EC TÁPTALAJ: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2025

Az EC leves vagy Escherichia coli leves szelektív folyékony táptalaj. Ezt a tápközeget a szokásos módszerek az össz- és széklet koliformák számlálására javasolják, a legvalószínűbb szám technikával (MPN) a víz- és élelmezési mintákban, ahol a fő érintett anyag az Escherichia coli.

Az EC táptalaj tripteinből, laktózból, epesókból, dikálium-foszfátból, monokálium-foszfátból, nátrium-kloridból és vízből áll. Fogalmát stratégiailag úgy tervezték, hogy elősegítse a teljes és a széklet koliformák növekedését, és megakadályozza a többi kísérő mikroorganizmus kialakulását.

Az EK táptalaj elkészítésének ábrás ábrázolása. Forrás: Pixabay.com

Az Escherichia coli baktérium a vízben és az élelmiszerforrásokban szennyező anyagként jelen lévő fő fekális coliform, amely a gyomor-bélrendszer fontos rendellenességeinek oka.

Meg kell jegyezni, hogy számos Escherchia coli szerotípus létezik; Ezek közül megemlíthetjük az enterohemorrhagiás (EHEC), az enteroinvazív (EIEC), az enteopatogén (EPEC), az enterotoxigén (ETEC) és az enteroagregációs (EAEC).

Ez a közeg képes mindegyik fejlődését lehetővé tenni, de anélkül, hogy meg tudná különböztetni őket egymástól. Ehhez további tesztelés szükséges.

A víz és az élelmiszerek mikrobiológiai vizsgálata a legvalószínűbb számmal (MPN) az összes és a széklet kolibakteriális baktériumok keresésére egy olyan protokoll, amely több fázisból áll; feltételező szakasz, megerősítő szakasz és befejező szakasz. Az EC táptalajt a megerősítő fázisban használják.

bázis

EC húsleves

Az EC táptalaj azon tápanyagok biztosításán alapszik, amelyek szükségesek a teljes és széklet koliformák optimális fejlődéséhez, ahol az Escherichia coli baktériumok is szerepelnek.

Ezeket a táplálkozási elemeket a triptein biztosítja, mivel kiváló forrás a peptidek és aminosavak számára. Ezenkívül tartalmaz laktózt is, egy fermentálható szénhidrátot, amely energiát szolgáltat és lehetővé teszi annak kimutatását, hogy a baktériumok termelnek-e gázt.

Másrészről, a táptalaj epessókat tartalmaz, amelyek szelektív jelleggel bírnak, mivel gátolja a mintában jelen levő gram-pozitív mikroorganizmusok szaporodását.

Hasonlóképpen, a kálium-foszfát és a monokálium-foszfát pH-egyensúlyozó rendszerként működik. Ez a rendszer szükséges, mivel a táptalajban lévő laktóz inkább megsavanyítja a közeget, amikor mikroorganizmusok erjesztik, de ezt a foszfátsók kompenzálják.

Ezért ezek az elemek nélkülözhetetlenek, mivel az ellenőrizetlen savasság befolyásolhatja a keresett mikroorganizmusok megfelelő fejlődését.

A nátrium-klorid a maga közegét ozmotikusan stabilizálja, míg a oldott anyag oldószere a víz, és a folyadék állandóságát biztosítja a közeghez.

Novobiocin módosított EC táptalaj

Okrend és Rose különféle EC táptalajt készített, úgynevezett novobiocin módosított EC levest. A módosítás az epesók koncentrációjának csökkentéséből és 20 mg / dl novobiocin hozzáadásából állt.

Ez a módosítás elősegíti az enterohemorrhagiás Escherichia coli törzsek (O157: H7) helyreállítását.

Ez a bakteriális szerotípus súlyos vérzéses vastagbélgyulladást okoz, ami hemolitikus uremiás szindrómához (HUS) vezethet; ami viszont akut veseelégtelenséget okozhat, magas halálozási rátával, amely akár az időskorúak esetében is elérheti az 50% -ot.

A baktérium szennyezett élelmiszerek fogyasztása miatt okozott éves megbetegedése és halálozása miatt az Egyesült Államok Mezőgazdasági Minisztériuma (USDA) erősen ajánlja ennek a táptalajnak a használatát.

