NEGATÍV FESTÉS: INDOKLÁS, TECHNIKA, ELŐNYÖK ÉS HÁTRÁNYOK - BIOLÓGIA - 2026

A negatív festés egy speciális színezési módszer, amely a kapszula jelenlétét kimutatja egyes mikroorganizmusokban, elsősorban a Streptococcus pneumoniae, a Klebsiella pneumoniae és a Cryptococcus neoformans esetében, klinikai mintákból vagy tiszta tenyészetekből.

A negatív festés alkalmazásához általánosan használt közvetlen minta a cerebrospinális folyadék. Ez a módszer a meningitis, különösen a Cryptococcus neoformans feltételezhető diagnosztizálásának gyors alternatívája.

A. Indiai tintával festett fogászati ​​borkő, B. A Cryptococcus neoformans varigánsan kapszulázott, mivel a természetben előfordul, nigrosin felhasználásával. C. Cryptococcus neoformans var gatti egy vastag kapszulával, a parazita formájában, a nigrosin felhasználásával. D. Cryptococcus neoformans enyhén hígított indiai tintával. Gisell Quinde, a Wikimedia Commons / CDC-től, a Wikimedia Commons-n keresztül / Photo Credit: Tartalomszolgáltatók: CDC / Dr. Leanor Haley, a Wikimedia Commons segítségével

Hasonlóképpen, ez a folt felhordható a köpetre és a steril folyadékokra, valamint a fiatal tiszta tenyészetekből nyert törzsekre. Ez a technika nigrozint vagy indiai tintát használ a végrehajtásához; ezért nagyon egyszerű és olcsó módszer, amely rövid időn belül nagy diagnosztikai értékkel bír.

Ebben az értelemben bármely laboratórium képes elvégezni ezt a festést. Természetesen a laboratóriumnak hozzáértő személyzettel kell rendelkeznie, amely képes felismerni az izolált vagy bimbózó Cryptococcus neoformans élesztõket, és megkülönböztetni azokat a leukocitáktól és tárgyaktól, amelyeket a minta tartalmazhat.

bázis

A nigrosin és az indiai tinta hasonlóan működnek; ezért a két anyag bármelyike ​​felcserélhetően használható.

Ezt a technikát negatív festésnek nevezzük, mert ellentétes módon működik a többi festési módszerrel szemben. Ebben a változatlan marad az a szerkezet, amelyet keresnek vagy látni akarnak; vagyis mikroorganizmusok.

Ezért a festés alapja az, hogy a kenet alját sötét színben festelik. Ebben a forgatókönyvben a kapszulázott struktúrák világos vagy színtelen színűek.

Az élesztők általában finomítottak, átlátszó halo-hal körül, amely megfelel a kapszulanak. Ennek oka az, hogy az indiai tinta és a nigrosin olyan anyagok, amelyek nem képesek áthatolni a poliszacharidon, amely az élő mikroorganizmusok kapszuláját alkotja.

Érdemes megjegyezni, hogy a közvetlen mintában jelenlévő egyéb struktúrák, mint például a leukociták vagy a vörösvértestek sem jutnak be.

Ha azonban a mikroorganizmusok halottak, akkor a festék behatolhat bennük, tehát ez a festés a mikroorganizmusok életképességének értékeléséhez is hasznos lehet.

Technika

anyagok

Nigrosine

A Nigrosine a fekete színének köszönheti nevét. Ez egy szintetikus anyag, amelyet a szerves vegyületek keverékének melegítésével nyernek, például nitrobenzin, anilin és anilin hidroklorid formájában, katalizátor (vas vagy réz) felhasználásával az említett reakcióban.

Kínai tinta

A kínai tinta olyan anyag, amelyet főként az ázsiaiak használnak íráshoz, műalkotások készítéséhez és monokróm festéshez. Nagyon népszerű a kínai kultúrában.

A tintahal festékből és porított faszénből keverve nyerik, amely alacsony gyantafák égési terméke.

Szintén előállítható a koromból a szénhidrogének (növényi olajok) égetéséből, egy fehérje-zselatinnal együtt, amely megfelelő konzisztenciát biztosít a szénrészecskék kicsapódásának elkerülése érdekében.

A mintavételre vonatkozó előírások

- Nem igényel böjtöt.

- A CSF, a köpet vagy a steril folyadék mintának legalább 1 ml térfogatot kell tartalmaznia, és szobahőmérsékleten azonnal át kell vinni a laboratóriumba.

