KÖZEPES MÉRETŰ: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2025

A SIM táptalaj félig szilárd és differenciál agar, amelyet kifejezetten egyes baktériumok, különösen az Enterobacteriaceae azonosításához segítenek. Tripteinből, peptonból, vas-szulfátból, ammónium-szulfátból, nátrium-tioszulfátból és agarból áll.

Ez a közeg lehetővé teszi a végrehajtását három fontos tesztek: a hidrogén-szulfidot termelnek (H ₂ S), a kialakulását indol és a motilitás, így a rövidítés SIM. Nagyszerű felhasználhatósága miatt hiányzik a bakteriológiai laboratóriumban.

A. Kereskedelmi SIM táptalaj B. SIM H2S (-), Indol (-) és Motilitás (+) teszt és SIM H2S (+), Indol (-), Motilitás (+) teszt. Forrás: A. A fotó készítette MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Más táptalajoktól eltérően, félszilárdnak kell lennie annak érdekében, hogy egyes baktériumok mozgási képessége kimutatható legyen. Ebben az értelemben ez a teszt nagyon jól működik az Enterobacteriaceae esetében, de nem erjesztés nélküli gramnegatív rudak esetében, ahol más módszerek, például függő csepp, előnyösek.

A SIM médium lehetővé teszi bizonyos specifikus tulajdonságok megkülönböztetését, amelyek jellemzik az egyes baktériumokat másokhoz viszonyítva. Például az Escherichia coli különbözteti meg, hogy H ₂ S (-), indol (+) és a motilitás (+), míg a Proteus mirabilis jelentése H ₂ S (+), indol (-), a motilitás (+).

bázis

Ez egy olyan tápközeg, amelyet differenciáltnak tekintünk, mivel felhasználása megkülönbözteti a hidrogén-szulfidot termelő mikroorganizmusokat azoktól, amelyek nem; kiemeli azokat is, amelyek indolt képeznek a triptofánból, és azokat, amelyek nem, és végül megkülönbözteti a mozgó baktériumokat az immobilitástól.

Áramforrás

Mint minden táptalaj, tartalmaz elemeket, amelyek biztosítják a szükséges tápanyagokat, hogy a nem igényes mikroorganizmusok kifejlődjenek. Ezeket az elemeket peptonok és triptein képviselik.

A közegben a mikroorganizmus fejlődése elengedhetetlen ahhoz, hogy megfigyelhető legyen a táptalaj által értékelni kívánt tulajdonságok jelenléte vagy hiánya.

Hidrogén-szulfid előállítása

A levél S a betűszó SIM utal, hogy a hidrogén-szulfidot termelnek (H ₂ S). A hidrogén-szulfid képzésére képes baktériumok a ként nátrium-tioszulfátból veszik fel.

Miután a H ₂ S -colourless gáz- képződik, ez reagál a vas-só a közegben jelenlévő, képző vas-szulfid, jól látható (fekete csapadék). Baktériumok, amelyek nem képeznek H ₂ S, elhagyja a közeg az eredeti színben (bézs).

A fekete csapadék akadályozhatja a motilitás értelmezését. A legtöbb H ₂ S-t termelő Enterobacteriaceae azonban ismert, hogy pozitívan mozgékony, mint például a Salmonella, a Proteus és a Citrobacter. Ezenkívül a szinte az egész tápközeget lefedő fekete csapadék pozitív motilitást jelez.

Indolképződés

A SIM betűszó második betűje "I", amely az indol képződését ábrázolja.

Ebben az értelemben a triptein a tápanyagforrás mellett egy másik alapvető funkciót is ellát. Ez a pepton gazdag egy triptofán nevű aminosavban, ezért képes baktériumokat mutatni, amelyek triptofanázt termelnek.

Ez az enzim felelős a triptofán aminosav lehasításáért, és ennek következtében kialakul az indol (színtelen anyag), a piruvsav és az ammónium.

Ez az oka annak, hogy ennek a reakciónak a bemutatására fel kell tüntetni egy felfedő anyagot (Ehrlich-reagens vagy Kovac-reagens). Vagy reagál indollal, vörös fukszia gyűrű alakú anyagot képezve az agar felületén. Ha megjelenik a fuksia gyűrű, az indolteszt pozitívnak minősül.

Azok az baktériumok, amelyek nem tartalmazzák ezt az enzimet, nem képezik a gyűrűt, és negatív indoltesztnek tekintik.

Fontos megjegyezni, hogy az indol-tesztet az utolsóként kell értelmezni, mivel a reagens hozzáadása után a közeg zavaros lesz, megnehezítve a mozgékonyság megjelenítését.

Mozgékonyság

Végül a SIM szó "M" betűje a mozgékonyságot jelenti. A mozgékonyság értékeléséhez ez a közeg stratégiailag félszilárd, mivel ez a tulajdonság elengedhetetlen ahhoz, hogy megfigyelhető legyen-e baktériummozgás vagy sem. Azok a baktériumok, amelyek flagellat tartalmaznak, adják ezt a pozitív tesztet.

