HISZTOKÉMIA: INDOKLÁS, FELDOLGOZÁS, FESTÉS - BIOLÓGIA - 2026

A hisztokémiai anyag hasznos eszköz a különféle biológiai szövetek (növények és állatok) morfológiájának vizsgálatában, mivel a szövetkomponensek, például szénhidrátok, lipidek és fehérjék, többek között, kémiai színezékek reakciójának alakulnak ki.

Ez az értékes eszköz nem csak a szövetek és sejtek összetételének és szerkezetének, hanem a bennük zajló különféle reakciók azonosításának lehetővé teszi. Hasonlóképpen igazolható a mikroorganizmusok vagy más patológiák jelenléte által okozott lehetséges szöveti károsodás.

Hisztokémiai foltok. Nílus vírus, Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok (Gram), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Forrás: Pixinio.com/Wikipedia.org/Nephron / CDC / Dr. George P. Kubica

A múlt századok óta alkalmazott hisztokémia fontos hozzájárulást nyújtott, például Paul Ehrlich vér-agy gátjának meglétét. Ez azért volt lehetséges, mert az Ehrlich által használt kísérleti állat agyát nem festették anilinnel, amely alapfesték.

Ez különféle festékek, például metilénkék és indofenol használatához vezetett a különféle sejttípusok megfestésére. Ez a felismerés vezetett a sejtek acidofil, bazofil és neutrofil csoportokba sorolásához, sajátos festésük alapján.

A legújabb tanulmányok ezt a technikát alkalmazták különféle vegyületek, köztük a fenolok, valamint a szénhidrátok és a nem szerkezeti lipidek jelenlétének kimutatására a Litsea glaucescens faj szöveteiben, ismert babérként. Ezek megtalálása mind a levélben, mind a fában.

Hasonlóképpen, Colares et al., 2016, hisztokémiai technikák alkalmazásával azonosította a gyógyhatású növényt, a Tarenaya hassleriana-t. Ebben a fajban a keményítő, a mirozin, valamint a fenolos és lipofil vegyületek jelenléte bizonyított.

bázis

A hisztokémia azon alapul, hogy a szövetekben jelen lévő sejtszerkezetek vagy molekulák megfestődnek, köszönhetően specifikus színezékekkel való affinitásuknak. Ezen struktúrák vagy molekulák eredeti formátumban történő elszíneződésének reakcióját később az optikai mikroszkóppal vagy elektronmikroszkóppal látják el.

A festés specifitása a sejtekben vagy szövetmolekulákban jelen levő ion-elfogadó csoportok jelenléte miatt van.

Végül, a hisztokémiai reakciók célja, hogy képesek legyenek megmutatni a festést. A legnagyobb biológiai struktúrától a legkisebbig a szövetek és sejtekig. Ez azzal a ténnyel érhető el, hogy a színezékek kémiai reakcióba lépnek a szövetek, sejtek vagy organellák molekuláival.

Vád

A hisztokémiai reakció magában foglalhatja a technika végrehajtását megelőző lépéseket, például a szövet rögzítését, beágyazását és kivágását. Ezért figyelembe kell venni, hogy ezekben a lépésekben az azonosítandó szerkezet megsérülhet, ami hamis negatív eredményeket eredményez, még akkor is, ha van.

Ennek ellenére fontos a szövet korábban elvégzett rögzítése, mivel megakadályozza az autolízist vagy a sejtpusztulást. Ehhez kémiai reakciókat alkalmaznak olyan szerves oldószerekkel, mint például a formaldehid vagy a glutaraldehid.

A szövet beillesztése úgy történik, hogy a vágás megtartja szilárdságát, és ezzel megakadályozza a deformációt. Végül a kivágást mikrotomával készítik a minták optikai mikroszkópos vizsgálata céljából.

Ezenkívül a hisztokémiai festés megkezdése előtt ajánlott, hogy a külső vagy belső pozitív kontrollokat építsék be minden egyes vizsgálati tételbe. Amellett, hogy a vizsgált szerkezetekhez speciális festékeket alkalmaznak.

Hisztokémiai foltok

A hisztokémiai technikák kialakulásától napjainkig sokféle foltot alkalmaztak, beleértve a leggyakrabban használt festményeket is: Periodic acid Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen és Gram.

Hasonlóképpen, ritkábban használnak más színezékeket, például India tintát, orceint vagy Masson trikrómfoltját.

Periódusos sav-Schiff (PAS)

Ezzel a színezéssel megfigyelhetők a nagy szénhidráttartalmú molekulák, például: glikogén és mucin. Ugyanakkor hasznos mikroorganizmusok, például gombák és paraziták azonosítására is. A bőrön és más szövetekben bizonyos struktúrák (alapemembrán) mellett.

Ennek a festésnek az az alapja, hogy a festék oxidálja a két közeli hidroxilcsoport közötti szénkötéseket. Ez az aldehidcsoport felszabadulását eredményezi, és ezt a Schiff-reagens detektálja, amely lila színűvé válik.

A Schiff-reagens bázikus fuksinból, nátrium-metabiszulfitból és sósavból áll, ezek az alkotóelemek felelősek a lila színért, ha aldehidcsoportok vannak jelen. Ellenkező esetben színtelen sav képződik.

A színezés intenzitása a monoszacharidokban jelen lévő hidroxilcsoportok mennyiségétől függ. Például a gombákban, az alagszerű membránokban, a mucinokban és a glikogénben a szín vörösből lila színű lehet, míg a magok kék színűek.

