WRIGHT FOLT: INDOKLÁS, ANYAGOK, TECHNIKA ÉS FELHASZNÁLÁS - BIOLÓGIA - 2026

A Wright- folt egy festési technika, amelyet James Homer Wright, az amerikai patológus 1902-ben készített, a Romanowsky-folt alapján. Mivel a Romanowsky folt instabil volt, Wright oldószerként és fixálószerként metanolt alkalmazott.

Ez a színezés polikromatikus, ami azt jelenti, hogy több színt generál, attól függően, hogy a festék elnyeli-e a színt. Ezt a festési technikát széles körben alkalmazták a fehérvérsejtek differenciális számának elvégzéséhez, valamint a vörösvértestek, a vérlemezkék és a leukociták morfológiájának vizsgálatához a perifériás vérben és a csontvelőben.

Különböző perifériás vérkenők festettek Wright folttal. A. Akut leukémia B. Plasmodium vivax az eritrocitában. C. Plasmodium falciparum, makrogametocita. D. limfocita

Alkalmazása nagyon fontos, mivel a vér különböző sejtvonalaiban rendellenességek láthatók, megkönnyítve a betegségek, például a leukémia vagy a bakteriális vagy parazita fertőzések diagnosztizálását.

Talán ezek a leggyakoribb alkalmazások, amelyekben ezt a technikát használják, azonban nem csak ezek. Használható továbbá a vér és a csontvelő kivételével, mint például az orrkibocsátás, a széklet nyálkahártyája, a köpet, a bőrminták.

Wright foltjának indoklása

Wright foltja Romanowsky foltjából született, amely savas festék (eozin Y) metil-alkohol oldatából és bázikus festékből (metilénkék), valamint ezek oxidációs termékeiből áll.

A Wright festékében alkalmazott festékkeverék a Romanowsky néven ismert hatást váltja ki, vagyis gyönyörű lila színű színt ad a leukociták és a neutrofil granulák magjaihoz, míg a vörösvértestek rózsaszínűek.

A Wright-féle festék jellemző színtartományának megadásáért felelősek a kék B és az eozin Y. A megfigyelt hatás függ a színezékek kémiai szerkezetekhez való kötődésétől, valamint a kék B és az eozin Y kölcsönhatásaitól.

Savas szerkezetek, például nukleinsavak, nukleáris fehérjék és egyes sejttípusok reaktív éretlen citoplazma rögzítik a kék B-t (bázikus folt).

Míg az alapvető struktúrák, például a hemoglobin, a szegmentált eozinofil granulátumok, többek között a sejtes szerkezetek között, az eozin Y-t (savas festék) kötik.

A festési eredményt különböző tényezők befolyásolhatják, mint például a Wright festék pH-ja, a puffer és a mosóoldat; valamint a festési és rögzítési idő.

Ezért a reagensek előállításának minden lépése döntő fontosságú, és minden részletre figyelemmel kell elvégezni.

anyagok

Wright foltja. 100 ml-re szükséges:

Mérjünk ki 0,3 g Wright-foltot, mérjünk meg 97 ml metanolt és 3 ml glicerint.

Készítmény

Helyezzen egy habarcsba nagy mennyiségű Wright színezéket, és fokozatosan tegye be a glicerint, amíg a por teljesen fel nem oldódik.

Ezt követően a metanolt hozzáadjuk, összekeverjük és borostyán üvegbe öntjük.

Használat előtt az oldatot óvatos mozdulatokkal rázzuk össze és szűrjük.

Pufferolt pufferoldat

Egy liter desztillált vízben, 3,76 g dinátrium-hidrogén-(Na ₂ HPO ₄ 2H ₂ 0), plusz 2,1 g kálium-dihidrogén-foszfát (KH ₂ PO ₄) adunk hozzá.

Könnyen keverjük, amíg az összes beépített reagens fel nem oldódik. Állítsa a pH-t 7,2-re. Öntsük egy üvegedénybe és tartsuk szobahőmérsékleten.

A színezéshez további anyagok szükségesek

Ezenkívül a színező technika elvégzéséhez más anyagok szükségesek is, ezek: tárgylemezek vagy tárgyak borítása, színező híd, vízzel vagy mosópufferrel ellátott pólók, időzítő a színezési idő megtartására és néhány szárító anyag (nedvszívó papír, géz vagy pamut).

Wright folt alkotóelemei

metanol

Az alkohol (metanol) rögzíti a vér kenetét a lemezen.

Alapvetően koaguláns redukáló, dehidratáló és rögzítő reagens. Ezért annak feladata, hogy koagulálja a fehérjéket és oldhatatlanná tegye őket, de nem denaturálja őket.

