MÁJUS GRÜNWALD-GIEMSA FOLT: INDOKLÁS, TECHNIKA ÉS FELHASZNÁLÁS - BIOLÓGIA - 2024

A May Grünwald-Giemsa vagy Pappenheim folt egy differenciálfestési technika, amely keveri a Giemsa és a May Grünwald reagenseket. A perifériás vér és a csontvelő kenetek normál és abnormális vérsejtjeinek megkülönböztetésére, valamint szövettani metszetek és citológiai minták festésére használják.

Mindkét reagens - a Giemsa és a May Grünwald - Romanowsky típusú festésből származik. Ez a módszer a savas és a bázikus festékek kombinációján alapul.

A szegmentált neutrofileket és a mileocytákat kimutató krém krónikus myeloid leukémia esetén, a mai Grünwald Giemsa festékkel festetve. Dr. Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) a Wikipedia.org oldalon.

Giemsa továbbfejlesztette a technikát az eozin, metilén-kék és származékaik keverékének glicerinnel történő stabilizálásával. Ehelyett May Grünwald eozint és metilénkéket alkalmaz, oldószerként metanolt használva. Ez a stratégiai kombináció kiváló eredményeket hozott.

Noha a sejtek morfológiájának megfigyelése szempontjából a Giemsa és a Wright foltokhoz hasonlóan viselkedik, ez a technika javítja az előzőket, javítva a malária, a Chagas-kór, a leishmaniasis és a trichomoniasis okozta paraziták festését.

Ezenkívül bebizonyította, hogy nagyon hasznos módszer a spermatikus folyadék citológiai vizsgálatához. Nemcsak a sperma morfológiai tulajdonságainak bemutatásával emelkedett ki, hanem azáltal is, hogy nagy hatékonysággal lehetővé tette a leukociták, az epiteliális sejtek és a spermatogenezis sejtek differenciálódását.

bázis

A technika a Romanowsky foltok megalapozását követi, amelyekben a savas színezékek szelektív affinitással bírnak a bázikus sejtkomponensekhez, és a savas komponensek vonzzák az alapvető foltokat.

Más módon magyarázva, mind a sejtszerkezetek, mind a színezékek pozitív vagy negatív elektromos töltéssel rendelkeznek; mint a visszatérő díjak és a különféle díjak vonzzák.

Például az olyan alapfestékek, mint a metilénkék, pozitív töltésűek, és vonzzák a negatív töltésű struktúrákat. Ez az oka annak, hogy ez a festék megfesti azokat a magokat, amelyek gazdag DNS-ben és RNS-ben vannak, amelyek negatív töltésű foszfátcsoportokat tartalmaznak.

A szegmentált bazofil granulátumot és az RNS-t tartalmazó mononukleáris fehérvérsejtek citoplazmáit szintén megfestettük.

Hasonlóképpen, a savfesték negatív töltést hordoz, ezért kötődik pozitív töltésű struktúrákhoz, például eritrocitákhoz és szegmentált eozinofil granulátumhoz. Ami a szegmentált neutrofilek granulátumát illeti, ezek mindkét festéket rögzítik.

Számos színezőanyag

Ebben a technikában az ortokromatikus és a metakromatikus festékek reakcióinak kombinációja létezik párhuzamosan. Az ortokromatikumok (eozin és metilénkék) kötődnek a sejtszerkezethez, amelyhez rokonok, és stabil színű, amely nem változik.

Másrészt, a metakromatikumok (a metilénkék azúrkék A és az azúrkék származékai) eredeti színét megváltoztatják, mihelyt hozzákapcsolódnak a meghatározott szerkezethez, és különféle árnyalatok is lehetnek.

Végül, a május Grünwald-megoldás által megtett lépés megköveteli a víz jelenlétét, mivel ennek hiányában a festék áthatol a szerkezetekben, de nem rögzül. Ahhoz, hogy ez megtörténjen, a festéknek polárissá vagy ionizálódóvá kell válnia, és így képes lesz kicsapódni és megkötni a rokon szerkezeteket.

Technika

anyagok

- Dia diák.

- Színező hidak.

- May-Grünwald megoldás.

- Giemsa folt.

- Desztillált víz.

Május Grünwald festett koncentrált oldatot

0,25 g eozin-metilénkék-t (May Grünwald szerint foltot) ki kell mérni és feloldani 100 ml metanolban. Ezután a készítményt 1 órán át keverjük, és 24 órán át hagyjuk pihenni. Az idő végén szűrjük.

A módszer alkalmazásához a May Grünwald festéket az alábbiak szerint kell hígítani: 200 ml hígított festékhez mérjünk 30 ml koncentrált oldatot, adjunk hozzá 20 ml pufferoldatot és 150 ml desztillált vizet, pH-jára 7,2-7,3.. Később összekeverjük és szűrjük.

Giemsa foltkoncentrátum

Mérjünk be 0,5 g azúr-eozin-metilénkék-t (Giemsa szerint foltot), feloldunk 50 ml metanolban és 50 ml glicerinnel az elegyhez.

A módszer végrehajtásához hígítsuk fel 1:10 pufferoldattal és hagyjuk 10 percig pihenni. Szűrhető, ha szükséges.

A pufferoldat elkészítése pH = 7,2 mellett

Meg kell mérni őket:

- 40 mg kálium-dihidrogén-foszfát (KH2PO4).

- 151 mg dinátrium-hidrogén-foszfát-12-hidrát (Na2HPO4).

