- bázis
- Spórafestési technikák
- Dorner technika
- Módosított Dorner technika
- Shaeffer - Fulton vagy Wirtz-Conklin technika
- Möeller technika
- Módosított Möeller technika hő nélkül
- Alkalmazások
- Példák
- Irodalom
A spórafestés az a rezisztenciaszerkezet színezésére alkalmazott módszer, amely kedvezőtlen körülmények között baktérium nemzetségeket alkot; Ezek a struktúrák megfelelnek a túlélés egy formájának.
Sok nemzetség alkot spórákat; a legfontosabbak azonban a Bacillus és a Clostridium. Ezeket a nemzetségeket relevánsabbnak tekintik, mivel az emberek számára patogén fajok vannak.

Spórafestés a Shaeffer - Fulton vagy Wirtz-Conklin módszerrel. És tambe (eredeti feltöltő), a Wikimedia Commonsból
Minden bacillus spórát okozhat. A készítmény festésekor a spóra a bacillusban (endospore) vagy azon kívül (exospore) található. A baktériumokkal szemben alkalmazott hagyományos festési technikákkal - például a Gram-folttal - a spórák színtelenek maradnak.
Jelenleg számos olyan festési módszer létezik, amely képes a spóra vastag szerkezetébe áthatolni, hogy azt megfestse. Ezek a módszerek nagyon változatosak; Ide tartoznak a Dorner technika, a Möeller folt és a Shaeffer - Fulton módszer, más néven Wirtz-Conklin.
Az említett technikák közül a Shaeffer-Fulton módszert alkalmazzák a legszélesebb körben alkalmazott rutin laboratóriumokban. Két mikrobiológusnak nevezték el, akik 1930-ban létrehozták a színezést: Alicia Shaeffer és MacDonald Fulton. A technikát azonban néha Wirtz-Conklin-nek nevezik az 1900-as évek két bakteriológusa után.
bázis
A spórák nem foltok a hagyományos foltokkal, mert nagyon vastag falúak. A spórák komplex összetétele megakadályozza a legtöbb színezék bejutását.
Ha a spórát kívülről vizsgálják, akkor a következő rétegeket figyelik meg: először az exosporium van, amely a legvékonyabb és a külső réteg, amelyet a glikoproteinek képeznek.
Ezután következik a kutikula, amely ellenáll a magas hőmérsékletig, majd a peptidoglikánból álló kéreg. Később az alap falát védi a protoplaszt.
A spóra dehidrált struktúra, amely 15% kalciumot és dipikolinsavat tartalmaz. Ezért a legtöbb spórafestési technika a hő alkalmazásán alapszik, hogy a festék behatoljon a vastag szerkezetbe.
Miután a spóra megfestette, nem tudja eltávolítani a festéket. A Shaeffer - Fulton technikában a malachitzöld belép a vegetatív sejtekbe, és hő alkalmazásakor behatol az endoszpórába és az exospókákba.
Vízzel történő mosással a festéket eltávolítják a vegetatív sejtből. Ennek oka az, hogy a malachitzöld festék enyhén bázikus, tehát gyengén kötődik a vegetatív sejthez.
Ehelyett nem tud kijutni a spórából, és végül a bacillust ellenszennyeződött szafraninnal. Ez az alap az érvényes a többi technika számára, amelyben valami hasonló történik.
Spórafestési technikák
A spórafestés elvégzéséhez tiszta tenyészetet kell beszerezni a vizsgálni kívánt gyanús törzsből.
A tenyészetet 24 órán át extrém hőmérsékleten tartjuk, hogy stimuláljuk a mikroorganizmus sporulációját. Ehhez a tenyészetet 44 vagy 48 ° C-os sütőbe vagy hűtőszekrénybe (8 ° C) tehetjük 24 vagy 48 órán keresztül.
Ha túl sokáig hagyják az említett hőmérsékleteken, akkor csak exospórákat figyelnek meg, mivel az összes endospóra már kilépett a bacillusból.
Az idő végén néhány csepp steril élettani oldatot kell a tiszta lemezen helyezni. Ezután a tenyészet egy kis részét elveszik, és finoman eloszlatják.
Ezután hagyjuk megszáradni, rögzítjük a melegben és az alábbiakban ismertetett eljárások egyikével festettem:
Dorner technika
1- Készítsen egy kémcsőbe a sporálódott mikroorganizmus koncentrált szuszpenzióját desztillált vízben, és adjon hozzá azonos mennyiségű szűrt Kinyoun-karbol-fuksint.
2- Helyezze a csövet forrásban lévő vízfürdőbe 5-10 percig.
3 - Egy tiszta lemezen keverje össze az előző szuszpenzió egy cseppjét 10% -os vizes nigrozin oldattal, felforralja és szűrje.
4- Gyengéden hővel gyorsan eloszlatva és szárítva.
5- Vizsgálja meg 100X objektívvel (merítés).
A spórák vörös színűek és a baktériumsejtek sötét szürke háttér mellett szinte színtelennek tűnnek.
Módosított Dorner technika
1- A sporált mikroorganizmus szuszpenzióját eloszlatják egy tárgylemezen és rögzítik a melegben.
2- A mintát egy szűrőpapír szalaggal borítják, amelyhez karbolfuksint adnak. A színezéket 5-7 percig melegítjük a Bunsen égő lángján, amíg a gőzök fejlődnek. Ezután a papírt eltávolítják.
3 - A készítményt vízzel mossuk, majd abszorbens papírral szárítjuk.
4- Fedje le a kenet egy vékony, 10% -os nigrosin filmmel, egy második lemezt használva a nigrosin vagy egy tű eloszlatására.
A spórák és baktériumok által elszíneződött szín ugyanaz, mint a technika állása szerint.
Shaeffer - Fulton vagy Wirtz-Conklin technika
1- Készítsen finom kenetet a sporulált mikroorganizmus szuszpenziójával a lemezen, és rögzítse a melegítéshez.
2- Fedje le a lemezt 5% malachitzöld vizes oldattal (szűrőpapírt helyezhet a lemezen).
3- Melegítse a Bunsen égő lángján, hogy gőzök szabaduljanak fel, és távolítsa el a lángot. Ismételje meg a műveletet 6-10 percig. Ha a malachitzöld oldat túl sokat elpárolog az eljárás során, még többet adhatunk hozzá.
4- Távolítsa el a szűrőpapírt (ha van) és mossa le vízzel.
5- Fedje le a lemezt 0,5% -os vizes szafraninnal 30 másodpercig (a technika egyes változatai 0,1% vizes szafranint használnak, és hagyják 3 percig).
Ezzel a módszerrel a spórák zöldnek és a bacillus vörösnek tűnnek.
Ennek hátránya, hogy a fiatal kultúrák endospórai nem festenek jól, mivel rendkívül tiszta vagy színtelenek. Ennek elkerülése érdekében ajánlatos 48 órás inkubációs tenyészeteket alkalmazni.
Möeller technika
1- Fedjük le a kenet kloroformmal 2 percig.
2- Dobja el a kloroformot.
3- Fedjük le 5% krómsavval 5 percig.
4- Mossa le desztillált vízzel
5- A lapot fabszin-fenikád karbollal borítják, és a gőzök kibocsátásáig a Bunsen égő lángjának vannak kitéve. aztán néhány percre eltávolítják a lángból. A műveletet addig ismételjük, amíg a 10 percet nem fejezi be.
6- Mossuk le vízzel.
7- Színezzen savanyított etanolt (sósav-alkoholt). Hagyja 20 vagy 30 másodpercig.
8- Mossuk desztillált vízzel.
9 - Kontrasztálja úgy, hogy a lemezt metilénkékkel borítja 5 percig.
10- Mossuk desztillált vízzel.
11. Hagyja megszáradni, és a mintát vigyék a mikroszkópba.
A spórák vörös színűek és a bacillák kék színűek. Fontos, hogy ne lélegezzen be a gőzökbe, mivel mérgezőek és hosszú távon rákkeltőek.
Módosított Möeller technika hő nélkül
2007-ben Hayama és munkatársai a Möeller technika módosítását készítették. Kiküszöbölték a festék melegítésének lépését és helyettesítették 2 csepp Tergitol 7 felületaktív anyag hozzáadásával minden 10 ml karbol-fuksin-karbol-oldathoz. Ugyanezeket az eredményeket kapták.
Alkalmazások
A spórák elszíneződése nagyon értékes és hasznos információt nyújt a kórokozó azonosításához, mivel annak jelenléte, alakja, a bacilluson belüli elhelyezkedése és a vegetatív sejt deformálódásának képessége olyan adatok, amelyek a faj irányításához részt vesz egy bizonyos műfajban.
Ebben az összefüggésben érdemes azt mondani, hogy a spórák lehetnek kerek vagy oválisak, elhelyezkedhetnek középen, vagy paracentralis, subminális vagy terminális helyzetben is.

