LAKTOZOTT HÚSLEVES: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

A laktózleves nem szelektív folyékony tápközeg, amelyet elsősorban dúsítás céljából használnak a Salmonella törzsek izolálása során, a mikrobiológiai elemzéstől a feldolgozott élelmiszerekig, tejtermékekig vagy vízig. Ezt az élelmiszerek mikrobiológiai specifikációinak nemzetközi bizottsága (ICMPF) ajánlja.

A tápközeg zselatin, húskivonat és laktóz enzimes emésztését tartalmazza, a baktériumok növekedéséhez szükséges anyagokat. Ezenkívül a laktóz fermentálható szénhidrát, ezért egyes koliformák képesek bontani azt gáztermeléssel.

Szoptatott tápanyagok zavaros. Forrás: A fotó készítette MSc. Marielsa gil

Ezért az Amerikai Közegészségügyi Szövetség (APHA) javasolja a laktózleves alkalmazását a teljes és széklet koliformás baktériumok feltételezhető vizsgálatára, kiváló alternatívaként minősítve azt a triptóz-lauril-szulfát-táptalaj helyettesítésére a legvalószínűbb szám (MPN) standard technikájában.), amelyet élelmiszer-, tej- és felszíni vizek, föld alatti, rekreációs, háztartási és ipari hulladékminták mikrobiológiai elemzéséhez használnak.

bázis

Egyes minták mikrobiológiai elemzéséhez elengedhetetlen az elődúsítási lépés ahhoz, hogy visszanyerjünk egy olyan mikroorganizmust, amely nagyon alacsony mennyiségben lehet, vagy olyan kedvezőtlen körülmények között, amelyek megsértik vagy minimalizálják annak életképességét.

Ilyen a szárított és feldolgozott élelmiszerek esetlegesen Salmonellas sp. Ezekben az esetekben, ha a baktériumok jelen vannak, fizikai és kémiai visszaéléseket szenvedtek a termék előállítása során.

Olyan módon, hogy a mikroorganizmusok olyan káros tényezőknek legyenek kitéve, mint például a kiszáradás, a gátló vagy mérgező termékeknek való kitettség, valamint az átfedés, amelyet többek között más baktériumok nagyobb mennyiségű jelenléte okoz.

Ebben az értelemben a laktózleves helyreállító hatást gyakorol a mikroorganizmus sérült szerkezetére, és ezáltal felépülést és szaporodást idéz elő úgy, hogy kimutatható legyen.

Hasonlóképpen, a laktózleves képes hígítani azokat a gátló anyagokat, amelyek befolyásolhatják életképességét, lehetővé téve fejlődését. Ezenkívül a laktózleves táplálkozási összetétele stratégiailag fontos a Salmonella sp szaporodásának elősegítéséhez más mikroorganizmusok felett.

A végső azonosításhoz azt szubkultúrázni kell más végleges táptalajokra.

Másrészt a közeg összetétele lehetővé teszi a laktózt fermentáló mikroorganizmusok kimutatását is, amelyek gázt termelnek.

Készítmény

Egy liter laktózleves elkészítéséhez 13 gramm dehidratált tápközeget meg kell mérni és feloldani 1000 ml desztillált vízben.

A közeg vízben való feloldódásának elősegítése érdekében az oldatot kissé, de nem túl sokat lehet melegíteni.

A homogén oldatot az alábbiak szerint állítják elő: ha a tápközeget koliformák keresésére használják, előkészítünk egy kémcsövet, amelybe Durham fermentációs csövet helyezünk fejjel lefelé.

A Durham-cső nagyon fontos részlet, mivel lehetővé teszi a gázképződés kimutatását, ami nagy jelentőségű adat a koliformák keresése során.

Amint a csövek készen állnak, 10 ml laktózlevest adagolnak belőlük; ennek a mennyiségnek elegendőnek kell lennie a teljes Durham-cső lefedéséhez.

Ha a laktózlevest elődúsító táptalajon kell használni, akkor nem szükséges Durham-erjesztési csövet helyezni. Ebben az esetben nagyobb mennyiségű táptalajra van szükség (225 ml), amelyet 500 ml-es palackokban, széles szájjal és hőálló csavaros kupakkal kell kiszolgálni.

Ezt követően a csöveket vagy lombikokat autoklávozzuk 121 ° C-on 15 percig.

A közeg végső pH-jának 6,9 ± 0,2-nek kell maradnia 25 ° C-on.

A húslevest felhasználásig hűtőszekrényben tartják.

Használat előtt a húslevest szobahőmérsékletre kell melegíteni.

Másrészt a laktózlevest kettős koncentrációban is el lehet készíteni.

