- Történelem
- Neubauer kamra jellemzői
- Alkalmazások
- Hogyan kell használni?
- A minta előkészítése
- Neubauer kamra szerelés
- Számolás
- számítások
- -Szorzó tényező
- Hígítás
- Kamara magassága
- Számított terület
- Képletek és számítások
- hibák
- Ajánlást
- Irodalom
A Neubauer kamra, hematométer vagy hemocitométer laboratóriumi eszköz, amely egy speciális vastag üveglapból áll. Ezt a kamerát bizonyos sejttípusok, például vörösvértestek, fehérvérsejtek és vérlemezkék számlálására használják, noha spórák, sperma, paraziták stb.
Néhány nagyon sajátos tulajdonságot mutat, mivel 3 zónából áll, egy központi a számlálási és két támogatási zónából. Mindegyik kamrának két számlálózóna vagy keresztirányú része van, az egyik a tetején, a másik az alján.
Neubauer-kamra. Forrás: SantiBadia. Szerkesztett kép.
Ezek több osztású rács formában. A számlálási területek a középső négyzetek, amelyek mindkét rács négy sarkában találhatók, plusz a központi négyzet.
A kamera összeszerelését nagyon óvatosan kell elvégezni, mivel minden részlet befolyásolja a sejtszámot. Számos hibát lehet elhozni, de ha ezek bármelyike bekövetkezik, a fényképezőgépet le kell szerelni, meg kell tisztítani és összeszerelni kell. A fő hibák a következők:
A kamra túlcsordulása vagy alulteljesítése, hagyja a kamrát kiszáradni, megkísérel eltávolítani a fölösleges folyadékot gézzel, megdönti a kamrát szállításkor, piszkos vagy nedves kamrát tölt ki, többek között nem keveri össze a hígítást vagy a mintát. Ezek a hibák irreális értéket eredményeznek.
Történelem
A Neubauer kamra precíziós eszköz, és a gyártási folyamat szigorú minőség-ellenőrzésen megy keresztül. Ebből jött létre a pontos számlálás részecskék vagy alakos elemei per mm 3, mint például a sejtek különböző folyadékokat. Finom grafikája gyémánt ceruzával van faragva.
Neubauer kamra jellemzői
A teljes kamra olyan normál tárgylemez méretű, hogy azt a mikroszkóp szakaszára lehessen helyezni.
A kamra három központi téglalap alakú felületből áll (a, b, c). A „b” zónában található az R zóna vagy a számlálási zóna, amelyet retikulumnak is nevezünk. Az egyik a kamera mindkét oldalán, elválasztva a "d" zónát.
A Neubauer-kamra grafikus rajza. Forrás: Gyakorlati útmutató a hematológiához. A Venezuelai Carabobo Egyetem Bioanalízisiskola.
Minden rács egy csiszolt terület, amely tartalmazza a vésett számlálási területet. Egy négyzetből áll, amelynek felülete 9 mm 2, és belsőleg 9 négyzetre van osztva, egyenként 1 mm 2 felülettel. A négy sarok négyzetet 16 kisebb négyzetre osztjuk (0,0625 mm 2 terület).
Ezeket a rácsokat egymást keresztező milliméter vonalak alkotják, amelyek tökéletesen ábrázolt rácsok, amelyek a megadott mérésekre korlátozódnak. Ezeket a vonalakat egy gyémánt hegy véste.
Továbbfejlesztett Neubauer retikulum. Forrás: A venezuelai Carabobo Egyetem Bioanalízisiskola Hematológiai gyakorlati útmutatója.
A négy oldal megfelel a számlálási területnek. Ezen oldalakon vagy sarkokban számolják a sejtek (vörösvértestek és leukociták) többségét, míg a vérlemezkék a középső részben.
A középső zónának több osztódása van: egy 1 mm 2 négyzetből áll, amely 25 négyzetre oszlik, amelyek mindegyike 0,04 mm 2 felülettel rendelkezik. Ezeket viszont 16 rácsra osztják, amelyek területe 0,0025 mm 2.
A továbbfejlesztett Neubauer retikulum leírása. a) A sarkok négyzete, b) központi tér, c) a központi tér medián négyzete. Forrás: A venezuelai Carabobo Egyetem Bioanalízisiskola Hematológiai gyakorlati útmutatója.
Az „a” és „c” zóna támasztékként szolgál egy hematometrikus tárgylemeznek vagy hematiméternek nevezett speciális burkolat-tárgy elhelyezésére.
A fólia és a számláló felület közötti magasság 0,1 mm. A számlálódoboz felületének mérése, valamint a kamra magassága és a minta hígítása a végső számításokhoz szükséges adatok.
Alkalmazások
A sejtek számlálására használják. Különösen hasznos a hematológia területén, mivel lehetővé teszi a 3 vérsejt sorozat megszámolását; azaz vörösvértestek, fehérvérsejtek és vérlemezkék.
