KAPSZULAFESTÉS: INDOKLÁS ÉS TECHNIKÁK - BIOLÓGIA - 2025

A festési kapszula egy differenciálfestési eljárás, amelynek tulajdonsága, hogy stressz-poliszacharid-szerkezettel körülveszi az egyes baktériumokat és élesztőket, kapszulának nevezik. Klinikai laboratóriumokban használják a kapszulázott mikroorganizmusok által okozott egyes patológiák diagnosztizálására.

A laboratóriumok oktatásában használják ennek a morfológiai szerkezetnek az egészségtudományi pályafutás hallgatói számára történő bemutatására, például az orvostudomány, a bioanalízis, az ápolás vagy a citotechnológia területén.

A Klebsiella pneumoniae kenet kapszulafestékkel festett. Indiai tinta módszer szafraninnal. Forrás: А.А.В

Számos egyszerű módszer létezik a kapszula jelenlétének kimutatására a mikroorganizmusokban, amelyek rendelkeznek:

A negatív festést elsősorban a CSF mintákban alkalmazzák, amikor a Cryptococcus neoformans élesztő jelenlétének gyanúja merül fel. Ez az élesztő a meningitis általános oka.

Ez a technika nigrosint vagy indiai tintát használ, és azon alapul, hogy kontrasztot teremtsen a készítmény háttere és a mikroorganizmus áthatolhatatlan kapszula között. A háttér elsötétül és a kapszula színtelen. Ily módon feltárul ez a szerkezet.

Az Anthony technikával kapcsolatban elmondható, hogy azt főleg laboratóriumok oktatásában használják a poliszacharid szerkezetének kimutatására olyan baktériumokban, mint Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae és Neisseria meningitidis.

Ezt a technikát nagyon ritkán használják diagnosztikai célokra, mivel vannak más rutin tesztek is, amelyek lehetővé teszik ezen mikroorganizmusok azonosítását.

bázis

A kapszula erős szerkezetű, poliszacharid jellegű. Ez megóvja a mikroorganizmusokat a fagocitózistól, ezért nehéz behatolni a szerkezetbe.

Ez az oka annak, hogy a kapszulafolt kontraszton alapszik. A színezékek megfestik a készítmény alját, miközben a kapszula színtelen marad.

Ezért ezekkel a technikákkal a kapszula könnyen felismerhető. Ha a mikroorganizmusnak nincs kapszula, akkor nem lesz megkülönböztethető az ilyen típusú elszíneződésnél, mivel minden szín azonos színű lesz.

A kapszula színezésére alkalmazott összes technika azonos indokokkal rendelkezik, annak ellenére, hogy különböző színezékeket és eljárásokat alkalmaznak.

Technikák par

-Anthony folt

Anthony foltja kristályibolya foltot használ. Ezzel a baktériumtest és a háttér lila lesz.

Másrészt 20% réz-szulfátot használunk. Ez mosóoldatként szolgál, azaz eltávolítja a felesleges ibolya kristályt a készítményből, így a kapszulák tisztavá válnak, de a baktériumtest vagy a háttér nem veszíti el a színét.

anyagok

- Irizáló tej.

- Dia.

- 1% lila kristály.

- 20% réz-szulfát.

- Optikai mikroszkóp.

- Merülő olaj.

Folyamat

Ez a technika a következőkből áll:

1. A mikroorganizmust irizáló tejben 36 órán át tenyésztjük.
2. Helyezzen egy csepp kultúrát a tárgylemez végére és mellette, tegyen egy csepp lila üveglapot, keverje össze és szórja rá egy másik tárgy végére.
3. Levegőn száraz és ne melegedjen be.
4. Mossuk 20% -os réz-szulfát-oldattal, hagyjuk megszáradni.
5. Vigyázzon mikroszkóp alatt merülő objektívvel. Keressen a szórás végei felé.

Fontos, hogy ne használja a hőt sem a rögzítéshez, mind a szárításhoz, mivel ez károsítja a kapszulát. Ne mossa le vízzel.

Értelmezés

Az irizáló tej kiváló tápközeg, mivel biztosítja a szükséges tápanyagokat a mikroorganizmus számára a kiemelkedő kapszula kialakításához.

Másrészt az irizáló tej vastag és kompakt alját alkotja, amelyet lilaként festenek a baktériumtesttel együtt, de a mikroorganizmust körülvevő kapszula színtelen marad. Ezért tiszta halogót figyelünk meg a baktériumtest körül.

Anthony folttal festett Klebsiella pneumoniae kenet mikroszkópos megfigyelésének grafikus ábrázolása. Forrás: a szerző készítette MSc. Marielsa Gil.

Előny

Ez egy egyszerű technika a végrehajtáshoz. Nem igényel rögzítést.

