GIEMSA FOLT: INDOKLÁS, ANYAGOK, TECHNIKA ÉS FELHASZNÁLÁS - BIOLÓGIA - 2026

A Giemsa-folt egyfajta színező klinikai minta, amely sav és bázikus festékek keverékén alapul. Létrehozását Romanowsky munkája ihlette, ahol Gustav Giemsa, az eredetileg Németországból származó vegyész és bakteriológus tökéletesítette azt glicerin hozzáadásával a vegyületek stabilizálására.

Az eredeti Romanowsky technika által generált változások jelentősen javították a mikroszkópos megfigyeléseket, ezért a technikát Giemsa festék nevével kereszteltették meg.

Különböző minták festettek Giemsa-folttal. A. Trypanosoma evansi perifériás vérben. B. Normál vérsejtek. C. Borrelia theileri a perifériás vérben. D. Burkitt limfóma.

Mivel ez egyszerű végrehajtási technika, rendkívül funkcionális és gazdaságos, jelenleg a klinikai laboratóriumban széles körben használják hematológiai kenetek, csontvelő-minták és szövetmetszetek készítéséhez.

A Giemsa festési technika nagyon hasznos citológiai vizsgálatokhoz, mivel lehetővé teszi a specifikus sejtszerkezetek megfigyelését. Ez a módszer megfesti a sejtek citoplazmáit, magjait, nukleoljait, vákuumait és granulátumát, és képes megkülönböztetni a kromatin finom nyomát is.

Ezenkívül szignifikáns változásokat lehet detektálni a mag méretében, alakjában vagy színében, ahol látható a mag és a citoplazma kapcsolat elvesztése.

Másrészt lehetővé teszi az éretlen sejtek azonosítását a csontvelőben és a perifériás vérben, mivel ezek fontosak a súlyos betegségek, például a leukémia diagnosztizálásában. Szintén lehetséges hemoparasites, extra- és intracelluláris baktériumok, gombák kimutatása.

A citogenetikában széles körben használják, mivel lehetséges a sejtek mitózisának tanulmányozása.

A Giemsa-festés alapja

A Romanowsky típusú festékek a savas és a lúgos festékek kontrasztjának használatán alapulnak, hogy megfertőzzék az alap- és a savszerkezetet. Mint látható, a savfestékek affinitással bírnak a bázikus szerkezetek megfestésére és fordítva.

Az alkalmazott alapfesték metilénkék és oxidált származékai (Azure A és Azure B), míg a savfesték eozin.

A sejtek savszerkezetei a nukleinsavak, a szegmentált bazofilok granulátumai, többek között, ezért metilénkékkel festettek.

Ugyanebben az értelemben a sejtek alapvető szerkezete a hemoglobin és néhány granulátum, például a szegmentált eozinofilekben található granulátum; ezeket eozinnal festették fel.

Másrészről, mivel a metilénkékre és azúrkékre metakromatikus színezékek vannak jellemzõk, változtatható árnyalatot adhatnak a különbözõ struktúrákhoz, a polianionok terhelése szerint.

Így sikerül az alap- és savfestékek stratégiai kombinációjával széles színskálát kifejleszteni, az egyes szerkezetek biokémiai tulajdonságai szerint, savas struktúrák esetén sápadt kék, sötét kék, lila és lila színben áthaladva.

Míg az eozin színezete stabilabb, színeket generál a vöröses-narancs és a lazac között.

anyagok

Anyagok a törzsoldat elkészítéséhez

A törzsoldat elkészítéséhez 600 mg porított Giemsa-foltot kell mérni, 500 cm3 acetonmentes metil-alkoholt és 50 cm3 semleges glicerint mérni.

A törzsoldat elkészítése

Helyezze a nehéz Giemsa port egy habarcsba. Ha vannak darabok, azokat be kell permetezni. Ezután adjunk hozzá egy jelentős mennyiségű mért glicerint, és alaposan keverjük össze. A kapott keveréket egy nagyon tiszta borostyánpalackba öntjük.

A maradék glicerint a habarcsba helyezzük. Újra keverjük meg, hogy megtisztítsuk a habarcs falához tapadó maradék színezéket, és öntsük ugyanahhoz az üvegedénybe.