- A CSF és a steril folyadék mintákat szakorvosnak kell vennie.

- Ez is lehet egy gyanús törzs tiszta tenyészete, amely kapcsolódik a fent említett kórokozókhoz.

A technika végrehajtása közvetlen mintákkal

- A mintákat centrifugálni kell, majd a felülúszót eldobják, és az üledéket le kell venni.

- Egy csepp centrifugált anyagot (üledéket) és egy csepp indiai festéket vagy nigrozint helyezünk egy tiszta lemezen.

- Jól össze kell keverni, és fedőlapkal le kell fedni, hogy a csepp vékony filmként terjedhessen anélkül, hogy az élek átmennének.

- Ezt követően a készítményt felhelyezik a mikroszkópra.

- Ha a készítmény túl sötét, vízzel hígítható.

A technika végrehajtása a kultúrából származó törzsekkel

- A fiatal tenyészet nagyon kis részét vetőmaggal veszik be és feloldják egy csepp indiai tintával, amelyet előzőleg egy tiszta tárgylemezre helyeztek.

- Egy tetőtáblát helyeznek el.

- A mikroszkópban megfigyelhető 10X, majd 40X értéknél.

A kolónia egy részét desztillált vízben is feloldhatja, majd vegyen be egy csepp, és keverje össze az indiai tintával. Ilyen módon az előkészítés nem lesz annyira vastag, lehetővé téve a szerkezetek elszigetelten történő megfigyelését; ha vannak tömeg, akkor nem fogják jól megfigyelni.

Egy másik módszer a következő:

- Helyezzen egy csepp szuszpenziós tenyészetet a tárgylemez egyik végére.

- Tegyen egy csepp nigrozint ugyanabba a végbe, és keverje össze.

- Egy másik tárgylemez segítségével terjessze a mintát úgy, mintha hematológiai kenet lenne.

- Hagyja száradni, és figyelje a mikroszkóp alatt.

Mikroszkóp megfigyelés

Először 10X-es objektummal kell összpontosítania, hogy széles képet kapjon a mezőről. Ezt követően meg kell keresni, hogy van-e szabad hely; ha vannak, fókuszáljon 40X-ig a részletek megtekintéséhez.

Előny

- Könnyű végrehajtani.

- Ez egy olcsó technika.

- Ez a módszer nem követeli meg, hogy a kenet hővel vagy vegyi anyaggal rögzítve legyen; ezért a mikroorganizmusokat torzítás nélkül figyeljük meg.

- A friss készítményt nem kell szárítani, tehát azonnal megfigyelhető, és gyorsan eredményez.

Hátrány

Összeszerelés után a friss készítményeket azonnal meg kell vizsgálni; Ha hagyják száradni, már nem lehet megfigyelni őket, és újat kell felszerelni.

Szövetfestés indiai tintával

Egy másik funkció, amelyet az indiai tinta képes ellátni, a patológia laboratóriumokban működik. Ezt sebészeti úton extrahált szövetmintákra alkalmazzák, hogy megjelöljék a daganat rezekciós szélét.

A megjelölt szövetet ecetsavval permetezzük. Ez anyagként szolgál és megakadályozza a tinta kiszivárgását, amikor a szövetet rutinszerűen feldolgozzák a biopszia előállításához.

Az eljárás során a szövetet alkoholban és xilolban mossuk, majd paraffinviaszban áztassuk. Ez a jelölés útmutatást nyújt a patológus számára a szövet megfigyelésekor, jelezve, hogy hol van a műtéti reszekciós margó vagy más érdekes pont.

Irodalom

1. «Nigrosina». Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2017. július 11., 22:46 UTC. 2019. január 6., 16:56: en.wikipedia.org
2. "Kínai tinta". Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. október 1., 03:08 UTC. 2019. január 6., 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J és munkatársak. (2006). Az Extremadura autonóm közösség munkatársai. Különleges napirend IV. Kötet. Szerkesztõ MAD. Sevilla-Spanyolország, 211–212.
4. Silva M., García M., Corrales J, Ponce E. (2006), laboratóriumi technikus szakember, Galíciai Egészségügyi Szolgálat (SERGAS). A konkrét téma napirendje 2. Szerkesztői MAD. Sevilla-Spanyolország, 79–80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiológiai diagnosztika. 12 ed. Argentína. Szerkesztő Panamericana SA