MEDIO MIO: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2025

A MIO táptalaj egy biokémiai teszt, amelyet az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumfajok azonosításának elősegítésére használnak. Meglehetősen tápláló, és glükózból, élesztő-kivonatból, peptonból, tripteinből, L-ornitin-hidrokloridból, brómkrezol-lilaból és agarból áll.

A rövidítése (MIO) jelentése leírja az ebben a közegben megfigyelhető összes paramétert; mozgékonyság, indol és ornitin. A motilitás a mikroorganizmus azon képessége, hogy mozogjon a flagella jelenléte miatt. Ennek a tulajdonságnak a megfigyelése érdekében a táptalaj konzisztenciájának félszilárdnak kell lennie, tehát a készítmény kevesebb agart tartalmaz.

Az eredmények értelmezésének vázlata a MIO közegben. Forrás: A szerző készítette MSc. Marielsa gil

Az indol termelése a triptofánáz enzim jelenlétét mutatja, amely a triptofán aminosavra hat, és feltáró reagenst igényel az indol termelésének láthatóvá tétele érdekében.

Végül az ornitin meghatározza, hogy a baktérium képes-e dekarboxilezni az aminosavat, vagyis ha rendelkezik az orinitin-dekarboxiláz enzimmel.

bázis

Pepton, élesztõkivonat és triptein

Ezek az elemek hozzájárulnak ennek a közegnek a táplálkozási erejéhez. Tápanyagok és nélkülözhetetlen aminosavak forrásaként szolgálnak a baktériumok fejlődéséhez.

Ezen túlmenően a triptein triptofán forrása, amely megmutatja a triptofanáz enzim jelenlétét, amely reduktív deaminációval lebontja a triptofánt, felszabadítva az indolt, a piruvsavat, az ammóniát és az energiát.

Az indol színtelen, ezért jelenlétét öt csepp Ehrlich vagy Kovacs reagens hozzáadásával derítjük fel, mindkettő p-dimetil-amino-benzaldehiddel.

Ennek a vegyületnek az aldehidcsoportja reagál az indollal, gyűrű alakú fuksiavörös terméket hozva létre az agar felületén.

A szín bármely nyomatát pozitív tesztnek kell tekinteni. A bizonyítékot azonnal el kell olvasni, mivel az idő múlásával a szín romlik.

Ezenkívül ezt a tesztet fel kell tárni az ornitin motilitásának és dekarboxilezési eredményeinek megállapítása után.

Értelmezés

Pozitív teszt: fukszia vörös gyűrű képződése Kovacs-reagens cseppek hozzáadásakor.

Negatív teszt: nincs gyűrűképződés.

Mozgékonyság

A baktériumok mozgásképessége nyilvánvaló, ha zavaros közeget figyelnek meg, vagy ha vastag növekedési vonal van, amely kiterjed az eredeti oltás körül.

A negatív motilitási tesztet egy vékony növekedési vonal megfigyelésével lehet bizonyítani, és körülötte minden növekedés nélkül lesz.

Fontos, hogy az indol felfedése előtt a motilitást leolvassák, mivel a reagens hozzáadása elhomályosítja az egész tápközeget.

A mobil, de lassan növekvő baktériumokban nehéz bizonyítani motilitását ezzel a táptalajjal. Ebben az esetben javasolt más tesztek vagy módszerek használata, például a közepes motilitás vagy a csepp-függő módszer.

Szőlőcukor

A glükóz az erjeszthető szénhidrát, amely amellett, hogy energiát szolgáltat, megsavanyítja a környezetet, amely szükséges feltétele az ornitin aminosav dekarboxilezésének.

A glükóz fermentációjának mindig meg kell történnie, azzal az elvvel kezdve, hogy az Enterobacteriaceae családba tartozó összes baktérium fermentálja a glükózt.

L-ornitin

Abban az esetben, ha a baktériumok az ornitin-dekarboxiláz enzimet állítják elő, ez akkor működhet, ha a táptalajt megsavanyítják a glükóz fermentációjával.

Az ornitin-dekarboxiláz enzim hatással van az aminosav karboxil-csoportjára, amely egy putrezinnek nevezett amint eredményez, amely ismét lúgosítja a közeget.

Ezt a tesztet 24 órás inkubálás után kell elolvasni, mert ha megpróbálja olvasni, mielőtt tévesen értelmezheti a tesztet hamis negatívval.

Emlékeztetni kell arra, hogy az első reakció, amely a glükóz erjedésével jár, tehát a közeg kezdeti fázisban (első 10–12 óra) sárgára vált. Ha később ornitin dekarboxilezés történik, a közeg lila színűvé válik.

Fontos az ornitin dekarboxilezési tesztjének értelmezése az indol feltárása előtt, mivel Kovacs-reagens hozzáadása megváltoztatja a közeg színét.