A laboratóriumokban a metanol a legszélesebb körben alkalmazott kenetrögzítő reagens, mivel jobb eredményeket nyújt, mint az etanol. Az ideális koncentráció 99%.

csappantyú

A puffer (pufferolt oldat) funkciója a festék pH-jának beállítása vagy fenntartása, mivel a 7,2-re beállított pH elengedhetetlen ahhoz, hogy a sejtszerkezetek képesek legyenek a színezékek megfelelő felszívására.

Másrészt a metanolos rögzítési lépés kiszárítja a sejteket, és a puffer segít azok rehidratálásában.

Eozin (Y)

Az eozinnak affinitása van az építőelemekkel, mert savfesték. Kétféle eozin ismert, amelyek nagyon hasonlóak egymáshoz, annyira, hogy mindkettő használható, és ugyanazt az eredményt kapja.

Az egyiket eozin Y-nek, sárga eozint vagy tetrabróm-fluoreszceint, a másikat eozin B-nek, kékes eritrozin B-nek vagy dibromodinitrofluoreszceinnek nevezik. Az eozin Y azonban a leggyakrabban alkalmazott.

A festék legfontosabb tulajdonsága a negatív polaritás, ez vonzza a pozitívan töltött sejtszerkezeteket.

Metilénkék

Ez az alapvető színezés. Fő tulajdonsága a metakromézia, azaz nem minden struktúrát festenek azonos színűnek, ez függ a festendő szerkezetek kémiai összetételétől.

Néhányan világos vagy sötétkék, mások sötét lila vagy halvány lila színűek.

Technika

1 - Végezze el a minta szétszórását úgy, hogy egy vékony film maradjon, akár a diára, akár a fedőlapra.

2 - Hagyja megszáradni a levegőben kb. 2 órán át.

3 - Helyezze a száraz kenet a festékhídra vagy a tálcára úgy, hogy a minta terjedése felfelé nézzen.

4 - Fedje le a lemezt a Wright folttal cseppenként, amíg az egész felület el nem fedődik. Hagyja bekapcsolva 5–8 percig.

5-A foltnak teljesen le kell fednie a tárgylemezt anélkül, hogy az a szélekre ömlött volna. Ha a színezés során elpárologni kezd, adjon hozzá néhány további cseppet.

6 - Ezután adjon hozzá azonos mennyiségű lengéscsillapítót, fújjon egy kicsit, amíg a jellegzetes fémes fény meg nem jelenik. Idő 10-15 perc.

7-Mossuk meg csapvízzel, enyhe folyadékba helyezve, amíg a lap rózsaszínűvé nem válik.

8 -A alkoholban átitatott gézzel távolítsa el a tárgylemez hátoldalához tapadó festéket.

9 - Hagyja, hogy a kenet nagyon jól megszáradjon, mielőtt az merülő olajat a mikroszkóp alatt megnézné.

Hasznosság

Hematológiai

Ideális perifériás vérkenők festésére, vastag vérfoltok és sejtek csontvelő-mintákból való vizsgálatára.

A festék-kombináció kémiai tulajdonságai miatt a sejtszerkezetek könnyen felismerhetők, és meg lehet különböztetni a különböző típusú sejteket.

Orrfolyás

Ez a technika nagyon hasznos az orrkibocsátás sejtjeinek (hámsejtek, szegmentált eozinofilek, polimorfonukleáris sejtek) azonosításához az allergiás nátha diagnosztizálásában.

parazitológiai

Ebben az értelemben hasznos volt a Leishmania sp vizsgálatához a bőrfekélyek alatti szubkután celluláris szövetek histiocytáin belül. Hasonlóképpen, a székletminták leukocitáinak azonosítására (széklet leukogram).

Ebben az esetben az orvos számára érdekes tudni, hogy a székletben leukocitózis polimorfonukleáris vagy mononukleáris. Ez a székletleukogram megállapítása irányítja, hogy bakteriális vagy vírusos-e.

Másrészt a vérben keringő paraziták megtalálhatók az eritrocitában vagy a plazmában. A keresett paraziták a Plasmodium spp, a Trypanosoma cruzii és a filariae, és az állatgyógyászatban hasznosak a Theileria equi és a Babesia caballi, a bebeziosis okozóinak, különösen a lovak keresésében.

A Wright és a Giemsa folt lehetővé teszi a haemoparasites megkülönböztetését a normál sejtkomponensektől. Kétféle spreader használható erre:

Szétterítse vékonyra

A vér vékony filmként terjed a dián. Wright folttal festett, feltárva a mag és a citoplazma tulajdonságait.

Vastag csepp

Ez a módszer a paraziták nagyobb mennyiségű vérben való jelenlétének vizsgálatára szolgál.

Ehhez nagy csepp vért helyeznek a tárgylemezre. Ha egyszer ott van, akkor azt defibrillálnia kell, és egy másik dia széle segítségével nagyobb és nagyobb köröket kell készítenie a közepétől kifelé.

