BIURET: INDOKLÁS, REAGENSEK, ELJÁRÁS, FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2025

A biuret egy reagens, amelyet hosszú és rövid láncú fehérje meghatározására használnak. Különösen az analitikai kémia és a vizeletvizsgálat területén alkalmazzák az összes fehérje koncentrációjának a szérumban, plazmában és vizeletben való vizsgálatához.

Bizonyos patológiákban a fehérjeérték növelhető vagy csökkenthető. A hipoproteinémia tünetei általában vesebetegekben, alultáplált és krónikus fertőzésekben szenvedő betegeknél fordulnak elő.

A Biuret-reakcióban képződött komplex kémiai szerkezete Pozitív Biuret-teszt. Forrás: Yikrazuul / flickr

Míg a hiperproteinémiát olyan patológiákban, mint többszörös myeloma, szisztémás lupus erythematosus, bakteriális endokarditisz, bakteriális meningitis, Waldenstrom makroglobulinémia, megfigyelték.

Másrészt, a fehérje jelenléte a vizeletben az albuminnak a vese általi szűréséből adódik. Ez a kóros viselkedés, amelyet meg kell vizsgálni.

Ebben az értelemben a Biuret nagyon hasznos, mivel sok más minta között lehetővé teszi a szérumban, plazmában és vizeletben a fehérjék mennyiségének meghatározását.

Még a Biuret is felhasználható fehérjék jelenlétének és koncentrációjának vizsgálatára rosszul felfedezett mintákban vagy ismeretlen összetételű mintákban. Ezért széles körben használják a kutatási területen.

A Biuret-teszt a peptidkötések kimutatásán alapul. A vizsgálatot lúgos közegben végzik. A mintának legalább két peptidkötést tartalmaznia kell a lila-lila komplex kialakulásához. A komplexet a kötések és a réz-ion egyesülése képezi.

bázis

A Biuret-reagens kálium-hidroxidból, réz-szulfátból, valamint nátrium- és kálium-tartarátból áll. A közeg lúgosítására nátrium-hidroxidot használunk, mivel ez a körülmény elengedhetetlen a reakció lejátszásához.

A fehérjékkel reagáló anyagok réz-szulfát, míg a nátrium-tartarát funkciója nem engedi réz-hidroxid képződését, amely hajlamos a kicsapódásra és zavarja a reakciót.

Ha a mintában peptidkötésű anyagokat (polipeptideket vagy fehérjéket) találnak, a teszt pozitív lesz.

A reakciót akkor tekintik pozitívnak, ha az oldat lilavá válik. A színt legalább két peptidkötés, amelyek tartalmaznak CO-NH csoportot, és a rézkationok között komplex képezi.

Az ibolya komplex kétféle módon alakítható ki: az egyik a fémhez kötődő amidcsoportok protonjai veszteségéből adódik (depronotáció), a másik pedig a szabad és kötődő oxigén- és nitrogén elektronok egyesítése révén. rézvel.

A reakció intenzitása és színe a protein típusától függően változhat.

A tesztet kvalitatív vagy kvantitatív módon lehet elvégezni. Minőségi formában pozitívnak vagy negatívnak számítják. Míg kvantitatív formában a koncentráció spektrofotometriás módszerrel mérhető.

A reakció leolvasása 540-560 nm között van. A szín intenzitása közvetlenül arányos a peptidkötések koncentrációjával a mintában.

reagensek

-20% nátrium-hidroxid (NaOH)

- 1% réz-szulfát-pentahidrát (CuSO ₄ 5H ₂ O)

-Kevert nátrium- és kálium-tartarát-tetrahidrát (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

A biuret reagens stabilitása

-Hűtve kell tartani.

Folyamat

Technika

- Helyezzen 100 μl elemezni kívánt mintát vagy standardot egy kémcsőbe.

- Adjunk hozzá 2 ml nátrium-hidroxidot.

-Mix nagyon jól.

- Adjon hozzá 5 ml Biuret reagenst.

-Keverje össze és hagyja 25 percig pihenni szobahőmérsékleten, fedje le és védje a fénytől.

- Figyelembe kell venni a színképződést, vagy sem, és mérni spektrofotometriásan.

Kalibrációs görbe

A szarvasmarha-szérum-albumin standardként használható a kalibrációs görbe elvégzéséhez. Különféle koncentrációkat készítenek belőle. Például 25, 50, 75, 100, 125 és 150%.

A reakciót az összes ismert koncentrációval beállítottuk, és az abszorbanciát 540 nm hullámhosszon leolvastuk. Az ismert koncentrációk és az abszorbancia leolvasás adatai alapján elkészítjük a kalibrációs görbét.