A palackot lezárják és 55 ° C-os vízfürdőbe helyezik 2 órán át. Amíg vízfürdőben van, óvatosan rázza körülbelül fél óránként.

Ezt követően az elegyet hagyjuk lehűlni az alkohol elhelyezéséhez. Korábban a mért alkohol egy részét a habarcsba helyezték, hogy befejezzék a fennmaradó színezék mosását, majd hozzáadják az elegyhez a többi alkohollal együtt.

Ezt a készítményt legalább 2 hétig kell érlelni. A törzsoldat felhasznált részét szűrni kell.

A készítmény szennyeződésének elkerülése érdekében javasoljuk, hogy a folyamatosan használt részét vigye át egy csepegtetővel ellátott kis borostyánpalackba. Minden alkalommal töltsön utána újratöltést.

Anyagok a pufferoldat elkészítéséhez

Másrészt pufferoldatot készítünk, amelynek pH = 7,2, az alábbiak szerint:

6,77 g nátrium-foszfát (vízmentes) (NaHPO ₄), 2,59 g kálium-dihidrogén-foszfát (KH ₂ PO ₄), és desztillált vízzel lemérjük akár 1000 cc.

A színezőanyag végső előkészítése

A végső festési oldat elkészítéséhez megmérjük a szűrt törzsoldat 2 ml-ét és keverjük össze 6 ml pufferoldattal. Keverje hozzá a keveréket.

Egy releváns tény, amelyet figyelembe kell venni, hogy a színezékek előkészítésének technikái a kereskedelmi társaságtól függően változhatnak.

A színezéshez további anyagok szükségesek

A leírt anyagokon kívül színező hidaknak, vízzel vagy pufferrel ellátott pólóknak, tárgylemezeknek vagy tárgyak burkolatának, egy stoppernek kell lennie a színezés időtartamának ellenőrzéséhez, valamint a papírt vagy más anyagot, amely felhasználható a szárításhoz (géz vagy pamut).

Technika

Festési folyamat

1) Festés előtt a minta kenetének készen kell állnia egy tiszta lemezen.

A minták lehetnek vér, csontvelő, szövettani szakaszok vagy cervico-vaginális minták. Ajánlatos, hogy a kenőanyagok vékonyak legyenek, és a színezés előtt 1 vagy 2 órát szárítsanak.

2) Helyezze a színező hídra az összes színes lapot. Mindig ugyanabban a sorrendben dolgozik, és minden lap jól azonosítható.

3) Helyezzen néhány csepp 100% metil-alkoholt (metanolt) a kenetre, és hagyja 3–5 percig hatni, hogy a minta rögzüljön és kiszáradjon.

4) Dobja el a lemezen lévő metanolt és hagyja megszáradni.

5) Szárítás után helyezze el a végső festési oldatot egy csepegtetővel, amíg az egész lap le nem fedődik. Hagyja hatni 15 percig. Egyes szerzők akár 25 percet is ajánlhatnak. Az üzleti háztól függ.

6) ürítse le a foltot, és mossa ki a kenet desztillált vízzel vagy 7,2 pufferoldattal.

7) Egy foltozópapíron hagyja a lemezeket szabadban kiszáradni, függőlegesen egy tartó segítségével elrendezve.

8) Tisztítsa meg a tárgylemez hátulját alkoholos vagy vattacsomóval, hogy eltávolítsa a foltot.

segédprogramok

A Giemsa festési technikát számos területen alkalmazzák, ideértve a hematológiát, a mikológiát, a bakteriológiát, a parazitológiát, a citológiát és a citogenetikát.

Hematológiai

Ezt a foltot használják leggyakrabban. Ezzel a csontvelőben vagy a perifériás vérben található sejtek mindegyike azonosítható. Amellett, hogy megbecsüli az egyes sorozatok számát, képes lehet leukocytosis vagy leukopenia, trombocytopenia stb. Kimutatására.

Mivel érzékeny az éretlen sejtek azonosításában, releváns az akut vagy krónikus leukémiák diagnosztizálásában. Anémia diagnosztizálására is lehetőség van, például sarlósejtes vérszegénység, sarlósejt, többek között.