Készítmény

EC húsleves

Mérjünk be 37,4 g dehidratált közeget és oldjuk fel 1 liter desztillált vízben. A keveréket hagyjuk állni 5 percig. Ezt követően egy hőforrásban az oldódás befejeződik, gyakran keverve.

Feloldódás után az előkondicionált tesztcsövekbe osztják őket, Durham-csővel együtt. Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig.

A tápközeg pH-jának 6,9 ± 0,2-nek kell lennie. A dehidrált táptalaj színe bézs, az elkészített táptalaj pedig világosbarna színű.

A húslevest felhasználásig hűtőszekrényben tartják. A felhasználás időpontjában a húslevesnek szobahőmérsékleten kell lennie.

Másrészt az EC táptalaj kettős koncentrációban is elkészíthető.

Novobiocin módosított EC táptalaj

Mérjünk ki 36,7 g dehidrált közeget és oldjuk fel 1 liter vízben. A készítmény többi része megegyezik a fentiekkel.

Használat

Teljes és széklet koliform analízis

Az EC táptalaj ideális a koliformák NMP módszerrel történő megerősítésének fázisához, mind a vízmintákban, mind a gyógyszerészeti termékekben és az élelmiszerekben.

A feltételezhető fázisban kapott zavaros, gázt termelő laktózleveseket újra kell ültetni 2% epefényes zöld levesben és EC táptalajban.

Az összes kolibaktérium esetében az EC táptalajokat aerob úton inkubálják 24–48 órán keresztül 37 ° C-on, míg a széklettel szembeni kolibaktériumokat aerob módon inkubálják 24–48 órán keresztül 44 ° C-on.

Mindkét esetben a következőképpen értelmezzük: zavaros csöveket, amelyekben gáztermelés történik, pozitívnak tekintjük. Ha 24 órán belül nem keletkezik gáz, akkor az inkubáció 48 órán keresztül folytatódik.

Az EC pozitív táptalajok a teljes megerősítő szakaszba kerülnek, amely szelektív táptalajokon, például Mac Conkey agaron, EMB agaron vagy endo agaron történő újrabeoltással jár.

Ha a felhasznált leves novobiocinnel módosított EC, akkor a pozitív csöveket Mac Conkey agar agarban szorbitollal történő újrahelyezésére javasoljuk.

QA

Az előkészített táptalaj minden egyes tételét minőség-ellenőrzésnek kell alávetni. Először meg kell vizsgálni a táptalaj sterilitását. Ebben az értelemben egy vagy két táptalajt inkubálunk anélkül, hogy aerobiosisban oltanánk be 24 órán át 37 ° C-on. A várt eredmény egy átlátszó leves, zavarosság vagy színváltozás nélkül.

Másodszor, ki kell értékelni az ismert törzsek növekedését, ehhez a következő baktériumok alkalmazhatók: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Minden esetben kielégítő mikrobiális fejlődés várható, megfigyelve egy zavaros tápközeget, amelynek gáztermelése az E. coli számára, és nincs gáz a Salmonella számára.

A törzsbe bevonható további törzsek: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ezeket a törzseket teljes mértékben gátolni kell.

ajánlások

-A Durham-csövek elhelyezése elengedhetetlen a koliformák tanulmányozásához.

-Sterilizálás előtt ossza meg a tápközeget a kémcsövekben, soha után.

- Ne használja, ha a táptalaj 3 hónapnál régebbi.

- Ne használja, ha a közeg szokásos tulajdonságaiban bármilyen változás észlelhető.

Irodalom

1. Britannia Laboratories. EC közepes. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
2. Enterohemorrhagiás E. coli. Élelmezésbiztonsági és közegészségügyi központ. 2010. Elérhető a cfsph.iastate.edu címen
3. Neogen Corporation. EC közeg. Elérhető a következő címen: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiocin módosított EC táptalaj. Elérhető a következő címen: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, I. Chinen, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Az Escherichia coli kimutatása, izolálása és jellemzése Shiga-toxint termesztenek Concepción megyei henterek friss őrleményéből. Tucumánból. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Elérhető a www.scielo.org oldalon.