Az endoszpórák és az exoszpórák alakjának és helyzetének vázlata
Példák
- A Clostridium difficile végső helyzetben ovális spórát képez, amely deformálja a bacillust.
- A Clostridium tertium spóra ovális, nem deformálja a bacillust, és a terminál szintjén helyezkedik el.
- A Clostridium tetani endoszpóra végleges és deformálja a bacillust, és így dobképződik.
- A Clostridium botulinum, a C. histolyticum, a C. novy és a C. septicum spórái kerek vagy alatti oválisak és deformálják a bacillust.
- A Clostridium sordelli endoszpóra középső helyzetben van, enyhe deformációval.

Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztõ Panamericana SA
Irodalom
- Hayama M, Oana K, Kozakai T, Umeda S, Fujimoto J, Ota H, Kawakami Y. Javaslat egyszerűsített módszerre a baktérium spórák hőkezelés nélküli festésére - a Moeller módszer sikeres módosítása. Eur J Med Res., 2007; 16 12 (8): 356-9.
- Wikipedia közreműködői. Moeller folt. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. november 3, 03:28 UTC. Elérhető: en.wikipedia.org
- Pérez R, Juárez M., Rodríguez (2011). Mikrobiológiai technikák laboratóriumi kézikönyve. Alaptudományi Tanszék Mikrobiológiai Akadémia. Nemzeti Politechnikai Intézet.
- „Endospórafestéket.” Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. február 25., 10:20 UTC. 2019. január 10., 02:42: en.wikipedia.org
- Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J és munkatársak. (2006). Az Extremadura autonóm közösség munkatársai. Különleges napirend IV. Kötet. Szerkesztõ MAD. Sevilla-Spanyolország, 211–212.
- Silva M., García M., Corrales J, Ponce E. (2006), laboratóriumi technikus szakember, Galíciai Egészségügyi Szolgálat (SERGAS). A konkrét téma napirendje 2. Szerkesztői MAD. Sevilla-Spanyolország, 79–80.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztõ Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiológiai diagnosztika. 12 ed. Argentína. Szerkesztő Panamericana SA
