KINYOUN FESTÉS: INDOKLÁS ÉS TECHNIKÁK - BIOLÓGIA - 2025

A Kinyoun festés egy olyan festési technika, amelyet baktériumok és paraziták ellenálló sav-alkohol megfestésére használnak. A Ziehl-Neelsen színezésének módosításából született; Mindkét technikát ugyanúgy értelmezik, de két elemben különböznek: a fő reagens előállításában és abban, hogy a Kinyoun-technika nem használ hőt.

Ezért hidegen módosított Ziehl-Neelsen vagy Kinyoun hidegfoltnak is nevezik. Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atipikus mycobacteriumok, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris és Cyclosporas cayetanensis festésére javallt.

A Cryptosporidium parvum Kinyoun folttal festett. Punlop Anusonpornperm, a Wikimedia Commonsból

Érdemes megjegyezni, hogy a Nocardia ezzel a módszerrel gyengén fest, mivel részlegesen savas-alkohol-rezisztens, tehát ehhez a nemhez módosul a módszertan.

A hideg Kinyoun-technikát viszont kombinálták a Didier által módosított trikróm-technikával a kokcidia (Cryptosporidium parvum és Isospora belli) és a mikrosporidia spóra (Enterocytozoon bieneusi és Encephalitozoon intestinalis) kimutatására.

bázis

A fő festési reagens a karbolfukszin vagy a karbolfuksin, amelynek a tulajdonsága, hogy kötődik a karboi savakhoz a mikobaktériumok és egyes paraziták lipidben gazdag viaszos sejtfalában (mycolic savak).

Ezt a kötést nem ellensúlyozza a savas fehérítő; ezért a mikroorganizmusokat sav-gyorsnak tekintik.

A Ziehl-Neelsen módszerrel ellentétben - amely hővel rögzíti a festéket - a Kinyoun technika esetében ez a lépés nem szükséges, mivel az ehhez a módszerhez előállított karbolos fukszin oldat nagy koncentrációban fenolt tartalmaz.

A fenol feloldja a lipid anyagot a sejtfalban, lehetővé téve a karbolfukszin festék bejutását. Miután a festék behatolt, a savas alkoholos mosás ellenére is rögzített marad.

Ilyen módon a sav-gyors mikroorganizmusok a jellegzetes vörös színűvé válnak, míg minden, ami nem savas-gyors, elszíneződik és kékké válik.

Technika

anyagok

- Módosított carbol fukszin.

- Alkoholsav.

- Metilénkék.

Kinyoun carbol fuchsin előállítása

- Alapvető fukszin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Desztillált víz: 100 ml.

Az alapvető fuksint lassan fel kell oldani az alkoholban, folyamatosan keverve. Ezt követően a kristályosodott fenolt vízfürdőben megolvasztják 56 ° C-on. Feloldódás után 8 ml-t adunk a fent elkészített fukszin-oldathoz.

A savas alkohol előállítása

- Koncentrált sósav: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Meg kell mérni, össze kell keverni és össze kell keverni.

A metilénkék kontrasztfesték előállítása

- Metilénkék: 0,3 g.

- Desztillált víz: 100 ml.

Megmérjük és feloldjuk.

Kinyoun festési technika

1- Készítsen kenyeret közvetlenül a mintából, amely lehet többek között köpet, tüdőfolyadék, vizelet üledék, cerebrospinális folyadék vagy széklet; vagy primer tenyészközegben kifejlesztett tiszta telepekből nyert mikroorganizmusok szuszpenziójából.

2- Rögzítse a kenet hővel.

3- Helyezze a kenet a festőhídra, és fedje le az előkészített kinyoun-karbol-fukszin reagenssel. Hagyja pihenni 3–5 percig.

4- Mossa le desztillált vízzel.

5 - Fehérítsük savas alkohollal 3 percig, majd mossuk újra desztillált vízzel.

6- Fehérítse meg újra savas alkohollal 1 vagy 2 percig, amíg a színeződés már nem folytatódik.

7- Mossuk desztillált vízzel, és engedjük leereszkedni, a tárgylemezt függőleges helyzetbe helyezve.