Mikológia

Ezen a területen gyakran alkalmazzák a Histoplasma capsulatum (intracelluláris dimorf gomba) keresésére a szövetmintákban.

Bakteriológia

A Giemsa-val festett hematológiai kenetekben kimutatható a Borrelias sp olyan betegekben, akiknél a visszatérő láznak nevezett betegség fennáll. A vörösvértestekben gazdag spirochetes található a láz csúcspontján vett mintákban.

Az intracelluláris baktériumok, például a Rickettsia sp és a Chlamydia trachomatis megjeleníthetők a fertőzött sejtekben is.

parazitológiai

A parazitológia területén a Giemsa-festés lehetővé tette a parazita betegségek, például a malária, a Chagas-kór és a leishmaniasis diagnosztizálását.

Az első kettőben a Plasmodium sp és a Trypanosoma cruzi paraziták a fertőzött betegek perifériás vérében láthatók, ezek a betegség stádiumától függően különböző stádiumokban találhatók.

A paraziták vérkeresésének javítása érdekében javasoljuk a Giemsa-festék és a May-Grünwald-festék keverését.

Hasonlóképpen, a bőr leishmaniasisát úgy lehet diagnosztizálni, hogy megvizsgálják a Giemsa-festett bőr biopsziás mintákat, ahol a parazita található.

Citológia

A Giemsa-festést az endocervikális minták citológiai vizsgálatához is használják, bár erre a célra nem a leggyakrabban alkalmazott módszer.

Erőforrások szűkössége esetén azonban felhasználható, hasonló funkcionalitással, mint amit a Papanicolaou technika kínál, és olcsóbban. Ez azonban az elbíráló részéről szakértelmet igényel.

citogenetika

A Giemsa-festés releváns tulajdonsága az, hogy képes erősen kötődni adenin- és timinben gazdag DNS-régiókhoz. Ez lehetővé teszi a DNS megjelenítését a sejt mitózis során, különböző kondenzációs állapotokban.

Ezekre a vizsgálatokra szükség van a kromatikus eltérések, például a kromoszóma különböző régióinak duplikációinak, delécióinak vagy transzlokációinak kimutatására.

A Giemsa folt hatékonyságát bizonyító kutatások

Cannova és munkatársai (2016) három festési technikát hasonlítottak össze a bőr leishmaniasis diagnosztizálásában.

Ehhez egy kísérleti állatból (Mesocrisetus auratus) származó mintákat használtunk, amelyeket kísérleti úton beoltottunk Leishmanias-sel.

A szerzők bebizonyították, hogy a Giemsa folt jobb volt, mint a Pap-mart® és a Gaffney folt. Ezért úgy gondolták, hogy a Giemsa-festék ideális a bőr leishmaniasis diagnosztizálásához.

A szerzők által elért kiváló eredmények annak köszönhetők, hogy a Giemsa keveréket alkotó színezékek kombinációja biztosítja a kedvező kontraszt létrehozásához szükséges feltételeket, lehetővé téve az amizototok szerkezetének egyértelmű megkülönböztetését mind intracelluláris, mind extracellulárisan.

A többi technika (Pap-mart® és Gaffney) szintén megtette, de gyengébb módon, és ezért nehezebb megjeleníteni. Ezért javasoljuk a Giemsa-foltot a leishmaniasis parazitológiai diagnosztizálásához.

Hasonlóképpen, Ramírez és munkatársai (1994) által készített tanulmány a Giemsa és Lendrum foltok érvényességét a kötőhártya-kenőanyagokban a Chlamydia trachomatis azonosításához.

A szerzők megállapították, hogy a Giemsa és a Ledrum foltok azonos specificitással bírnak, de a Giemsa érzékenyebbnek bizonyult.

Ez magyarázza, hogy a Giemsa-foltot miért használják leggyakrabban a chlamydialis fertőzések diagnosztizálására, különösen, ha kevés forrás áll rendelkezésre.

Forrás: PanReac Applyhem ITW reagensek. Giemsa folt. 2. verzió: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Spanyolország.

Javaslatok a jó festéshez

A lapok száradását nem szabad felgyorsítani. Ésszerű idő szükséges arra, hogy kiszáradja a szabadban. Körülbelül 2 óra.