Mindkét vegyületet feloldjuk 100 ml vízben.

Vér vagy csontvelő kenetfestő eljárás

Kétféle mód van: a klasszikus és a gyors.

Klasszikus mód

1. Fedjük le a kenõket 2-3 percre a hígított May-Grünwald oldattal.
2. Mossuk pufferolt desztillált vízzel az előző oldat eltávolításához.
3. Fedjük le ugyanazzal a pufferolt mosóoldattal és hagyjuk 1 percig tartani. Az ötlet az, hogy az előző festéket rögzítik a szerkezetekre, és ezzel egyidejűleg a sejteket hidratálják.
4. Adjunk hozzá 12 csepp hígított Giemsa tinktúrát a pufferolt vízhez, és fújjuk össze, hogy keverjük és homogenizáljuk. Hagyja pihenni 15-20 percig.
5. Mossuk ki a keneteket pufferolt desztillált vízzel, és helyezzük szárazra.
6. Fókuszáljon és nézzen meg a festett vérsejteket könnyű mikroszkóp alatt a 40X objektív segítségével. Szükség esetén a 100X használható.

Gyors mód

1. Fedjük le a kenet hígított május Grünwald-folttal 1 percig.
2. Mossuk pufferolt desztillált vízzel.
3. Fedjük le pufferelt vízzel, és hagyjuk 1 percig pihenni.
4. Adjuk hozzá a hígított Giemsa-foltot és hagyjuk 5 percig tartani.
5. Mossuk pufferolt desztillált vízzel és hagyjuk megszáradni.

Az itt ismertetett technikák iránymutatást jelentenek, de figyelembe kell venni, hogy az eljárások és a festési idők a reagenseket forgalmazó kereskedelmi vállalkozástól függően változnak. Javasoljuk, hogy kövesse az egyes kereskedelmi házak által szigorúan megjelölt lépéseket.

Spermatikus folyadék kenetének színezésére szolgáló technika

1- Fedjük le a kenet vékony rétegével a May Grünwald oldattal 4 percig.

2- Távolítsa el a színezéket és mossa le desztillált vízzel.

3- Helyezzen egy réteg hígított Giemsa-t (1:10) desztillált vízbe 15 percre.

4- Távolítsa el a festéket és mossa le desztillált vízzel.

5- Hagyja megszáradni, és figyelje a mikroszkóp alatt.

Várható színek a májusi Grünwald Giemsa folttal

Fontos előírások

A technika megköveteli, hogy a reagensek és a mosóoldatok pH-ja 7,2–7,3 legyen, oly módon, hogy a festékek affinitása a sejtszerkezetekre ne torzuljon, és a várható végső szín ne változjon.

Alkalmazások

Ezt a technikát a klinikai laboratóriumok használják perifériás vér és csontvelő kenet, szöveti szakaszok és citológiák festésére.

A hematológiai területen ez a módszer létfontosságú a sejtek alakjának, méretének és számának rendellenességeinek vizsgálatában. Nagyon értékes eszköz bizonyos betegségek, például leukémiák és anémiák diagnosztizálására.

Ezenkívül kiemelkedően hasznos, ha parazitákat keres hematológiai (Plasmodium sp és Trypanosoma cruzi) vagy szövettani (Leishmanias sp) területeken.

Hüvelyi citológia

A hüvelyi citológiát illetően ez a módszer különösen előnyös a Trichomonas vaginalis megfigyelésére. Ez fontos megállapítás, mivel jelenléte a carcinoma in situ képeket szimulálja, amelyek később eltűnnek, amikor az élősködőt eltávolítják.

Sperma minta

Ideális eszköz a spermaminták vizsgálatához, mivel értékes információkat szolgáltat a sperma minőségéről.

Az általa kínált adatoknak elsősorban a számmal és a morfológiával, valamint az esetlegesen jelenlévő és létfontosságú sejtekkel, például csírasejtekkel, leukocitákkal és hámsejtekkel kell összefüggniük.

Ezzel az elemzéssel leírhatók a fejben, a nyakban, a középső részben és a fődarabban lévő spermiumokban megfigyelt rendellenességek.

Ezen túlmenően elősegítik a hemospermia (vörösvértestek jelenléte a spermában) és a leucospermia vagy a piospermia (megnövekedett leukociták száma a spermában) eseteit.

Irodalom

1. Costamagna S, Prado M. A friss teszt validálása, May Grünwald-Giemsa és Gram foltok és táptalajok a Trichomonas vaginalis diagnosztizálására. Parasitok. 2001; 25 (1-2): 60-64. Kapható: scielo.
2. Merck KGaA laboratórium. Május Grünwald eozin-metilénkék mikroszkópos vizsgálathoz.
3. "May-Grünwald-Giemsa folt." Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. november 15., 14:37 UTC. 2019. január 8., 04:29: en.wikipedia.org
4. Üvegkémiai Panreac laboratórium. Reagensek szövettani technikákhoz, hematológiához és mikrobiológiához. Elérhető a glasschemicals.com oldalon
5. Retamales E, Manzo V. Ajánlás a vérkenet festésére a hemogram leolvasásához. Országos és Referencia Biomedical Laboratory. Chilei Közegészségügyi Intézet.
6. Sarabia L. Spermiogram a WHO kritériumai szerint. Fejlesztési Anatómia és Biológia Program. Orvostudományi Iskola. A Chilei Egyetemen. Elérhető a pp.centramerica.com oldalon