Használható azonban más területeken is, például sperma, spóra, baktérium vagy más fontos elem számlálására, a minta típusától függően.
Hogyan kell használni?
A minta előkészítése
A sejtszámlálás elvégzéséhez általában egy korábbi hígításból indítunk. Példa: a fehérvérsejtek számlálásához készítsen 1:20 hígítást Turk folyadékával. A hígítást alaposan összekeverjük, mielőtt a pipettát betöltjük és a Neubauer kamrát felhelyezzük.
Vannak idők, amikor az 1:20 hígítás nem elegendő a számoláshoz. Például olyan betegeknél, akik bizonyos típusú krónikus leukémiában szenvednek. Ezekben az esetekben magasabb hígításokat kell végrehajtani, például 1: 100.
Ha viszont a szám nagyon alacsony, mint a súlyos leukopéniák esetén, kisebb hígításokat lehet végezni a minta koncentrálására. Példa: 1:10 hígítást végezhet.
A végrehajtott változások befolyásolják a számításokat.
Neubauer kamra szerelés
A Neubauer kamrát úgy állítják össze, hogy a hematometrikus tárgylemezt a középső részre helyezik. Mindkettőnek nagyon tiszta és száraznak kell lennie. A lamellák felhelyezéséhez a széleket fogja meg, és óvatosan dobja a kamerára.
Ezt úgy töltik ki, hogy a Thoma automata pipetta vagy pipetta csúcsát 35 ° -os szögbe helyezik a betöltési zóna szélére. A folyadékot simán ürítik ki, és a töltési területet kapilláris töltik meg. Ez mindkét oldalról megtörténik a két kereszttartó betöltésére.
A retikleket nem szabad túlterhelni, és folyadékot sem szabad megtagadni. A terhelésnek pontosnak kell lennie. Fontos, hogy a feltöltés homogén módon történjen, azaz ne legyenek buborékok.
A kamra összeszerelése után 2 percig hagyja pihenni, hogy a sejtek az aljára csapadjanak ki, és megkönnyítsék megjelenítésüket és számolásukat.
A pihenőidőt követően felhelyezik a fénymikroszkóp színpadára megfigyelés céljából. Először 10X objektívvel fókuszál, és ha szükséges, akkor 40X-re áll.
A megjelenítés javítása érdekében csökken a fény átjutása a mikroszkópból. Ehhez a kondenzátort leengedjük és a membránt kissé becsukjuk.
Számolás
A fehérvérsejtek vagy leukociták számához a négy medián sarok négyzet teljes felületét és az egyes retikulumok központi négyzetét meg kell számolni.
A számolás a bal felső sarokban lévő négyzetből indul. Az első sor első négyzetétől kezdődik, azaz balról jobbra, amíg az ellenkező végét el nem éri.
Ott megy le, és jobbról-balra néz vissza, amíg el nem éri a másik végét, és így tovább, az egyes rácsok celláit cikcakkos módon számolják. Megszámoljuk az egyes medián négyzetek 16 rácsát.
A cellák kétszer történő számolásának elkerülése érdekében vannak szabályok a cellákra, amelyek az egyes rácsok határvonalain helyezkednek el. A bal és a felső sor cellait megszámoljuk, a jobb és az alsó sor celláit figyelmen kívül hagyjuk.
A kézi cellás számlálónak rendelkezésre kell állnia, hogy a kezelõ annyiszor nyomja meg az eszköz gombot, ameddig vannak megfigyelt cellák. A számláló használatával a kezelő számíthat anélkül, hogy fel kellene néznie a mikroszkopikus mezőből. A számolás végén látni fogja a megszámolt cellák teljes számát.
számítások
A számításokhoz többféleképpen is eljárhat. Megszámolható egyetlen gratulátum, vagy mindkettő megszámolható, és mindkettő átlaga. Ebben a két helyzetben a megszámlált cellákat szorozni kell egy tényezővel, amely ebben az esetben 40 lenne. Így kapjuk a teljes mm3-es számot.
Ha azonban a két rácsot megszámolják, és az átlagot nem veszik figyelembe, akkor azt más tényezővel kell megszorozni, ebben az esetben 20-zal.
-Szorzó tényező
Így lehet kiszámítani a szorzási tényezőt.
A számítások során különféle adatokat vesznek figyelembe, beleértve a hígítási titert, a kamra magasságát és a megszámolt területet.
Hígítás
A szokásos hígítás 1:20 a leukociták számához.
Kamara magassága
A kamra és a vérsejt lemez közötti magasság 0,1 mm.
Számított terület
Ha 5 négyzetet számolunk 1mm 2 területről, ez azt jelenti, hogy a teljes számítási terület 5mm 2. Ezeket az adatokat szorozni kell a kamra magasságával, hogy megkapjuk a teljes térfogatot. Vagyis 5 mm 2 x 0,1 mm = 0,5 mm 3.
