MALONÁTLEVES: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2025

A malonátleves a diagnosztikai vizsgálathoz használt folyékony tápközeg (malonát), amelyet az Enterobacteriaceae család egyes nemzetségeinek megkülönböztetésére használnak. Ezt 1933-ban Leifson készítette, majd később Ewing módosította, aki kis mennyiségű dextrózt és élesztőkivonatot adott az eredeti recepthez.

A tápközeg élesztő-kivonatból, ammónium-szulfátból, dikálium-foszfátból, monokálium-foszfátból, nátrium-kloridból, nátrium-malonátból, dextrózból és brómtimol-kékből áll. Ez a teszt általában az Enterobacteriaceae biokémiai azonosító elemében található, segít megkülönböztetni egyes nemzetségeket és fajokat.

A malonát teszt grafikus ábrázolása. A. Negatív teszt, B. (Savasodás) Negatív teszt, C. (Közepes lúgosítás) Pozitív teszt. Forrás: színes csövek publicdomainpictures.net

A malonátteszt elsősorban azon a képességén alapul, hogy egyes mikroorganizmusok nátriummalonátot használnak egyetlen szénforrásként, és ammónium-szulfátot nitrogénforrásként.

A malonát teszt általában pozitív az Enterobacter, Klebsiella és Citrobacter nemzetségek egyes fajain. Míg az Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus és Providencia nemzetségek többsége negatív reakciót mutat.

bázis

A malonát teszt abból áll, hogy megmutatjuk azokat a baktériumokat, amelyek képesek nátrium-malonátot használni egyetlen szénforrásként, és ammónium-szulfátot nitrogénforrásként.

Azon Enterobacteriaceae-k többsége, amelyek nem használnak malonátot, képesek növekedni ebben a táptalajban, tápanyagként a dextrózt és az élesztőkivonatot venve.

Ebben az esetben a peptonok alkalmazásával történő lúgosítás minden kísérletét ellensúlyozza a dextróz fermentációja során előállított savak előállítása. Hasonlóképpen, a dikálium és a monokálium-foszfátok pufferként viselkednek, a pH-t 6,7-nél tartva.

Ezért, amikor a teszt negatív, a leves ugyanaz az eredeti szín marad (zöld). Ritka esetekben a táptalaj savassá válhat a dextróz erjedése miatt; a peptonok és a pH-mutató használata nélkül a táptalaj színe sárgára változhat. Ehhez a pH-nak 6-ra kell csökkennie.

Ha azonban ez a teszt pozitív, akkor azt mondják, hogy a mikroorganizmus malonátot és ammónium-szulfátot használt szén- és nitrogénforrásként, a többi alkotóelem felhasználása nélkül.

Ebben az esetben a közeg lúgossá válik a nátrium felszabadulása és az ebből következő NaOH képződése miatt. Ebben az értelemben a pH-indikátor (brómtimolkék) a közeg színét zöldről kékre változtatja, ha a pH legalább 7,6. A kék lehet világos vagy intenzív (porosz kék).

Végül a nátrium-klorid fenntartja a közeg ozmolaritását, és a víz az összes komponens hígítója.

Értelmezés

Ugyanazon színű húsleves (zöld) - negatív teszt

Sárga leves: negatív teszt

Világos vagy mélykék leves: pozitív teszt

Van egy olyan változat, amelyet fenilalanin-malonát táptalajnak hívnak, más néven Shaw és Clarke táptalajnak. Ebben az esetben két vizsgálat elemezhető: a malonát szénforrásként történő felhasználása és a piruvsav előállítása fenilalaninból.

Készítmény

Malonát húsleves

Meg kell mérni a kiválasztott kereskedelmi társaság betétjében megadott grammszámokat (az eltérő lehet). A lemért grammot egy liter desztillált vízben szuszpendáljuk. Kissé melegítsük, amíg teljesen feloldódik. Osszuk el a 3 ml tápközeget 13/100 kémcsövekbe pamutkupakkal.

Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15-20 percig.

Használat előtt hűtsük le. Ha nem szándékoznak azonnal felhasználni, tároljuk felhasználásig hűtőszekrényben. Az oltást melegítsük szobahőmérsékletre a húslevest.