Végül ahhoz, hogy megfigyelhessük a parazitákat a vastag kenetben, az eritrocitákat vízzel kell lizálni.

Légzőszervi fertőzések

Légúti szinten ez a technika is hasznos, mivel a köpet, a hörgőmosás vagy a bronhoalveolaris mintában jelen levő sejtek fontosak a diagnózis megállapításához.

Hasonlóképpen itt lehet megkülönböztetni a polimorfonukleáris sejteket és a mononukleáris sejteket.

Bakteriológia

Ennek a módszernek a használata a bakteriológiában korlátozott, mivel nem jó baktériumok megfestésére, ezért a festéshez más speciális festési technikákat alkalmaznak.

A Chlamydia trachomatis zárványtesttel rendelkező hámsejtek keresésére azonban alkalmazzák húgycső vagy endocervicalis nyálkahártya kenetekben, bár fel kell ismerni, hogy ez nem a legjobb módszer erre.

Megfigyelhető a spirális jellegű baktériumok, például a Borrelia burgdorferi, a vörösvértestek között a fertőzött betegekben, valamint az Ehrlichia sp morulae vagy zárványtestei a limfociták, monociták vagy neutrofilek citoplazmájában egy vérkenetben.

Mikológia

A Histoplasma capsulatum egy patogén gomba, amelyet gyakran különféle szövetminták mikroszkópos megfigyelésével diagnosztizálnak, Wright folttal megfestetve.

Hogyan figyelik meg a vérminta szerkezetét a Wright folttal?

Forrás: Retamales E, Mazo V., Chilei Közegészségügyi Intézet. Javaslatok a vérkenet festésére a hemogram leolvasása érdekében.

Javaslatok a jó festéshez

A vérminták lemezeinek spontán módon levegőn kell megszáradni. A kenetnek a lehető legvékonyabbnak kell lennie a festék jobb rögzítéséhez és a túlfestés elkerüléséhez.

A kiváló minőségű festés érdekében a kenet elkészítésétől számított két órán belül tanácsos foltot festeni. Másrészt az ideális minta kapilláris vér, antikoaguláns nélkül.

Ha azonban vénás vért használnak, akkor azt antikoagulánsként, EDTA-ként, és nem heparinnal kell használni, mivel ez utóbbi deformálhatja a sejtszerkezeteket.

Az elkészített színezék romlásának elkerülése érdekében száraz helyen kell tárolni.

A mosási folyamat során semleges pH-ra beállított víz használata ajánlott.

Végül tanácsos időnként megvizsgálni a laboratóriumban alkalmazott festési módszereket.

Ezt a minták vagy kiterjesztett minták megfestésével, minőség-ellenőrzés útján hajtják végre. Ez a lépés fontos, mivel biztosítja a festés megfelelő előkészítését és a festési idő megfelelő szabványosítását.

Ha a mintalap rosszul színes, akkor vannak problémák, amelyeket meg kell oldani.

Általános hibák a Wright festésnél

Nagyon sápadt folt

A nagyon sápadt kenet oka általában egy nagyon rövid festési idő vagy a túlzott mosás. Ezt a festékkel való érintkezés idejének meghosszabbításával vagy a mosási idő csökkentésével lehet korrigálni.

Színezőanyag kicsapódik

A festék csapadékának jelenléte a kenetben több oka lehet, azonban a leggyakoribb ok: szűrhetetlen festék használata, festés egyenetlen festőhidakon, porral vagy zsírral szennyezett lapok használata, nemmosás teljes festés.

Rendkívül vörös vagy kék kenet

A puffer felel a festék pH-jáért. A megadott (savas) pH-nál alacsonyabb színezékek nagyon vöröses keneteket eredményeznek.

Ha a festék pH-ja (lúgos) felett van, rendkívül kékes kenetet kap.

Tárolási mód

A reagenst szobahőmérsékleten kell tárolni.

Irodalom

1. Gutiérrez V. Összehasonlító vizsgálat a Wright festési módszer és az Elisa teszt között a kutya Ehrlichiosis diagnosztizálására San Honroula városában, Honduras. 2008. évi diplomamunka az állatorvosi diploma megszerzéséhez. Guatemala San Carlos Egyetem.
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Alapvető foltok a mikrobiológiai laboratóriumban. Kutatás a fogyatékossággal kapcsolatban. 2014 3 (1): 10-18.
3. - Wright foltja. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. május 18., 12:05 UTC. 2018. december 8., 20:37
4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. A Babesia spp. vadászati ​​lovakban, Córdoba (Kolumbia). Rev. udcaactual kettős információ. 2013 16 (2): 451-458.
5. Forbes B, Sahm D., Weissfeld A (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentína. Szerkesztő Panamericana SA
6. Retamales E, Mazo V. A Chilei Közegészségügyi Kormány Intézete. Javaslatok a vérkenet festésére a hemogram leolvasása érdekében.