A legjobb eredmény elérése érdekében azonnal színezzük 2 óra elteltével.

Ahhoz, hogy a kenők jobban rögzüljenek és foltosabbak legyenek, a mintát úgy kell elosztani a lemezen, hogy egy vékony és egyenletes réteg maradjon.

Az előnyben részesített vérminta a kapilláris, mivel a kenet közvetlenül a vércseppből készül, ezért a minta nem tartalmaz semmilyen adalékanyagot, ami elősegíti a sejtszerkezetek fenntartását.

Ha azonban vénás vért használnak, akkor az EDTA-t antikoagulánsként kell használni, és nem heparint, mivel a heparin általában deformálja a sejteket.

Gyakori hibák a Giemsa-festésben

Ennek a színezésnek a gyakorlatában hibákat lehet elkövetni. Erre a struktúrák tonalitásának hirtelen megváltozása bizonyítja.

Rendkívül kék színű

Ennek oka lehet:

• Nagyon vastag kenet
• A festési idő túllépése
• Mossa elégtelen módon.
• Reagensek használata jóval a semleges (lúgos) pH felett.

Ilyen körülmények között a következő szerkezetek színei torzulnak, oly módon, hogy a lazac-rózsaszínű festés helyett az eritrociták zölden jelennek meg, az eozinofil granulátum, amelyet téglavörösre kell festeni, kékes vagy szürke lesz, és így tovább eltérés a szokásos hangok szerint.

Túlzottan rózsaszín színű

Ennek oka lehet:

• Nem megfelelő festési idő.
• Tartós vagy túlzott mosás.
• Rossz szárítás.
• Erõsen savas reagensek használata.

Ebben az esetben azok a szerkezetek, amelyek általában kékként festenek, nem lesznek szinte láthatók, míg a rózsaszínű festékek erősen eltúlzott árnyalatúak.

Példa: A vörösvértestek fényes vörösre vagy fényesen narancsszínűre válnak, a nukleáris kromatin halvány rózsaszínű lesz, az eozinofil granulátumok mélyen élénkvörös színűek.

A csapadék jelen van a kenetben

Ennek okai lehetnek:

• Használjon piszkos vagy rosszul mosott fóliákat.
• Ne engedje, hogy a kenet jól megszáradjon.
• Ha a rögzítő oldatot túl sokáig hagyja.
• Nem megfelelő mosás a festés végén.
• A használt színezőanyag nem megfelelő szűrése vagy szűrése nem történt meg.

A morfológiai leletek jelenléte

A morfológiai leletek megjelenhetnek a kenetben, megnehezítve a jelenlévő struktúrák megjelenítését és értelmezését. Ennek oka, hogy:

• Az alkalmazott antikoaguláns típus, például heparin.
• Piszkos, sérült vagy zsíros fóliák használata.

Tárolási mód

Az előkészítés után a festéket szobahőmérsékleten (15-25 ° C) kell tartani, hogy megakadályozzák a festék kicsapódását. Szorosan zárt borostyántartályban kell tárolni.

Irodalom

1. Cannova D, Brito E és Simons M. A festési technikák értékelése a bőr Leishmaniasis diagnosztizálására. Salus. 2016; 20 (2): 24-29.
2. PanReac Applyhem ITW reagensek. Giemsa folt. 2. verzió: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Spanyolország.
3. Clark G. Festési eljárások (1981), 4. lépés. Williams & Willkins.
4. Alkalmazott klinikai kémia. Giemsa-folt az in vitro diagnosztikához. Forgalmazó: cromakit.es
5. I. Ramírez, Mejía M, García de la Riva J, Hermes F és Grazioso C. A Giemsa és Lendrum foltok érvényessége konjunktív kenetekben a Chlamydia trachomatis azonosítására. Bol of Sanit Panam. 1994; 116 (3): 212-216.
6. Casas-Rincón G. Általános mikológia. 1994. Venezuelai Központi Egyetem 2. kiadása, könyvtári kiadások. Venezuela Caracas.
7. "Giemsa folt." Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2017. szeptember 1., 01:02 UTC. 2018. december 6, es.wikipedia.org.