A tápközeg pH-jának 6,7 ± 0,2-nek kell lennie. Az elkészített közeg színe palackzöld.

Fenilalanin-malonát táptalaj

Mérjünk ki 11 g dehidratált közeget és oldjuk fel 1 liter desztillált vízben. A készítmény többi része megegyezik az előzőekben leírtakkal.

Elkészíthető úgy is, hogy 2 g / l fenilalanint adunk a malonát táptalajhoz, mielőtt sterilizálnák.

Használat

Az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok azonosítására összeállított biokémiai tesztek elemének részeként használják.

Segít megkülönböztetni a következőket:

-A Klebsiella és az Enterobacter (+) nemzetség az Escherichia és Serratia nemhez (-).

-A Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame és Salmonella enterica ssp diarizonae (+), a Salmonella enterica ssp enterica (-) fajból.

-A Klebsiella nemzetségből általában (+) az Actinobacillus nemhez (-).

-Egyszerűen elősegítheti az Enterobacteriaceae családba nem tartozó baktériumok nemzetségeinek és fajtáinak megkülönböztetését, például a nem erjesztő grammnegatív Alcaligenes faecalis (+) és Acinetobacter sp (-) baktériumok között.

Forrás: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.

Folyamat

Egy öngyújtó alatt egy tiszta kölni egy részét vesznek, megfelelően sterilizált és lehűtött platina fogantyúval. A vett mintát (könnyű oltóanyag) feloldjuk a malonátlevesben. Inkubáljuk laza fedővel, aerobiosisban, 35 ° C ± 0,2 hőmérsékleten, 24–48 órán keresztül.

A malonátlevest is beolthatjuk egy 18–24 órás tenyészetből tripszikáz szójalevesbe. Ebben az esetben 0,01 ml-t veszünk steril pipettával és a malonátlevest oltjuk be. Inkubáljuk laza fedővel, aerobiosisban, 35 ° C ± 0,2 hőmérsékleten, 24–48 órán keresztül.

Az idő végén az eredményeket értelmezzük. A kék szín 48 órás inkubáció utáni nyomait pozitívnak kell tekinteni. A tesztet csak akkor lehet értelmezni, ha a 48 órás inkubációs idő eltelt.

A fenilalanin-malonát táptalajváltozat alkalmazása esetén először a malonátot értelmezzük, majd 5 csepp 1 N sósavoldatot és 3-5 csepp 8% -os vas-kloridot adunk hozzá. A sötétzöld szín pozitív tesztként értelmezhető a fenilalaninra. Ha viszont a táptalaj halványkékré válik, akkor a teszt fenilalaninra negatív.

QA

A tápközeg sterilitásának ellenőrzése érdekében egy vagy két táptalajt inkubálunk 35 ° C ± 0,2 hőmérsékleten 24 órán át. Ezen idő elteltével nem szabad zavarosság vagy színváltozás.

A minőség-ellenőrzéshez ismert vagy tanúsított törzseket lehet használni, például: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 és Escherichia coli ATCC 25922.

A várt eredmények:

• Az Enterobacter aerogenes, a Klebsiella pneumoniae és a Salmonella enterica ssp arizonae pozitív reakciót mutat (közepes kék színű).
• Az Escherichia coli esetében az eredménynek negatívnak kell lennie, vagyis várhatóan nem változik a szín (zöld), vagy pedig a sárgára vált a glükózos erjedés miatt.

korlátozások

Ne használjon olyan zamatot, amely zavarosságot, csapadékot, színváltozást vagy romlás jeleit mutatja.

Irodalom

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. A Salmonella spp. Mikrobiológiai izolálása és molekuláris eszközei annak kimutatására. Uninorte Health. Barranquilla (oszlop) 2014; 30 (1): 73-94. Elérhető a scielo.org.co oldalon
2. BBL. Malonátleves, Ewing módosítva. 2007. elérhető: bd.com
3. Senna Laboratories. Malonato húsleves. Elérhető a következő címen: ccientasenna.com
4. RenyLab. Malonato húsleves. 2013. Elérhető a következő címen: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog Diagnostics. Malonato húsleves. Elérhető a következő címen: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Fenilalanin-malonát táptalaj. Elérhető a következő címen: condalab.com