8- Fedjük le a készítményt metilénkékkel és hagyjuk hatni 4 percig.

9 - Mossa le desztillált vízzel, és hagyja megszáradni.

10- Vizsgálja meg 40X, majd 100X hőmérsékleten.

A sav-gyors mikroorganizmusok elszíneződésének javítása és felgyorsítása érdekében adjon hozzá 1 csepp nedvesítőszert (például Tergitol No. 7) 30–40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin oldathoz.

Egyes laboratóriumok a metilénkék kontrasztfestéket élénkzöldre vagy pikrinsavra cserélik; az első zöld színű a háttér, a második pedig sárga színű.

Különleges Kinyoun technika a Nocardias számára

A Nocardia nemzetségbe tartozó baktériumok elszíneződésének javítása érdekében a Kinyoun festéket módosítják. A technika a következő:

1- Fedjük le a kenetét Kinyoun karbol fuksinnal 3 percig.

2- Mossuk desztillált vízzel.

3 - Röviden elszínezze 3% -ban elkészített sav-alkohollal, amíg nem lesz több színezék.

4- Mossuk ismét desztillált vízzel.

5- Fedjük le a készítményt metilénkékkel és hagyjuk 30 másodpercig hatni.

6- Mossuk desztillált vízzel, és hagyjuk megszáradni.

Kombinált carbol-fukszin és trikróm technika, módosította Didier

Ez a technika a székletmintáknak a coccidia és a Microsporidium spóra-spóra elemzésére egyidejűleg ajánlott. A követendő eljárás a következő:

1- Fedjük le a kenetét Kinyoun carbol fuksinnal 10 percig.

2- Távolítsa el a színezéket és mossa le desztillált vízzel.

3 - Fehérítse 30 másodpercig sósav-alkohollal.

4- Mossuk ismét desztillált vízzel.

5- Fedjük le a kenet trikróm-oldattal 30 percig 37 ° C-on.

6- Mossuk desztillált vízzel.

7- Fehérítsük 10 másodpercig ecetsav-alkohollal.

8- Mossa ki a kenet 30 másodpercig 95% etanollal.

QA

Pozitív kontrollként elkészítjük a Mycobacterium tuberculosis törzsekkel ellátott keneteket, és az elkészített reagensekkel megfestjük, hogy ellenőrizzük, hogy a baktériumok megfelelő színű-e (vörös-fukszia).

A negatív kontrollok akkor is felhasználhatók, ha a savas alkoholtól eltérő bármilyen törzset gyorsan elkennek, így ellenőrizve, hogy a teljes minta kontrasztos színű-e.

Kinyoun technika a Ziehl-Neelsen technikához képest

A Kinyoun technika egyszerűbb, mivel kiküszöböli a hevítési lépést, de fő előnye, hogy hosszú távon elkerüli a nagyon mérgező és rákot okozó gőzök kibocsátását. Ezért a Kinyoun folt biztonságosabb a festő személyzet számára.

Fontos figyelembe venni, hogy ügyelni kell arra, hogy a reagensek ne kerüljenek közvetlen érintkezésbe a bőrrel, mivel maró hatású és a fehérítő gyúlékony.

Ami a hátrányokat illeti, a negatív kenet nem feltétlenül jelenti azt, hogy a szervezet nincs jelen. Ezenkívül a celluláris törmelék hamis pozitív eredményt eredményezhet, ami zavart okozhat a diagnózisban.

Referencia

1. Alkalmazott klinikai kémia. (2016). BK Kinyoun Kit.Elérhető: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun-folt és két Coccidia HIV-ben. Medical Journal MD. 2011-ben; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D., Weissfeld A (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentína. Szerkesztő Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztõ Panamericana SA
5. Wikipedia közreműködői. "Kinyoun folt." Wikipédia, a szabad enciklopédia. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 2018. február 8. Web. 2019. január 5..
6. A Combol, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Festési technika megvalósítása a Coccidia és Microsporidia egyidejű diagnosztizálására. A Köztársaság Egyetemi Higiéniai Intézete. Montevideo. Uruguay. Elérhető a következő címen: higiénia.edu.uy