- bázis
- A Voges-Proskauer teszt alapja
- A bizonyítékok nyilvánosságra hozatala és értelmezése
- Készítmény
- Közepes MR / alelnök
- Voges A reagens
- A Voges B reagens
- A Voges-Proskauer teszt eljárás
- Tesztfejlesztés
- Használat
- QA
- Irodalom
A Voges-Proskauer teszt egy biokémiai teszt, amelyet az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok azonosításának elősegítésére használnak. Különösen hasznos az Escherichia coli törzsek, például Klebsiella és Enterobacter törzsek megkülönböztetésére.
A tesztet folyékony tenyésztő tápközegben végezzük, metilvörös - Voges Proskauer néven, amelyet az RM / VP rövidítéssel jobban ismertünk. Ez a táptalaj pufferolt polipeptonból, glükózból, dikálium-foszfátból és desztillált vízből áll.
A metil-Red-Voges Proskauer (RM / VP) kereskedelmi közeg / VP teszt pozitív, illetve negatív. Forrás: A fotó készítette MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, a Wikimedia Commonsból
A jelenlegi RM / VP táptalaj a Clark and Lubs táptalaj módosítása, amely eredetileg alacsonyabb peptidek és glükóz koncentrációt tartalmazott. Így kevesebb hidrogéniont termeltek, amely a Voges-Proskauer pozitív reakcióhoz szükséges.
A teszt azon alapszik, hogy a mikroorganizmus felhasználja a glükózt a butilén-glikol útján, és oxigén és lúgos pH jelenlétében semleges végterméket, az úgynevezett acetoint képezzen.
Az RM / VP közegben a Voges-Proskauer teszt feltárása mellett a metilvörös teszt is felfedhető.
bázis
A Voges-Proskauer teszt alapja
A tápközegben jelen lévő pluripeptonok biztosítják a baktériumok szaporodásának alapvető tápanyag-szükségleteit. A fő vegyület a glükóz. Sok baktérium képes a glükóz metabolizálására és a piruvsav képzésére.
A piruvsav a glükóz anyagcseréjének középpontja, és onnan az egyes mikroorganizmusok eltérő úton haladhatnak. Egyesek vegyes savakat képeznek, például tejsavat, ecetsavat, hangyasavat és borostyánkősavat, mások semleges termékeket, például 2,3-butándiolt képeznek.
A Voges-Proskauer teszt feltárja a mikroorganizmus azon képességét, hogy aerob körülmények között acetil-metil-karbinolt (acetoint) képezzen, amely a 2,3-butándiol köztiterméke.
Az acetoin redukálódik, és 2,3-butándiolt képez, de ez a reakció visszafordítható, tehát, ha a 2,3-butándiol oxidálódik, acetoin képződik. Ezért az oxigén elengedhetetlen.
A kálium-foszfát az a puffer, amely pufferolja a keveréket 6,9 ± 0,2 pH mellett.
A bizonyítékok nyilvánosságra hozatala és értelmezése
A reakció demonstrálásához két reagenst (Barrit reagenst) kell felhasználni, amelyeket Voges A és Voges B néven ismertek.
Az A Voges egy 5% α-naftil oldat, a Voges B pedig 40% -os kálium-hidroxid-készítmény. Ha nem áll rendelkezésre kálium-hidroxid, akkor helyettesítheti 40% -os nátrium-hidroxiddal.
Α -naftil olyan katalizátor, amely növeli a reakció színének intenzitását, ezáltal a teszt érzékenyebbé válik. Először mindig adjon hozzá az α-naftolt, rázva a csövet, hogy a közeg az oxigénnel érintkezzen. Ily módon a jelenlévő acetoint diacetilré oxidálják, és a 2,3-butándiolt oxidálják, így acetoint képeznek, és ezt átjutják a diacetilcsoporthoz.
Így kötődik az α-naftil a diacetilhez, amely viszont csatlakozik az arginin aminosavban levő guanidin nukleuszhoz, az utóbbi pluripeptonokból származik.
A kálium- vagy nátrium-hidroxid a maga részéről felelős a CO 2 abszorpciójáért és a peptonokkal való reakcióért. Ez a reakció lazac-rózsaszín színű képződést okoz, amely jól látható a cső nagyon jó rázása után.
