KOAGULÁZ-TESZT: INDOKLÁS, ELJÁRÁS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

A koaguláz-teszt laboratóriumi technika, amely a koaguláz enzim jelenlétének feltárására szolgál. Ennek az enzimnek a tulajdonsága a koaguláló plazma. 1903-ban Loeb volt az első, aki leírja ezt az enzimet.

Ezt a tesztet grampozitív, kataláz-pozitív kókuszokon hajtják végre, lehetővé téve a Staphylococcus aureus törzsek megkülönböztetését a többi sztafilokokk többi részétől, mivel ez az egyetlen klinikai jelentőségű mikroorganizmus, amely azt termeli.

Mindkét kép pozitív koaguláztesztet mutat. Forrás: Bal oldali kép: Philippinjl. Jobb kép: A fotó készítette MSc. Marielsa Gil.

Ebben az értelemben a Staphylococaceae család azon tagjait, amelyek negatív tesztek mutatnak, gyakran koaguláz-negatív Staphylococcus-nak nevezik.

A S. aureus kivételével vannak olyan törzsek is, amelyek koagulázt termelhetnek, ilyenek például a Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius és S. delphini.

Az első három azonban klinikai jelentőséggel bír állatgyógyászati ​​szinten, és nagyon ritkán fordulhat elő emberben előforduló fertőzések kórokozójaként, míg az S. delphini csak a tengeri környezetben található meg.

Ezenkívül könnyen megkülönböztethetők, mivel az S. hyicus és az S. intermedius nem erjesztik a mannitot, az S. schleiferi spp. Koagulák nem erjesztik a maltózt vagy a trehalózt, míg a S. aureus ezeket a szénhidrátokat fermentálja.

A koaguláz enzim jelenléte kapcsolódik a törzsek virulenciájához. Ez az elmélet azonban szétesik, mivel megfigyelték más olyan virulens koaguláz-negatív fajokat, amelyek képesek jelentős fertőzéseket kiváltani.

bázis

Értelmezés

Agglutináció 5-20 másodpercen belül (erős pozitív teszt).

20 másodperc és egy perc között változó agglutináció (késleltetett pozitív teszt).

Egy perc múlva némi agglutináció (kétes bizonyítékok). Ajánlott megismételni a tesztet, vagy megerősíteni cső módszerrel.

Nincs agglutináció (negatív teszt).

Eredmény az SSF-fel. Mindig negatívnak kell lennie, ha automatikusan pozitív, a teszt eredményét érvényteleníti.

-Tube koaguláz teszt

anyagok

-Steril tesztcső

-Vérplazma

-Mári fürdő 37 ° C-on.

Technika

Pipettázzunk 0,5 ml plazmát egy 12 x 75 kémcsőbe egy steril pipettával, töltsük be a platinahurkot 2–4 tiszta kolóniával, hogy 18–24 órán át szilárd tenyészetből tanulmányozzuk és feloldjuk a plazmában. óvatosan keverjük össze és inkubáljuk 37 ° C-on 4 órán át.

Az első órában megvizsgálja a csövet rázás nélkül, csak óvatosan döntse meg. Ha a vérrög még mindig nem látható, akkor 30 percenként megfigyelhető, amíg a négy óra nem teljes. Ha 4 óra elteltével továbbra is negatív, akkor akár 24 órán át is hagyhatja, de szobahőmérsékleten. Figyelje meg és jelentse az eredményt.

A tapasztalatok alapján néhány mikrobiológus azt javasolja, hogy a vizsgálat elvégzéséhez használjon 500 μl baktériumszuszpenziót egy 18 órás tenyésztés folyékony közegben.

Úgy tűnik, hogy gyorsabb és megbízhatóbb eredményeket kínál, mint amikor a kolóniákat szilárd táptalajokból emulgeálják, különösen akkor, ha a vérbankból nyert emberi plazmát használtak.

A húslevest tartalmazó törzsek felhasználása megkönnyíti a humán antisztafilokokális ellenanyagok jelenlétét a plazmában, amelyek gátolhatják a koaguláz hatását.

Értelmezés

Ha olyan vérrög látható, amely magában foglalja az összes folyadékot (teljes véralvadás), vagy olyan vérrög, amelyben a maradék folyadékban nincs semmi (részleges véralvadás), akkor pozitív tesztnek kell tekinteni.

Ha nem alakul ki vérrög, azaz a szuszpenzió homogén marad, a teszt negatív.

-Koaguláz-teszt fibrinogénnel

A fibrinogént ugyanúgy használják, mint a plazmát, és mind a tárgylemez, mind a cső vizsgálatához használják. A plazmában leírtak szerint járjon el, és ugyanúgy értelmezze.

Használat

A Staphylococcus aureus megkülönböztetésére szolgál a koaguláz-negatív staphylococcusoktól.

QA

Rendelkezzen pozitív kontrollként felhasználható S. aureus törzs friss tenyészeteivel. Az S. epidermidis törzs negatív kontrollként szintén rendelkezésre áll.

korlátozások

-A pozitív tesztet nem szabad inkubálni 24 órán át, mivel az S. aureus fibrinolizint termel, amely feloldja a vérrögöt.

- Megbízható teszthez friss vagy újonnan feloldott plazmát, valamint friss baktériumtenyészetet (18–24 óra) kell használni. Ez elkerüli a hamis negatívumokat.

-A tesztet negatív és pozitív kontrollal együtt kell elvégezni.

- Néhány szilárd táptalaj zavarhatja a koaguláz-tesztet. Nem ajánlott sós mannit-agar telepek használata.

-Ha citrátos plazmát használnak, a hamis pozitív eredmények elkerülése érdekében javasolt 5 egység heparint helyezni 1 ml plazmába. Ennek oka az, hogy a S. aureus kivételével néhány mikroorganizmus lebonthatja a citrátot, és a plazmát alvadhat. Ebben az esetben tanácsos elvégezni Gram és kataláz teszt elvégzését.

-A csővizsgálat során fontos a reakciót 30 percenként ellenőrizni, mivel vannak olyan S. aureus törzsek, amelyek magas koncentrációjú fibrinolizint termelnek, és gyorsan hígítják az újonnan kialakult vérrögöt. Kerülje a hamis negatívokat.

-A teszt ellenőrzésekor kerülje a cső hirtelen rázását, ez tönkremehet az alvadás kialakulásának megindulását, amelyet később nem lehet helyreállítani, és téves negatívumokat okozhat.

Irodalom

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok a klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztő Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
4. Pro-Lab laboratóriumok. A nyúl koagulálja a plazmát. Elérhető a következő oldalon: pro-lab.com
5. „Koaguláznegatív.” Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2019. február 12., 04:23 UTC. 2019. április 22., 15:50 a wikipedia.org.