Azt is meg kell jegyezni, hogy más táptalajok is használhatók, de a tejközeg előnyös, mivel annak előnye, hogy szembetűnőbb kapszulákat biztosít.

hátrányok

Ez valamivel munkaigényesebb technika, mint a negatív festés, és megjelenítéséhez meg kell várni a készítmény teljes kiszáradását.

- Negatív festés

anyagok

- Dia diák.

- Tápközeg a mikroorganizmussal.

- kínai tinta vagy nigrozin.

- Optikai mikroszkóp.

- Fiziológiai sóoldat.

Folyamat

Helyezzen egy csepp fiziológiás sóoldatot a fedőlapra, és oldja fel a mikrobiális tenyészet kis részét. Fontos, hogy az előkészítés ne legyen túl vastag. Ezután tegyen egy csepp kínai tintát vagy nigrozint és keverje össze.

Ezután fedőlemezt helyezünk a készítményre anélkül, hogy a folyadék túlcsordulna. A mikroszkóp alatt megfigyelhető, ha először egy 10X objektívre fókuszál, majd 40X-re mozgat.

Ez a technika közvetlenül alkalmazható a CSF mintákon is. Vagyis egy csepp mikrobiális tenyészet helyett csepp CSF-et helyeznek el.

Előny

Ez egy egyszerű végrehajtási módszer, ugyanakkor olcsó. Nem igényli a készítmény rögzítését vagy szárítását.

hátrányok

Hátránya, hogy mikroszkóp alatt meg kell figyelni, mielőtt a készítmény megszárad, mivel ha ez megtörténik, a mikroorganizmusok összehúzódnak, ami megnehezíti a megjelenítést.

Másrészt hamis pozitív eredmények fordulhatnak elő, ha az elemző tapasztalatlan, mivel a leukocitákat gyakran összekeverik az élesztővel.

Az élesztőkapszulák megfigyelését a kínai tinta vagy nigrosin technikával a Cryptococcus neoformans feltételezhető diagnózisának kell tekinteni, mindaddig, amíg a tenyészettel nem igazolják.

Ennek oka az, hogy vannak más élesztők is, amelyek oka lehetnek a meningitisnek, és nem csak a Cryptococcus neoformans, például a Candida és a Rhodotorula nemzetségbe tartozó fajok, valamint a Cryptococcus más fajai.

Értelmezés

Kapszulázott mikroorganizmusok esetén sötét háttér lesz megfigyelhető, átlátszó testekkel a folyadékban lebegve, ami kiemeli a kapszula jelenlétét.

Kínai festékkel festett Cryptococcus neoformans kapszula. Forrás: Fotókredit: Tartalomszolgáltatók: CDC / Dr. Leanor haley

-Indiai festéktechnika

Ezt a technikát a nigrosinnal is meg lehet tenni. Ez a korábban kifejtett technikák kombinációja. Ez a technika kristályibolya és indiai tintát vagy nigrozint használ.

A baktériumtest lilavá válik a kristályibolyról, mivel negatív töltésű, míg a nigrosin a kenet alját színezi. Ha a baktériumnak van kapszula, átlátszó haloként jelenik meg a mikroorganizmus körül.

A kristályibolya a következő színek bármelyikével helyettesíthető: szafranin, bázikus fuksin vagy metilénkék.

anyagok

- Lila üveg.

- Nigrozin vagy indiai tinta.

- Dia diák.

- Mikroszkóp.

Folyamat

- A mikroorganizmust tenyésztő tápközegben tenyésztjük.

- Helyezzen egy csepp kultúrát a tárgylemez végére és mellette, tegyen egy csepp indiai kristálytintát vagy nigrozint, keverje össze és szórja rá egy másik tárgy végére.

- Levegőn száraz és ne erősítse meg a hővel.

- Fedjük le egy lila kristályos oldattal 1 percig, mossuk desztillált vízzel, de nagyon finoman (puha fúvókával), hagyjuk a szabadban megszáradni.

- Figyelje meg a mikroszkóp alatt merülő objektívvel. Keressen a szórás végei felé.

Értelmezés

Lila baktériumtest és sötét háttér látható. A kapszula, ha van, színtelennek tűnik a baktériumok körül.

Irodalom

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. A mikrobiológia alapvető technikái. A baktériumok megfigyelése. Reduca (biológia). Mikrobiológiai sorozat. 2010-ben; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Alapvető foltok a mikrobiológiai laboratóriumban. Mediagraphic.org. 2014 3 (1): 10-18. Elérhető a következő oldalon: medigraphic.com
3. Gil M. Negatív festés: indoklás, technika, előnyök és hátrányok. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiológiai diagnosztika. 12 ed. Argentína. Szerkesztő Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Kapszulafolt: Alapelv, eljárás és eredmények. 2019. Orvosi mikrobiológiai útmutató. Elérhető itt: microbeonline.com