TETRATIONÁTLEVES: INDOKLÁS, ELŐÁLLÍTÁS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

A tetrationát leves vagy TT leves szelektív folyékony tápközeg a Salmonella nemzetség törzseinek dúsítására és visszanyerésére. Ezt a Müeller készítette, majd később Kauffmann módosította, ezért vannak olyanok, akik Müeller-Kauffmann-tápanyagnak hívják.

Az eredeti táptalaj proteózpeptoneket, kalcium-karbonátot és nátrium-tioszulfátot tartalmazott. Kauffmann epesókat adott hozzá és újabb modalitást hozott létre élénkzöld színnel. Ezek az anyagok gátolják a koliformák növekedését, szabadon hagyva a tápközeget a patogén baktériumok, ebben az esetben a szalmonella, kifejlődéséhez.

A jód-jód-oldatot hozzáadjuk a tetrationát-tápközeghez. Forrás: Manuel Almagro Rivas

A módosítás nagyon sikeres volt, mert jelentősen megnövelte a táptalaj érzékenységét. Emiatt jelenleg hasznos a szalmonellák keresése bármilyen típusú mintában, de különösen szilárd vagy folyékony széklettel és ételekkel.

Előkészítése két szakaszból áll; A kereskedelemben kapható közeg alapul szolgál a tetrationát-táptalaj elkészítéséhez, és ezt követően, hogy a tetrationát képződjön, jódos jód-oldatot adunk a táptalaj kitöltéséhez.

Az Amerikai Közegészségügyi Szövetség (APHA) a szalmonella mintáinak dúsítására élénkzöldtel kiegészített tetrationát-táptalaj alkalmazását ajánlja, mivel ez szelektívebb, mint a tetraetionát-táptalaj és a szelenit-táptalaj.

Általában véve a tetrationátleves ideális, ha a Salmonella nemzetségbe tartozó baktériumok jelenlétét kis mennyiségben gyanítják, vagy ha gátló anyagoknak való kitettség vagy az életképességüket minimalizáló ipari folyamatok révén visszaélnek velük.

bázis

A jelen lévő peptonok megfelelnek a kazein hasnyálmirigy-emésztésének és az állati szövetek peptikus emésztésének. Ezek biztosítják a szén, a nitrogén és az általános tápanyagok forrását a baktériumok növekedéséhez.

A nátrium-tioszulfát a jódolt oldattal reagálva tetrationát képződik. Ez gátolja a koliformák növekedését és elősegíti a tetrationát-reduktáz enzimet tartalmazó baktériumok fejlődését, köztük a Salmonella nemzetet, de a Proteus-t is.

Az epesók gátló anyagként hatnak a legtöbb gram-pozitív és néhány gram-negatív baktériumra is (coliformák).

A kalcium-karbonát felszívja a kénsavat képező tetrationát bomlásával keletkező mérgező anyagokat. Ebben az értelemben a kalcium-karbonát semlegesíti a savasságot, miközben a közeg pH-ja stabil marad.

Az élénkzöld módszer esetén ez az anyag növeli a tetrationátleves szelektív erejét azáltal, hogy gátolja a Salmonella nemzeten kívüli mikroorganizmusokat.

Készítmény

-Tetracionát leves

Jód jód oldat

Mérni:

• 6 gramm jód.
• 5 g kálium-jodid.

A kálium-jodidot feloldjuk körülbelül 5 ml steril desztillált vízben, majd az elegy melegítése közben apránként hozzáadjuk a jódot. Miután teljesen feloldódott, töltsük fel jelig steril desztillált vízzel, amíg a végső térfogata 20 ml-re nem alakul.

Alapközeg a tetrationát-táphoz

Mérjünk be 46 gramm dehidrált tápközeget és szuszpendáljuk 1 liter steril desztillált vízben. Keverjük össze és melegítjük, amíg teljesen fel nem oldódik. Csak néhány percig forralhat fel. Ne autoklávot végezzen. A közeg alapját hagyjuk megközelítőleg 45 ° C-ra hűlni, és ekkor 20 ml jódolt oldatot adunk hozzá.

Miután a jódos oldatot a tápközeghez adták, azt azonnal fel kell használni. Ha nem akarja használni a teljes keveréket, akkor járjon el az alábbiak szerint:

10 ml alapanyagot osztunk el csövekbe, és csak a mintákkal oltandó mintákhoz adunk 0,2 ml jódolt oldatot.