Képletek és számítások
A rendelkezésünkre álló adatokkal azt mondják:
Ha 0,5 mm 3 - ben van -, - - számítják a sejtek számát
1 mm 3 -ben --- lesz - X sejtek száma
X cellák száma = (x 1-nél számított cellák száma) / 0,5 mm 3
De a hígítást is figyelembe kell venni. Ezért a képlet a következő:
(számított sejtek száma x 1) x 20 / 0,5 mm 3
Végül összefoglalva: a megszámlált sejtek számát szorozzuk meg 40-nel. Így kapjuk a leukociták / mm3 értékét.
Ha a két retikolt megszámolják, akkor a megszámolt területre vonatkozó adatok megváltozzák, amely ebben az esetben 10 négyzet, azaz 10 mm 2 lenne. És a teljes számított térfogata 1 mm3. A képlet a következő lenne:
(számított cellák száma x 1) x 20/1 mm 3
Ezért ebben az esetben a szorzási tényező 20 lenne.
hibák
-Ha a kamera behelyezésekor túllépik vagy meghaladják folyadékkal, a kamera magassága változhat. Ennek eredményeként a szám magasabb, mint az igazi. Ha megpróbálja eltávolítani a felesleget gézzel vagy pamuttal, ez egy hatalmas hiba. Ez a művelet a sejtek koncentrálódását idézi elő, növelve a számot.
-Ha rosszul töltik be, akkor a szám alacsonyabb lesz, mint az igazi.
-Ha a kamerát felhelyezik és hagyják megszáradni, már nem lehet számolni, mert rossz eredményeket fog eredményezni.
-Ha a minta hígítását nem keverik jól össze a kamra betöltése előtt, akkor fennáll a hiba az olvasás során, mivel a sejtek nem lesznek homogénen eloszlva. Ezért alacsonyabb vagy nagyobb lesz a sejtek koncentrációja, attól függően, hogy a mintát a folyadék felületéről vagy a cső aljáról veszik-e.
-Abuborékok jelenléte csökkenti a retikulumba belépő folyadék mennyiségét, akadályozva a sejtek megfelelő megjelenítését és eloszlását. Mindez jelentősen befolyásolja az eredményeket.
- A számolás során ne nézzen fel a mikroszkópról, amíg minden nagy négyzet kitöltődik, hogy elkerülje az eltévedést.
-A hibának egyik oka a kamera megdöntése szerelés után. Ezért a mikroszkóp fokozatát óvatosan fel kell emelni.
Ajánlást
Ha valamilyen okból rendellenességet észlel a kamra töltésében, akkor javasoljuk, hogy szerelje szét az előkészületet, tisztítsa meg a kamrát és szerelje újra a semmiből.
Vigyázzon a fényképezőgép tisztításakor, hogy ne karcolódjon a keresztszőr. Másrészt, tisztában kell lennie azzal, hogy a hematometrikus tárgylemez finom és törékeny. A nem megfelelő kezelés megtörheti.
A számolás megkezdése előtt ellenőrizze, hogy a cellák eloszlanak-e. A nem megfelelő mintakeverés vagy -hígítás következtében a sejtek egyenetlen eloszlása következik be. Ha ez megtörténik, a szerelést meg kell ismételni.
Az egyik módszer annak megismerésére, hogy a cellák jól eloszlanak-e, ha összehasonlítjuk az egyes nagy négyzetek számát, az egyes négyzetek által számolt cellák száma nem szabad túlságosan különbözni egymás között.
-Ha a fehérvérsejtszám meghaladja az 50 000 mm 3-t, akkor tanácsos a számot megismételni, nagyobb hígítás mellett.
-Ha megváltoztatja a hígítást, újra kell számolnia a szorzótényezőt, mivel ez befolyásolja a képletet.
Irodalom
- Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. A spermakoncentráció összehasonlítása Makler-kamra és Neubauer-kamra alkalmazásával. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Kapható: scielo.
- Neubauer-kamra. (2018, március 27). Wikipédia, a szabad enciklopédia. A konzultáció dátuma: 2019. június 23, 04:10, az es.wikipedia.org oldalról
- Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Alternatív Neubauer-kamaraszámlálási módszer alkalmazása a Trichomonas vaginalis koncentrációjának meghatározására. Rev. Cub Med Trop, 2001; 53 (3): 180-8. Elérhető a következő címen: researchgate.net
- Gómez-Pérez Roald E. A spermogramm elemzése. Venez Rev. Endocrinol. Metab. 2007-ben; 5 (2): 19-20. Kapható: ve.scielo
- A Carabobo Egyetem Bioanalízisiskola hematológiai gyakorlati útmutatója. Venezuela, 1998