KÖZÉPPONTJÁBAN: INDOKLÁS, ELKÉSZÍTÉS, FELHASZNÁLÁSOK ÉS KORLÁTOZÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

Az OF vagy a glükóz fermentációs táptalaj egy félszilárd agar, amelyet kifejezetten a szénhidrátok oxidatív és fermentációs anyagcseréjének tanulmányozására fejlesztettek ki az Enterobacteriaceae-en kívüli fontos mikroorganizmusok olyan csoportjában, amelyeket nem enterikus Gram-negatív baktériumoknak neveznek.

Hugh és Leifson készítette; ezek a kutatók rájöttek, hogy a szénhidrátok savtermelésének szokásos módszerei nem voltak alkalmasak a baktériumok ezen specifikus csoportjára.

A. Az közeg kereskedelmi alapja. B. Az OF tápközeggel rendelkező csövek. Forrás: A és B Fotók a szerző MSc-ről. Marielsa Gil.

Ennek oka az, hogy a nem enterális Gram-negatív rudak általában alacsony mennyiségű savat termelnek, ellentétben az Enterobacteriaceae-vel.

Ebben az értelemben az OF tápközeg olyan különleges tulajdonságokkal rendelkezik, amelyek kimutatják a képződött sav kis mennyiségét, mind oxidatív, mind fermentációs úton. Ezek a különbségek a peptonok, a szénhidrátok és az agar mennyiségével függnek össze.

Ez a táptalaj kevesebb peptont és magasabb szénhidrátkoncentrációt tartalmaz, csökkentve ezzel azokat a termékeket, amelyek lúgosítják a tápközeget a fehérje metabolizmus eredményeként, és növeli a savak képződését a szénhidrátok felhasználása miatt.

Másrészt az agarmennyiség csökkenése elősegíti a termelt sav terjedését a tápközegben, a mozgékonyság megfigyelése mellett.

Az OF táptalaj peptonból, nátrium-kloridból, brómtimol-kékből, dikálium-foszfátból, agarból és egy szénhidrátból áll. A leggyakoribb szénhidrát a glükóz, de mások is használhatók, amelyek szerint tanulmányozni kell, például többek között a laktóz, maltóz, xilóz.

bázis

Mint minden táptalajon, az OF tápközegnek tápanyagokat kell tartalmaznia, amelyek garantálják a baktériumok növekedését; ezek az anyagok peptonok.

A szénhidrát viszont energiát szolgáltat és ugyanakkor arra szolgál, hogy megvizsgálja a mikroorganizmus elleni viselkedését, azaz lehetővé teszi a baktériumok osztályozását oxidációs, fermentációs vagy nem szacharolitikus organizmusként.

Az OF táptalaj 1: 5 pepton / szénhidrát arányt tartalmaz, szemben a 2: 1 szokásos tápközeggel. Ez biztosítja, hogy a peptonok lebomlásával képződő lúgos aminok mennyisége nem semlegesíti a gyenge savak képződését.

Másrészt a tápközeg nátrium-kloridot és dikálium-foszfátot tartalmaz. Ezek a vegyületek ozmotikusan stabilizálják a közeget és szabályozzák a pH-t. A brómtimolkék a pH-mutató, amely a tápközeg színét zöldből sárgává változtatja sav előállításakor.

Egyes mikroorganizmusok képesek szénhidrátokat felhasználni az oxidatív vagy fermentációs úton, míg mások nem használják egyik módszert sem.

Ez az egyes mikroorganizmusok tulajdonságaitól függ. Például néhány szigorú aerob mikroorganizmus oxidálhat bizonyos szénhidrátokat, a fakultatív anaerobok pedig oxidálhatják és erjeszthetik őket a körülvevő környezettől függően, míg mások nem oxidálják vagy erjesztik a szénhidrátokat (asakarolitikus).

Végül megváltozik a CDC által javasolt OF táptalaj módosítása, amely egy speciális OF bázist tartalmaz, amelynek indikátoraként fenolvörös van.

Oxidációs folyamat

A glükóz-oxidációs folyamathoz, mint a fermentációs folyamathoz, sem a glükóz foszforilezéséhez nincs szükség. Ebben az esetben az aldehidcsoport karboxilcsoporttá oxidálódik, glükonsavat eredményezve. Ez viszont 2-ketoglükonsavvá oxidálódik.

Ez utóbbi vagy felhalmozódik, vagy bomlik két piruvasavmolekulává. Ez a rendszer oxigén vagy valamilyen szervetlen vegyület jelenlétét igényli a végső elektronakceptorként.

A savak ilyen módon történő előállítása gyengébb, mint a fermentációs úton előállított.

Erjedési folyamat

Annak érdekében, hogy a glükózerjedés a rendelkezésre álló útvonalak bármelyikével megtörténjen, először foszforilezni kell, és glükóz-6-foszfáttá kell válni.

A glükózerjesztés több útvonalon is zajlik, a legfontosabb az Embden-Meyerhof-Parnas útvonal, de az Entner-Doudoroff vagy a Warburg-Dickens hexóz-monofoszfát útvonalat is felvehetik, más néven a pentózok lebomlása.

A választott út attól a enzimes rendszertől függ, amely a mikroorganizmus rendelkezik.