Azokat, amelyeket nem fog használni, továbbra is hűtőszekrényben lehet tárolni, azonban mivel a közeget nem sterilizálják, az az ideális, ha elkészíti a szükséges mennyiséget.

A tápközeg színe a jódolt jódoldat hozzáadása előtt tejfehér, fehér csapadékkal, majd hozzáadása után barna, sűrű csapadékkal. A megfigyelt csapadék normális és megfelel a nem oldódó kalcium-karbonátnak. A tápközeg végső pH-ja 8,4 ± 0,2.

-Tetracionát húsleves változat élénkzöldvel

A fényes zöld tetrationát leves elkészítéséhez az összes fent leírt lépést elvégezzük, de emellett 10 ml 0,1% -ban készített élénk zöld oldatot adunk az elegyhez.

Ragyogó zöld

Ezt az oldatot az alábbiak szerint állítják elő:

Mérjünk ki 0,1 g fényes zöld anyagot, és szuszpendáljuk 100 ml desztillált vízben. Forrásig melegítjük, hogy teljes oldódást érjünk el. Tárolja borostyán üvegben.

Használat

A székletminták (széklettenyészet) esetében a protokoll a következő:

Inokuláljunk egy csőbe 1 g szilárd széklet vagy 1 ml folyékony széklet 10 ml felhasználásra kész tetrationát-tápközeggel. Erősen rázzuk össze, és aerob módon inkubáljuk 43 ° C-on 6–24 órán keresztül.

Ezt követően vegyen 10-20 μl aliquot mennyiséget a tápközegből és az altenyészetből szelektív tápközegben a szalmonella számára, például SS agar, XLD agar, fényes zöld agar, többek között Hektoen enterális agar.

Ezzel párhuzamosan a szalmonella szelektív táptalajt oltani kell a közvetlen mintával (széklettel) dúsítás nélkül. Rektális tamponminták esetén ürítsük ki az összegyűjtött anyagot a csőbe, és folytassuk a fent leírtak szerint.

Ételmintákhoz mérjünk le 10 g szilárd ételt vagy 10 ml folyékony ételt, és olvassa be a palackot 100 ml felhasználásra kész tetrationát-tápközeggel. A fentiek szerint járjon el, de inkubálja 37 ° C-on.

Mint látható, a minta és a leves közötti kapcsolat mindig 1:10.

QA

Az ismert kontroll törzsek felhasználhatók a tápközeg tesztelésére. A legelterjedtebbek az ATCC által tanúsított törzsek.

Használható törzsek: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 és Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Kiváló növekedés várható a Salmonella törzseknél, míg az Escherichia coli gyenge vagy szabályos növekedést mutathat, a gram-pozitív törzsek (Enterococcus és Staphylococcus) pedig részben vagy teljesen gátolhatók.

ajánlások

- Mivel ez a táptalaj nem gátolja a Proteus növekedését, egyes laboratóriumok 40 mg / L novobiocint használnak e mikrobiális törzs kialakulásának megakadályozására. Az antibiotikumot hozzá kell adni a jódoldat előtt.

- A jód-jód-oldatot tartalmazó táptalaj elkészítése után a beoltás nem haladhatja meg a 2 órát.

-A tápközeg elosztásakor a csövekben a keveréket folyamatosan homogenizálni kell a képződött csapadék újraszuszpendálására.

-A kevésbé szennyezett mintákban a tetrationát-táptalajt 35-37 ° C-on inkubálják, és erősen szennyezett mintákban inkubálni kell 43 ° C-on.

Irodalom

1. Conda Pronadisa laboratórium. 2010. Tetrationát levesbázis Müeller-Kauffmann szerint. Elérhető:
2. BD Laboratories. 2003. Tetrationát levesbázis. Elérhető:
3. Britannia Laboratories. 2015. Tetranát alapleves. Elérhető:
4. BBL Media. 2005. Csövekben elkészítve a Salmonella fajok tenyésztésére.
5. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. A nátrium-szelenit és a nátrium-tetrationát táptalajának összehasonlítása, mindkettőt 37 ° C-on és 42 ° C-on inkubálva. a Salmonella spp izolálása a hordozó székletéből. Rev. Biomed 2003; 14 (4): 215-220