THIOGLIKOLÁT TÁPTALAJ: INDOKLÁS, ELŐÁLLÍTÁS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2025

A tioglikolát táptalaj közepes dúsítású folyadékkonzisztencia. Az FTM betűszó néven ismert az angol Fluid Thioglycollate Medium rövidítésével. Brewer készítette, 1944-ben Vera módosította, aki kazein-peptont adott hozzá.

Ennek a közegnek az oxidációs-redukciós képessége alacsony, ezért nem ajánlott szigorú aerob baktériumok kifejlődéséhez, de ideális fakultatív aerob, szigorúan anaerob és szükségtelen mikroaerofil baktériumok visszanyerésére.

Thioglikolát leves indikátor nélkül. Hüvelyi ürülést mutat. Forrás: Bobjgalindo

Az ezzel a táptalajon megfigyelt nagy teljesítményű különféle mikroorganizmusok izolálása és visszanyerése miatt elfogadhatóvá tette az Egyesült Államok Gyógyszerkönyve (USP), a Mezőgazdasági Vegyészek Hivatalos Szövetsége (AOAC) és az Európai Gyógyszerkönyv (EP).

Ezek a szervezetek javasolják a gyógyszerkészítmények sterilitás-ellenőrzési vizsgálatához és különféle típusú minták dúsításához.

A cado-tioglikolát élesztõkivonatból, kazein hasnyálmirigy-emésztésbõl, vízmentes dextrózból, L-cisztinbõl, nátrium-kloridból, nátrium-tioglikolátból, rezazurinból és kis mennyiségû agarból áll.

Ennek a táptalajnak több változata létezik, köztük: tioglikolát leves indikátorral, tioglikolát leves indikátor nélkül, tioglikolát leves indikátorral dúsítva heminnel és K ₁ vitaminnal , és tioglikolát leves kalcium-karbonáttal.

Nevezetesen, a heminnel és K-vitaminnal dúsított tioglikolát húsleves változat elősegíti a finom anaerobok növekedését, a kalcium-karbonátot tartalmazó tioglikolát húsleves változat pedig hasznos a mikrobiális növekedés során képződött savak ellensúlyozására.

bázis

A tioglikolát táptalajt nem szelektív dúsító közegnek tekintik, mivel lehetővé teszi a legtöbb nem igényes baktérium szaporodását. A táplálkozási igényeket az élesztőkivonat, a hasnyálmirigy emésztése és a glükóz biztosítja.

Másrészt ez a táptalaj annak ellenére, hogy leves, kis mennyiségű agart tartalmaz; Ez azt jelenti, hogy alacsony oxidációs-redukciós potenciállal rendelkezik, mivel az lassítja az oxigén belépését oly módon, hogy az oxigén csökken, amikor mélyebbre jut a csőbe.

Ez az oka annak, hogy ez a táptalaj ideális fakultatív aerob, mikroaerofil és szigorú anaerob baktériumok kifejlődéséhez, ez utóbbi 2 anélkül, hogy ilyen körülmények között inkubálni kellene. Ugyanez a közeg szabályozza az oxigén mennyiségét a közegben, mivel hiányzik a cső alján, és elegendő mennyiségben van a felületen.

Hasonlóképpen, a tioglikolát és az L-cisztin redukáló szerekként is szolgál, segítve a baktériumok fejlődését káros anyagok, például a peroxid felhalmozódását. Ezenkívül ezek a vegyületek szulfhidrilcsoportokat (-SH-) tartalmaznak, semlegesítik a higanyszármazékok, az arzénok gátló hatásait, többek között a nehézfémek között.

A rezazurin a maga részéről az oxid redukciójának indikátora. Ez az anyag színtelen, ha redukált, és rózsaszínű, ha oxidálódik. Vannak indikátor és nem indikátoros tioglikolát húsleves variánsok. Használata a minta típusától és a laboratórium preferenciájától függ.

Eközben a nátrium-klorid fenntartja a tioglikolát-táptalaj ozmotikus egyensúlyát, és a vízmentes glükóz használata megakadályozza a dehidratált közegben a felesleges nedvességet.

Készítmény

Thioglikolát leves indikátorral

Mérjünk ki 29,75 g dehidrált tápközeget és oldjuk fel 1 liter desztillált vízben. Az elegyet körülbelül 5 percig állni hagyjuk. Forraljuk hőforrásba, és keverjük gyakran, amíg teljesen fel nem oldódik.

Öntsük a tápközeget a kémcsövekbe, és autoklávba helyezzük 121 ° C-on 15 percig. Használat előtt hagyja lehűlni. Ellenőrizze a kereskedelmi ház betétjét annak megőrzése szempontjából. Egyesek szobahőmérsékleten sötét helyen tárolják, mások fénytől védett hűtőszekrényben.

Az elkészített közeg pH-ja 7,1 ± 0,2.

A dehidrált táptalaj színe világos bézs, az elkészített táptalaj világos borostyánszínű, némi opálos.

Thioglikolát húsleves indikátorral dúsítva heminnel és K-vitaminnal

Vannak olyan kereskedelmi médiumok, amelyek már tartalmaznak hemint és K ₁ vitamint, különösen az anaerobok termesztésére.