A pozitív teszt akkor látható, ha zavarosság figyelhető meg, mind a kezdeti inokulumban, mind annak körül. Míg a nemmotilis baktériumok csak a kezdeti inokulum útján fejlődnek ki.

Készítmény

Közepes SIM

Mérjünk be 30 g dehidratált közeget és oldjuk fel liter desztillált vízben. Az elegyet 5 percig állni hagyjuk, majd forrásig melegítjük, gyakran keverve, amíg teljesen fel nem oldódik.

Osszuk el a keveréket pamut kupakkal ellátott kémcsövekben és autoklávban 121 ° C-on 15 percig. Távolítsa el a csőtartót az autoklávból, és hagyja, hogy függőleges helyzetben megszilárduljon, úgy, hogy a közeg tömb alakú legyen.

Megőrzése érdekében felhasználásig hűtőszekrényben tartja. Az elkészített táptalaj végső pH-jának 7,3 ± 0,2-nek kell lennie.

A tápközeg oltásakor szobahőmérsékleten kell lennie. A középső szín bézs.

Kovac reagens

Mérjünk be 150 ml amil-, izoamil- vagy butil-alkoholt. (Használja a három említett egyiket).

Oldjunk fel 10 g p-dimetil-amino-benzaldehidet. Ezután lassan adjunk hozzá 50 ml tömény sósavat.

A felhasználásra kész reagens színtelen vagy halványsárga. A borostyánpalackban kell tárolni és hűtőszekrényben kell tárolni. Ne használja, ha sötétbarna; ez azt jelzi, hogy sérült. Ez a reagens az Enterobacteriaceae esetében előnyös.

Erlich reagense

Mérjünk ki 2 g p-dimetil-amino-benzaldehidet, oldjuk fel 190 ml abszolút etil-alkoholban, és lassan keverjük össze 40 ml tömény sósavval. Tárolja ugyanúgy a Kovac reagenst. Ehrlich reagenst használják leginkább nem erjesztő és anaerob baktériumok kezelésére.

Alkalmazások

A SIM táptalajt nagymértékben használják a bakteriológiai laboratóriumokban. Előnye, hogy három lényeges jellemző megfigyelhető ugyanabban a csőben az Enterobacteriaceae azonosításakor.

elvetett

Ennek a táptalajnak a vetésére a helyes módszer a tű használata, amellyel a vizsgálandó tiszta kolónia egy részét beveszik, és függőlegesen illesztik be a táptalaj közepébe. Egyetlen lépést kell végrehajtani. A szúrás ne érje el a cső alját, helyes, ha a mélységnek csak kétharmadát fedi le.

Az inokulum megismétlése nem ajánlott, mivel ez a pozitív motilitás téves értelmezéséhez vezethet. A beoltott táptalajt aerob módon inkubáljuk 37 ° C-on 24 órán át.

Ha az idő arra a következtetésre jutott, hogy megfigyelhető-e vagy sem volt termelése H ₂ S és a motilitás leolvassuk. Végül az indolt felfedezzük, hozzáadva 3-4 csepp Ehrlich vagy Kovac reagenst, óvatosan keverjük össze és értelmezzük.

Forrás: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.

QA

Sterilitás-ellenőrzésként egy vagy két csövet oltás nélkül inkubálunk egy kemencében 37 ° C-on 24 órán át. Várható, hogy ezen idő után nincs növekedés vagy színváltozás.

Minőség-ellenőrzésként ismert tanúsított törzseket lehet használni, például: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

A várt eredmények: Escherichia coli H ₂ S negatív, indol és pozitív motilitás, Enterobacter aerogenes csak pozitív motilitás, Salmonella typhimurium H ₂ S és pozitív motilitás, negatív indol mellett. A Proteus vulgaris mind pozitív, míg a Klebsiella pneumoniae és a Shigella mind negatív.

korlátozások

- Néhány Morganella morganii törzs - többek között - barnás pigmentet képezhet ebben a közegben a melanin képződése miatt, ezt nem szabad összekeverni a vas-szulfid csapadékával. Ez a helyzet tapasztalatlan szakemberek számára hamis pozitív eredményeket generálhat a H ₂ S teszt értelmezésében.

-A szigorú aerob baktériumok csak a cső felületén szaporodnak, megnehezítve a motilitás értelmezését.

Irodalom

1. BD Laboratories. BBL SIM közepes. 2008. elérhető: bd.com
2. Neogen Laboratories. SIM közepes. Elérhető a következő címen: élelmiszerbiztonság
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM közepes. 2009.Támogatható:
4. Brizuela-Lab laboratórium. Közepes SIM. Elérhető a:.brizuela-lab.com oldalon
5. Britannia Laboratories. Közepes SIM. 2015. Elérhető a következő címen: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.