Grocott

A paraffinnal beágyazott szövetek gombáinak azonosításakor a legnagyobb érzékenységű foltok. Ez lehetővé teszi a különféle gombaszerkezetek azonosítását: többek között a hífákat, spórokat, endoszpórokat. Ezért a mikozis diagnosztizálásának rutin foltnak tekintik.

Különösen olyan pulmonális mycózisok diagnosztizálására alkalmazzák, mint például a Pneumocystis nemzetség és Aspergillus nemzetségek által okozott pneumocystosis vagy aspergillosis.

Ez az oldat ezüst-nitrátot és krómsavat tartalmaz, ez utóbbi fixáló és színezőanyag. Az indok az, hogy ez a sav a gombaszerkezetekben, például a gombák sejtfalában lévő mukopolisaharidokkal, a hidroxilcsoportok aldehidekké történő oxidációját eredményezi.

Végül az oldatban található ezüst az aldehidekkel oxidálódik, feketé színű színben képződik, amelyet argentafin reakciónak hívnak. Kontrasztfestékek, például halványzöld, szintén alkalmazhatók, így a gombás struktúrákat feketében, világos zöld háttérrel lehet megfigyelni.

Ziehl-Neelsen

Ez a festés bizonyos mikroorganizmusokban, például a Nocardia, Legionella és Mycobacterium nemzetségekben, részben vagy egészben a sav-alkohol-rezisztencia jelenlétén alapszik.

E folt használata ajánlott, mivel a korábban említett mikroorganizmusok sejtfala komplex lipideket tartalmaz, amelyek akadályozzák a festékek behatolását. Különösen a légúti mintákból.

Ebben erős színezőanyagokat, például karbolfuksint (bázikus színezék) használnak, és hőt alkalmaznak, hogy a mikroorganizmus megtartsa a színezéket, és ne elszíneződjön savakkal és alkoholokkal. Végül metilénkék oldatot alkalmazunk az elszíneződött struktúrák színezésére.

A sav-alkohol-rezisztencia jelenlétét a vörös színű struktúrákban figyelik meg, míg a fakulásnak nem ellenálló struktúrák kék színűek.

Gram és kínai tinta

A Gram nagyon hasznos folt többek között bakteriális és gombás fertőzések diagnosztizálásában. Ez a festés lehetővé teszi a Gram-pozitív és a Gram-negatív mikroorganizmusok megkülönböztetését, világosan megmutatva a sejtfal összetételében fennálló különbségeket.

Míg az indiai tinta folt, amelyet a poliszacharidokat (kapszulát) tartalmazó struktúrák kontrasztálására használnak. Ennek oka az, hogy egy gyűrű alakul ki a környezetben, ami a Cryptococcus neoformans esetében lehetséges.

orcein

Ezzel a festéssel a különféle sejtek elasztikus szálai és kromoszómái elszíneződnek, lehetővé téve ez utóbbi érési folyamatának értékelését. Ezért nagyon hasznos volt citogenetikai vizsgálatokban.

Ez azon alapul, hogy a festéket a molekulák, mint például a DNS, negatív töltésével veszik fel, amely sokféle sejtmagjában található. Tehát ezeket kék-sötét lila színűre festették.

Masson trikrómja

Ezt a foltot olyan mikroorganizmusok vagy anyagok azonosítására használják, amelyek melanikus pigmenteket tartalmaznak. Ez a mycózis, melyet eltérő gombák, pheohifomycosis és fekete szemű eumycetoma okoznak.

Végső gondolatok

Az utóbbi években sok előrelépés történt az új diagnosztikai technikák létrehozásában, amelyekben hisztokémia szerepel, de kapcsolódik más alapokhoz vagy alapelvekhez. Ezeknek a technikáknak más célja van, mint az immunhisztokémia vagy az enzimohisztokémia esetében.

Irodalom

1. Acuña U, Elguero J. Histoquímica. Chem. 2012-ben; 108 (2): 114-118. Elérhető a következő címen: are.iqm.csic.es
2. Mestanza R. A mikroorganizmusok azonosítására használt PAS, Grocott és Ziehl-Neelsen hisztokémiai foltok gyakorisága, amelyet az Eugenio Espejo Speciális Kórház Patológiai Anatómiai Szolgálatában végeztek 2015-ben.. Ecuadori Központi Egyetem, Quito; 2016.Attól elérhető: dspace.uce.edu
3. Tapia-Torres N, Paz-Pérez-Olvera C, Román-Guerrero A, Quintanar-Isaías A, García-Márquez E, Cruz-Sosa F. Hisztokémia, az összes fenoltartalom és a litsea levél és fa antioxidáns hatása glaucescens Kunth (Lauraceae). Fa és erdők. 2014 20 (3): 125-137. Elérhető: redalyc.org
4. Colares, MN, Martínez-Alonso, S., Arambarri, AM. A gyógyászati ​​szempontból érdekes faj Tarenaya hassleriana (Cleomaceae) anatómiája és hisztokémiája. Latin-amerikai és karibi gyógyszer- és aromás növényekről szóló 2016. évi közlemény; 15 (3): 182-191. Elérhető: redalyc.org
5. Bonifaz A. Alapvető orvosi mikológia. 4. kiadás. Mexikó: McGraw-Hill Interamericana szerkesztők, SA de CV 2012.
6. Silva Diego Filipe Bezerra, Santos Hellen Bandeira de Pontes, León Jorge Esquiche, Gomes Daliana Queiroga de Castro, Alves Pollianna Muniz, Nonaka Cassiano Francisco Weege. A nyelv orsósejt laphámsejt-karcinómájának klinikológiai patológiás és immunhisztokémiai elemzése: ritka eset. Einstein (São Paulo) 2019; 17 (1): eRC4610. A következő címen szerezhető be: scielo.br