Via Embden-Meyerhof- Parnas

A glükóznak az Embden-Meyerhof-Parnas úton történő fermentációja során két trióz molekulára osztódik, majd később különféle szénvegyületekké bontható le, amíg a glicerid-aldehid-3-foszfát képződik. Innen származik egy közbenső anyag, azaz a piruvsav.

Innentől kezdve különféle vegyes savak képződnek, amelyek fajonként változhatnak.

Ez a rendszer oxigén hiányában fordul elő, és szerves vegyületet igényel a végső elektronakceptorként.

Entner-Doudoroff út

Az glükóznak az Entner-Doudoroff útvonalon történő fermentációjában a glükóz-6-foszfát glükono-ᵼ-lakton-6-foszfáttá alakul, és onnan 6-foszfo-glukonáttá és 2-keto-3-dezoxi-6- -á oxidálódik. foszfo-glükonátot, hogy végül piruvsavat képezzen. Ehhez az úthoz oxigénre van szükség ahhoz, hogy a glikolízis megtörténjen.

Pentózos lebontási út vagy Warburg-Dickens Hexoxa monofoszfát út

Ez az út a fenti 2 hibridje. Az Entner-Doudoroff úthoz hasonlóan kezdődik, de később a glicerraldehid-3-foszfát a piruvsav prekurzoraként képződik, amint ez az Embden-Meyerhof-Parnas úton történik.

Készítmény

Mérni:

2 g pepton

5 g nátrium-klorid

10 g D-glükóz (vagy az előállítandó szénhidrát)

0,03 g brómtimol-kék

3 gr agar

0,30 g dikálium-foszfát

1 liter desztillált víz.

Az összes vegyületet összekeverjük a szénhidrát kivételével, és oldjuk fel 1 liter desztillált vízben. Melegítsük és rázzuk, amíg teljesen fel nem oldódik.

Az elegyet 50 ° C-ra hűtjük, hozzáadunk 100 ml 10% -os (szűrt) glükózt.

Aszeptikusan osszunk el 5 ml tápközeget pamutfedélű kémcsövekbe és autoklávban 15 ° C-os nyomáson, 15 ° C-on, 15 percig.

Hagyja megszilárdulni függőleges helyzetben.

A tápközeg pH-jának 7,1-nek kell lennie.

Hűtőszekrényben tárolandó.

Alkalmazások

Az OF táptalaj egy speciális táptalaj a mikroorganizmus szénhidrátokkal szembeni metabolikus viselkedésének meghatározására. Különösen azok számára, amelyek kevés, gyenge vagy nem tartalmaznak savakat.

elvetett

Minden mikroorganizmushoz 2 OF cső szükséges, mindkettőt be kell oltani a vizsgált mikroorganizmussal. A kolóniát egyenes fogantyúval vesszük, és a cső közepére szúrjuk át anélkül, hogy az alja elérnénk. Több punkció is elvégezhető, mindaddig, amíg nincs érdeklődés a mozgékonyság megfigyelése iránt.

Az egyik csőhöz steril folyékony vazelin vagy steril olvadt paraffin (kb. 1–2 ml) rétegét adjuk az „F” betűvel feliratozva. A másik cső eredeti marad, és "O" feliratú. Mindkét csövet 35 ° C-on inkubáltuk, és naponta figyeltük 3-4 napig.

Értelmezés

Metabolizmus és gáztermelés

Táblázat: A mikroorganizmusok osztályozása a csövek nyitott (oxidatív) és zárt (fermentációs) viselkedése alapján

Forrás: a szerző készítette MSc. Marielsa gil

A gázt buborékok képződésével vagy az agar elmozdulásával figyeljük meg.

Meg kell jegyezni, hogy egy olyan szervezet, amely csak a glükózt oxidálja, de nem erjed, nem lesz képes más szénhidrátokra fermentálni, mindenesetre csak oxidálja. Ezért ebben a helyzetben a többi szénhidrát tanulmányozására szolgáló lezárt csövet kihagyják.

Mozgékonyság

Ezen felül, a mozgékonyság látható az OF táptalajban.

Pozitív motilitás: növekedés, amely nem korlátozódik az oltás területére. A cső oldala felé növekedés tapasztalható.

Negatív motilitás: növekedés csak a kezdeti inokulumban.

QA

A következő törzsek használhatók minőség-ellenőrzésként: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa és Moraxella sp. A várt eredmények:

1. coli: Glükóz-fermentor (mind sárga, mind pezsgő csövek).
2. aeruginosa: Glükóz-oxidálószer (nyitott sárga cső és zöld vagy kék pecsét).
3. Moraxella sp: Nem szacharolitikus (zöld vagy kék nyitott cső, zöld zárt cső).

korlátozások

-Néhány mikroorganizmus nem tud növekedni OF közegben. Ezekben az esetekben a tesztet megismételjük, de a tápközeghez 2% szérumot vagy 0,1% élesztõkivonatot adunk.

-Oxidációs reakciókat gyakran csak a felület közelében figyelnek meg, és a táptalaj fennmaradó része zöld maradhat, ugyanúgy, mint pozitív.

Irodalom

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok a klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztő Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. OF OF Glucose Medium. Elérhető a következő címen:
5. Conda Pronadisa Laboratories. Glükózközegből. Elérhető a következő címen: condalab.com
6. BD Laboratories. 2007. OF Basal Medium. Elérhető a következő címen: bd.com