Értelmezés

Negatív teszt: közepes színű sárga vagy sárga háttérrel.

Pozitív teszt: közepes, teljesen lila.

PH mutató

Ebben az esetben brómkrezol-lila anyagot használunk; az a felelős, hogy felfedje, ha a közegben megváltozik a pH. Savasodáskor a jelző sárgára, lúgosodáskor pedig lila színűre vált.

Vetési és fejlesztési technika

A MIO táptalaj elvetéséhez egyenes hurkot vagy tűt használunk, és ezzel összegyűjtjük a vizsgált kolónia egy részét.

A MIO közepén egyenes vonalban mély pontosságot végeznek. Nem ajánlott dupla lyukasztást végezni, mivel hamis képet ad a motilitásáról, ha a punkciót nem ugyanazon a helyen végezzük.

Inkubáljuk 24–48 órán keresztül 37 ° C-on, aerobiosisban. Nézze meg az eredményeket ebben a sorrendben: mozgékonyság, az ornitin dekarboxilezése és végül feltárja az indolt.

Javasoljuk, hogy aszeptikusan távolítsunk el 2 ml tápközeget, tegyük át egy steril csőbe, és végezzük el az indolteszttel, hogy ha ez negatív, az eredeti cső többi részét további 24 órán át inkubálhatjuk, hogy az indol újra felfedjék.

Az indol fejlesztését az alábbiak szerint végezzük: 3-5 csepp Kovacs-reagenst adunk az MIO-táptalajhoz és erőteljesen keverjük. Megfigyelhető, hogy megjelenik-e egy vörös-fukszia gyűrű vagy sem.

Készítmény

MIO közeg

Mérjünk ki 31 g MIO-tápközeget és oldjuk fel egy liter desztillált vízben.

Melegítsük, amíg a keverék egy percig forrni nem hagy, gyakran rázva, amíg az agar teljesen feloldódik. Ossza el a 4 ml tápközeget 13/100 kémcsövekbe pamutkupakkal.

Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig. Vegye ki az autoklávból, és hagyja egyenesen állni egy állványban, oly módon, hogy félig szilárd tömb alakuljon ki.

Hűtőszekrényben tárolandó 2-8 ° C-on. A baktériumtörzs vetése előtt hagyja felmelegedni.

A dehidrált táptalaj színe bézs, az elkészített táptalaj kissé opálos lila.

Az elkészített táptalaj végső pH-ja 6,5 ​​± 0,2

A tápközeg savas pH-n sárgára vált, lúgos pH-ban lila.

Kovacs reagens (indol tesztfejlesztő)

Ezt a reagenst az alábbiak szerint állítják elő:

Mérjünk be 150 ml amil-, izoamil- vagy butil-alkoholt (a három közül bármelyik). Ebben feloldunk 10 g p-dimetil-amino-benzaldehidet. Ezt követően lassan hozzáadunk 50 ml tömény sósavat.

Az elkészített reagens színtelen vagy halványsárga. A borostyán üvegben és hűtőszekrényben kell tartani. A sötétbarna szín azt mutatja, hogy romlik.

Az Ehrlich-reagenst a Kovacs-reagens is helyettesítheti. Ez utóbbi, mivel érzékenyebb, inkább az indolt tárja fel azokban a baktériumokban, amelyek kis mennyiségben termelik azt, például néhány nem erjesztő grammnegatív rudat és bizonyos anaerobokat.

Használat

Ez a táptalaj egy teszt, amely kiegészíti az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok azonosítására szolgáló biokémiai tesztek sorozatát.

Az ornitin dekarboxilezési adatok megkülönböztetik a Shigella sonnei-t, amely pozitív tesztet mutat, a Shigella boydii-t, a Shigella flexnerit és az S. dysenterieae-t, amelyek negatív tesztet mutatnak.

Ez megkülönbözteti a Klebsiella nemzetet is, amely negatív tesztet mutat, az Enterobacter nemzettől, ahol a legtöbb faj pozitív.

Forrás: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.

QA

Minden alkalommal, amikor egy MIO tápközeget készítünk, ellenőrző teszt elvégezhető. Ehhez ismert vagy tanúsított törzseket használunk a táptalaj viselkedésének megfigyelésére.

Használható törzsek: Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes és Proteus mirabilis.

A várt eredmények E. coli és M. morganii. Dan M: +, I: + és O: +.

A Klebsiella pneumoniae mind negatív (M: -, I: -, O:-). A Proteus mirabilis és az Enterobacter aerogenes M: + I: - és O: + -ot ad.

Irodalom

1. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok a klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztő Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
2. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Elérhető a következő címen: britanialab.com
5. BD Laboratories. BBL motilitás indol-ornitin (MIO) közepes. 2007. elérhető: bd.com
6. Valtek Laboratories. Közepes MIO motilitás, indol, ornitin. 2010.Támogatható: andinamedica.com