az S. haemolyticus karbamid-negatív és S. warneri karbamid-pozitív.

Másrészt a McNulty sikeresen felhasználta Christensen 2% karbamid táptalaját a Helicobacter pylori jelenlétének tanulmányozására a gyomor nyálkahártyájából (antralis régió) vett biopsziás mintákban.

A H. pylori jelenlétét pozitív karbamid-teszt bizonyítja. Az eredmények megfigyelésének időtartama közvetlenül arányos a jelenlévő mikroorganizmusok mennyiségével.

Mint látható, ez egy egyszerű módszer a Helicobacter pylori diagnosztizálására gyomorbiopsziákban.

Végül, ez a teszt felhasználható a Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus és Mycobacteria fajok megkülönböztetésére is.

A karbamid teszt vetése

Mindkét módszerhez erős mikrobiális inokulum szükséges az eredmények optimalizálása érdekében. A baktériumtelepeket előnyösen vér-agarból, az élesztőket Sabouraud-agarból vesszük, néhány kivétellel. Az oltóanyagot a folyékony közegben emulgeálják.

A Stuart karbamidlevesének inkubálása 37–40 ° C-on 24–48 órán keresztül, tudva, hogy csak a Proteus nemzetség törzseit keresi, ha a törzs baktérium. Élesztők esetében inkubálhatjuk 37 ° C-on vagy szobahőmérsékleten, 24–48 órán keresztül.

Christensen karbamidleves esetében 37 ° C-on inkubálják 24 órán át. Ha a teszt negatív, akkor 6 napig inkubálhatja. Ha a teszt 6 óra elõtt pozitív, akkor ez azt jelzi, hogy ez a Proteus nemzetség törzse.

Christensen karbamid-agar esetében az agarkúpot erősen oltják be, szúrás nélkül. A levest inkubáljuk és ugyanúgy értelmezzük.

QA

Kontroll törzsek, például Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 és Salmonella typhimurium használhatók a táptalaj tesztelésére. Az első kettő pozitív, az utóbbi két negatív eredményt ad.

Forrás: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.

Irodalom

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Stuart karbamidleves felhasználása az ureáz teszthez, mint teszt az élesztő diagnosztizálásában. Rev. Soc. Ven. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Elérhető a Scielo.org oldalon.
2. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok a klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztő Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
3. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
5. Britannia Laboratories. Christensen Medium (karbamid-agar alap) 2015. Elérhető a következő címen: britanialab.com