Ha nincs dúsított táptalaja az anaerobok számára, elkészítheti az alapvető tioglikolát levest. Ehhez minden tápközeg literhez 10 mg hemin-hidrokloridot és 1 mg K1-vitamint _adunk. Ha azonban vért vagy szérumot adnak a tioglikolát-tápközeghez, akkor nem szükséges hemin vagy K-vitamin hozzáadása.

Thioglikolát leves kalcium-karbonáttal

Kereskedelemben kapható, és az adatlemezen található utasítások alapján készül.

Thioglikolát leves indikátor nélkül

Ugyanazon összetételű bázikus tioglikolátot tartalmaz, de nem tartalmaz rezazurint.

Mérjünk be 30 g dehidratált közeget és oldjuk fel liter desztillált vízben. A készítmény többi része megegyezik a indikátorral ellátott tioglikolát táptalajban leírtakkal.

Használat

A tioglikolát táptalaj felhasználható a klinikai minták, különösen a steril helyekből származó minták dúsítására. Nem klinikai mintákhoz, például kozmetikumokhoz, gyógyszerekhez stb. Is hasznos.

Folyékony minták (például CSF, többek között az ízületi folyadék) oltására a mintákat először centrifugálják, majd 2 csepp üledéket vesznek és a tioglikolát táptalajba helyezik. Inkubáljuk 35 ° C-on 24 órán át. Ha ebben az időben nincs növekedés (zavarosság), azt legfeljebb 7 napig inkubálják.

Ha a mintát tamponnal vesszük, a tenyésztő tápközeget először lemezeken oltjuk be, és végül a tampont bevisszük a táptalajba, a kiálló részt megosztjuk és a csövet lezárjuk, és a tampont belsejében hagyjuk. Inkubáljuk 35 ° C-on 24 órán át, legfeljebb 7 napig.

Szilárd mintákhoz homogenizáljuk fiziológiás sóoldatban (SSF), majd a csepegtető oldatot 2 csepp szuszpenzióval oltjuk be.

Néha szállító közegként használható mintákhoz, amelyekben szigorú anaerobok jelenlétét gyanítják, vagy tartalék dúsító táptalajon.

A kalcium-karbonáttal ellátott tioglikolát táptalajt hosszabb ideig a kontroll törzsek fenntartására használják, mert képes semlegesíteni a glükóz alkalmazásával előállított savakat; Ezek a savak mérgezőek bizonyos baktériumokra.

A tioglikolát táptalaj növekedését a táptalaj zavarossága fogja megfigyelni. A minta típusától és a feltételezett mikroorganizmusoktól függően ajánlott egy Gram-festést és ezt követően szubkultúrát nem szelektív és szelektív tápközegben végezni.

QA

A sterilitás ellenőrzése céljából egy vagy két táptalajt inkubálunk oltás nélkül. A várt eredmény tiszta leves, színváltozás nélkül, bár normális, ha a cső felületén enyhén rózsaszín színű.

A minőség-ellenőrzés érdekében 10–100 CFU hitelesített kontroll törzseket kell beoltani, például Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes 114 ATCC, 1940 Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubáljuk 30–35 ° C-on aerobiosisban 24 órán keresztül, legfeljebb 3 napig, mivel ezek a mikroorganizmusok gyorsan növekednek.

A jó fejlődés minden esetben várható, kivéve a Micrococcus luteus és a Bacillus subtilis, ahol mérsékelt fejlődés fordulhat elő.

A minőség-ellenőrzés a tioglikolát táptalajjal dúsított hemin és K-vitamin ₁, a kontroll törzsek Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 és a Bacteroides fragilis ATCC 25285 is használható. A várt eredmény kielégítő növekedési.

ajánlások

- Rendszeresen megfigyelhető, hogy a indikátorral ellátott tioglikolát táptalaj felülete rózsaszínűvé válik; Ennek oka a közeg oxidációja. Ha a rózsaszín szín a teljes leves legalább 30% -át lefedi, vízfürdőben 5 percig melegítheti, ismét lehűtheti és felhasználhatja.

Ez eltávolítja az abszorbeált oxigént, és visszatér a közeg eredeti színéhez. Ez az eljárás csak egyszer hajtható végre.

- Az aerob baktériumok szaporodásának javítása érdekében inkubáljuk kissé lazán a fedéllel. Előnyös azonban erre a célra agyszív infúziós húsleves vagy tripszikáz szója húsleves felhasználása a szigorú aerobok megfelelő fejlesztése érdekében.

- Kerülni kell a közeg fagyasztását vagy a túlmelegedését, mivel mindkét körülmény károsítja a közeget.

-A közvetlen fény károsítja a tápközeget, fénytől védve kell tárolni.

Irodalom

1. Britannia Laboratories. Thioglikolát USP indikátorral. 2015.Attól elérhető: labBritania.com.
2. Chios Sas Laboratories. 2019. Thioglikolát leves. Elérhető a következő oldalon: quios.com.co
3. Laboratories BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Elérhető a következő címen: bd.com/Europe
4. Csövekben elkészített BBL táptalajok anaerob mikroorganizmusok tenyésztésére. Thioglikolát közegek. 2013. Elérhető a következő oldalon: bd.com
5. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.