A feldolgozott minták mindegyik meghatározására vagy tételére ajánlott egy standard felszerelése. A szarvasmarha-szérum albumin 0,1–2 mg / ml használható kalibrációs standardként.

A méréseket spektrofotométerrel hajtjuk végre 540 nm-en.

A linearitás 12 g / dl koncentrációig teljesül.

Interferencia

Anyagok, amelyek zavarják a Biuret-tesztet

Noha ez nem túl gyakori, meg kell jegyezni, hogy egyes anyagok zavarhatják a teszt végrehajtását. Például az ammónia jelenléte gátolhatja a színképződést.

Hasonlóképpen, más anyagok - például egyes pigmentek - ugyanolyan hullámhosszon képesek abszorbeálni.

Másrészt, interferencia akkor léphet fel, ha a peptidkötéstől eltérő anyag komplexet képez a rézsóval. Példa: néhány szénhidrát és bizonyos lipidek.

Abban az esetben, ha az analizálandó minta valamilyen típusú csapadékot tartalmaz, azt a teszt felszerelése előtt szűrni kell vagy centrifugálni kell.

Olyan anyagok, amelyek nem zavarják a Biuret-tesztet

A tesztet nem befolyásolja:

-Bilirubin 20 mg / dl koncentrációig.

-Hemoglobin 750 mg / dl koncentrációig.

-Dextran 30 g / l koncentrációig

-Trigliceridek 4000 mg / dl koncentrációig.

Előny

-Egyszerű módszer a végrehajtására.

- Ez egy gazdasági próba.

- Nagyon specifikus a fehérjékkel szemben.

-Kis zavarás.

hátrányok

Rossz érzékenységgel képes kimutatni az alacsony fehérjemennyiséget. A Fuentes és munkatársai által végzett munka megerősíti, hogy a Biuret-teszt módszer kimutatási határértéke 1 mg / ml fehérje, és mennyiségi meghatározási határa 3 mg / ml.

Az amazóniai egyetemen végzett egyéb kutatások azonban sokkal alacsonyabb értékeket jelentenek. A vizsgálat szerint a kimutatási határérték 0,020 mg / ml, a mennyiségi meghatározási határérték 1,33 mg / ml.

Alkalmazások

A Biuret reagenst vagy tesztet a fehérjék meghatározására használják klinikai és nem klinikai mintákban rutin és kutató laboratóriumokban.

Patológiák, amelyek a

Számos patológiában fontos meghatározni az összes fehérje koncentrációját a klinikai mintákban, amely emelkedett vagy csökkent lehet.

Emelkednek:

-Myeloma multiplex, -Szisztémás lupus erythematosus, - bakteriális endokarditis, -Baktériás meningitis, Többek között a Waldenstrom makroglobulinémiája.

Csökkent:

-Veseelégtelenség, - súlyos alultápláltságú emberek, - többek között krónikus fertőzésekkel rendelkező betegek.

Klinikai minták

A leggyakoribb klinikai minták a szérum, a plazma és a vizelet. A fehérjék normális értéke a szérumban vagy a plazmában 6,0-8,8 gr / dl.

A fehérjék koncentrációja a vizeletben felnőtteknél nem haladja meg a 150 mg / 24 órát.

Vizelet fehérje / kreatinin arány normál érték

Csecsemők: <0,50 mg

2 éves és annál idősebb gyermekek: index: 0,20 mg

Felnőttek: <0,2 mg

Nem klinikai minták

A Biuret reakció sokféle nem klinikai mintában alkalmazható, például tejtermékeknél, antivenomnál vagy bármilyen ismeretlen anyagnál, amelyeknél meg kívánja vizsgálni a fehérjék jelenlétét.

Irodalom

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). A mangrove-osztriga (Crassostrearizophorae) folyadékkivonatainak fizikai-kémiai jellemzése és fehérjetartalma. Cuban Journal of Chemistry, 26. (1), 66-74. Letöltve: 2019. június 26-án, a http: //scielo.sld webhelyről
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. A mangómag (Mangifera indica L.) mandula funkcionális jellemzése Revista Ciencia en Desarrollo. 2015-ig; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2019. június 19., 16:37 UTC. 2019. június 26., 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. A Biuret módszerének standardizálása az INS Nemzeti Biológiai Termékek Központjában előállított többértékű antiotropikus szérumban lévő összes fehérje mennyiségi meghatározására. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Elérhető a következő címen: repositorio.ins.gob.pe
5. Winer Laboratories. Összes fehérje. Kolorimetrikus módszer az összes fehérje meghatározására a szérumban és a plazmában. Elérhető a wiener-lab.com.ar oldalon