Néhány laboratórium brómkrezol-lila anyagot ad a laktózleveshez pH-indikátorként, hogy megmutassák azokat a csöveket, ahol a laktóz a színváltozás miatt erjesztett. Ebben az esetben a húsleves lila színű, erjedés esetén pedig sárgára vált.

Alkalmazások

A mikrobiológiai laboratóriumokban a laktózlevest széles körben használják, mivel ez egy viszonylag olcsó táptalaj, amely megbízható és gyors eredményeket kínál (24-48 óra).

Fel lehet használni az ételben és a vízben található összes és fekális kórokozó baktérium elemzésére, vagy Salmonella elődúsítására szolgáló táptalajon.

Pre-dúsítás

Az elődúsítás a minta dúsítása előtti lépés, amely nagymértékben javítja a Salmonella nemzetségbe tartozó baktériumok helyreállítását a feldolgozott élelmiszerekben.

Ehhez a szilárd élelmiszermintát (25 gramm) vagy a folyadékot (25 ml) 225 ml laktózlevesbe oltjuk, 24–48 órán át inkubálva. Ezt követõen dúsított táptalajban, például szelenit-cisztin-táptalajban vagy tetrationát-táptalajban szubkultúrázzuk. Ezután lépjen az XLD és SS szelektív adathordozókra.

Teljes és széklet koliform analízis

Kiváló közeg, mint a széklet-szennyeződés mutatója.

Ezért a laktózleves ideális a koliform vizsgálat feltételezhető fázisához a legvalószínűbb szám módszerrel.

Azoknak a mintáknak a esetében, amelyekben nagy mennyiségű koliformás baktérium gyanúja merül fel, kisebb mennyiségüket oltják be (1 ml), míg olyan minták esetében, amelyekben kisebb mennyiségű koliformás baktérium gyanúja merül fel, nagyobb minták mennyiségét (10 ml) oltják be.

Az elemzéshez ^10-1, 10 ^-2, ^10-3 hígításokat készítünk, amelyek minden egyes koncentrációhoz 3-5 csövet tartalmaznak.

Mindegyik hígításból ugyanazt a mennyiséget oltják be a laktózlevesbe.

A csöveket 24 órán át inkubáljuk. A negatív táptalajt további 24 órán át inkubáljuk.

Az eredményeket két jellemző megfigyelésével értelmezzük: az első a zavarosság megléte vagy hiánya, és mivel ez a közeg nem tartalmaz pH-mutatót, nem változik szín.

A második a gáz előállítása vagy sem. A gáz a Durham-csőben könnyen kimutatható, ha egy vagy több légbuborék megjelenik benne.

Pozitívnak tekintjük, ha mindkét tulajdonságot megfigyeljük, azaz zavarosságot jelent a gáztermelésnél. A pozitív csöveket újra kell oltani megerősítő táptalajban (2% briliáns zöld epeleves és EC táptalaj).

A közeg minőségellenőrzése

- A tápközeg elkészítésekor fontos, hogy ne felejtsük el elhelyezni a Durhams-csöveket, ha ennek célja a koliformák tanulmányozása.

- A sterilizálás előtt ne forralja túl a közeget.

- A sterilizálás előtt szétosztani a kémcsövekben, soha után.

- Ne használja, ha a táptalaj 3 hónapnál régebbi.

- Ne használja, ha a közeg szokásos tulajdonságai megváltoznak.

- A laktózleves tétel előkészítésekor ellenőrizze annak minőségét ismert törzsek, például Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii és Klebsiella pneumoniae vetésével. Nagyon jól növekednek, gáztermeléssel (pozitív kontroll).

- Ide tartozhat a Pseudomonas aeruginosa, a Salmonella typhimurium vagy az Enterococcus faecalis is, amelyek jól növekednek, de gáztermelés nélkül (negatív kontroll).

- Meg kell jegyezni, hogy a dehidrált táptalaj eredeti színe bézs, az elkészített táptalaj színe nagyon világos és átlátszó sárga. Ha megváltozik a szín vagy a megjelenés, ez romolhat.

Irodalom

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Környezetbiológia és mikrobiológia. (2013) 1. kiadás. A Cartagenas Egyetem, Kolumbia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B és Velázquez O. (2009). Az élelmiszerek mikrobiológiai elemzésének technikái. 2nd ed. UNAM Kémiai Kar. Mexikó.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. laktózleves kettős koncentráció (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. A koliform baktériumok kivonására szolgáló technikák összehasonlítása a mexikói Xochimilco-tó üledékéből. Argent. Microbiol. 2013 45 (3): 180-184. Elérhető a scielo.org oldalon.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Az artéziai kútvizek mikrobiológiai minőségének meghatározása a Központi, Cordillera és Fővárosi Önkormányzati Osztályok kerületeiben. Mem. Inst. Tudomány. Egészség 2013; 11 (1): 5-14. A következő címen szerezhető be: scielo.iics.