A diacetil, a pepton és az α-naftil megfelelő mennyiségét össze kell keverni, hogy a szín azonnal megjelenhessen. Ha ez nem történik meg, akkor a csövet 15 percig hagyja pihenni, mielőtt értelmezné.
A teszt általában 2-5 perc után pozitív, amikor halvány rózsaszínű szín látható. Ha hagyja állni 30 perctől 1 óráig, a szín intenzitása maximális lesz (intenzív vörös).
Ha a húsleves sárgává válik, negatív teszt jelenik meg. 1 óra elteltével, ha a teszt negatív, réz szín lép fel a kálium-hidroxid α-naftolen történő reakciójának eredményeként.
Készítmény
Közepes MR / alelnök
Mérjünk be 17 g dehidratált tápközeget és oldjuk fel liter desztillált vízben. Hagyja állni 5 percig. Forrásig melegítjük, hogy teljesen feloldódjon. Tálaljuk 3-4 ml-t csövekben és sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig.
A dehidratált táptalaj bézs színű, az elkészített táptalaj világos sárga színű.
A tápközeg végső pH-ja 6,9 ± 0,2.
Voges A reagens
Mérjünk ki 5 g α-naftolt és oldjuk fel 50 ml (abszolút) etil-alkoholban. Ezután folytassa az etil-alkohol hozzáadását, amíg el nem éri a 100 ml-t.
A Voges B reagens
Mérjünk ki 40 g kálium-hidroxidot és oldjuk fel 50 ml desztillált vízben egy főzőpohárban. Az üveget hidegvizes fürdőbe kell helyezni a hőmérséklet szabályozására, mert amikor a készítmény feloldódik, a hőmérséklet hirtelen emelkedik.
Miután az oldat hideg volt, vittük át egy mérőlombikba, és töltsük fel desztillált vízzel 100 ml-re.
A Voges-Proskauer teszt eljárás
A Voges-Proskauer teszt elvégzéséhez egy RM / VP táptalajt oltunk be a vizsgált mikroorganizmussal tiszta tenyészetből 18–24 órán keresztül.
Az inokulum nem lehet nagyon sűrű. Inkubáljuk 35–37 ° C-on 24–48 órán keresztül, bár néha több napig inkubálni kell. A Cowan és az Acél azon a véleményen van, hogy az Enterobacteriaceae család minden pozitív Voges-Proskauer (VP) fajának kimutatásához 5 nap szükséges minimális inkubációs idő.
Tesztfejlesztés
Válasszon egy 1 ml-es alikvotot egy csőbe, és fejlessze az alábbiak szerint: Helyezzen 12 csepp (0,6 ml) Voges A reagenst és 4 csepp (0,2 ml) Voges B-t. Keverje össze a levegőztetést és hagyja állni. tolmácsolás előtt 5-10 percig. Ha azonban a teszt továbbra is negatív, hagyja, hogy üljön és figyelje meg a csövet 30 perc és 1 óra elteltével.
Rózsaszín-vörös színű megjelenése azt jelzi, hogy a Voges-Proskauer reakció pozitív. Ha a közeg sárga marad, akkor a reakció negatív.
A hamis negatívok elkerülése érdekében elengedhetetlen a fejlesztők hozzáadása a megadott sorrendbe és mennyiségbe.
Használat
A Voges-Proskauer-teszt felhasználható az E. coli VP negatív törzseinek, többek között a Klebsiella, Enterobacter, Serratia nemzetség törzseinek megkülönböztetésére, amelyek VP pozitívak.
Forrás: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
QA
A kontroll törzsek, beleértve az Escherichia coli ATCC 25922-et, a Klebsiella pneumoniae ATCC 700603-t, a Proteus mirabilis ATCC 43071-et, a Salmonella typhimurium-t és az Enterobacter cloacae ATCC 13047-t, felhasználhatók az elkészített táptalaj minőségének vizsgálatára.
A várt eredmények pozitív Voges-Proskauer reakciók csak a K. pneumoniae és az E. cloacae esetében. A többi negatív reakciókat vált ki.
Irodalom
- Britannia Laboratories. MR-VP közeg. 2015.Attól elérhető: www.britanialab.com
- Microkit Laboratories. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Elérhető:
- Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok a klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztő Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
- Forbes B, Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.