ORCEIN: ALAPOZÁS ÉS ELŐKÉSZÍTÉS - KÉMIA - 2026

Az orceína természetes színű lila, különféle zuzmókból, mint orchilla vagy archill, a fruticose lichen, a Rocella tinctoria és a Lecanora parella kivonatai. A Rocella tinctoria az afrikai és amerikai kontinensen található, bár helyettesíthető más Európában található fajokkal.

Ezt a foltot az ősi idők óta széles körben használják citogenetikai vizsgálatokban. Ebben az értelemben az ecetsavat tartalmazó orceinkészítményt LaCourt vezette be 1941-ben, ezért kezdetben LaCourt-technikának hívták.

Az orcein és az orcein oldat kémiai szerkezete. Forrás: Wikipedia.org/ Oguenther at de.wikipedia (Dr. Guenther)

Hasonlóképpen, egyszerűségének és olcsó költségeinek köszönhetően a lakmus (a zuzmókból kivont folt) előállításához és a szövettani vizsgálatokhoz (sejtek és szövetek festése) alkalmazták.

Számos tanulmány használta ezt a festést más vegyi anyagokkal, például ammónia-pikrokarmináttal és ecetsavval kombinálva az elasztikus szálak és a kromoszómák megfestésére. Jelenleg az orceint továbbra is használják állatok és növények citogenetikai vizsgálataiban.

Nemrégiben Silva és mtsai. 2017 sikeresen felhasználta ezt a foltot a különféle változások megfigyelésére, amelyek a hüvelykujj bőrének rugalmas szálaiban fordulnak elő chilei idősebb felnőtteknél. Ez a tanulmány feltárta, hogyan változnak a hüvelykujj szálai az öregedéssel.

Ebben az értelemben a rugalmas szálak színét barnás-fekete színűnek találták 80 évesnél idősebb egyéneknél; míg a legfiatalabb (60 éves kortól) vörösesbarna színűnek tekintik őket. A citoplazma és más sejtszerkezetek sárgászöldé válnak.

Ez lehetővé tette a rugalmas szálak jelenlétének és állapotának megerősítését, diszpozíciójuk, mennyiségük és integritása szempontjából. Másrészt azt is jelezték, hogy az orcein nagy segítséget nyújt az aneurysma azonosításában és az arteritis diagnosztizálásában, többek között a betegségek között.

bázis

Az orcein a festékek oxazin-csoportjának része, és a festés a DNS-hez való affinitása alapján történik. A festék kötődik ennek a molekulanak a foszfátcsoport által képviselt negatív töltéséhez. Ezért a kromoszómák lila színűek.

A sejt többi struktúrája azonban eltérő színű. Konkrétan, az elasztikus szálak esetében vörösesbarna színűek, sejtmagasságuk kék-től sötét lila színű, míg a kollagén nem folt.

Ezért az orceint arra használják, hogy megfestse a kromatint és megkülönböztesse a nemeket egyes legyekben. Hasonlóképpen, a magok és a hepatitis B antigének által termelt máj zárványok megfesthetők.

Az Orcein oldatok különleges funkcióval rendelkeznek a festés során. Az Orcein A funkciója a sejtek membránjainak lágyítása, elhalálozásuk és megbénításuk megosztásának folyamata. Eközben az orcein B felelős a festés befejezéséért a kromoszómákhoz való tapadás útján.

Készítmény

1% aceto-orcein oldat

Az 1% -os aceto-orcein-oldat elkészítéséhez 2 g orceint oldunk 45 ml jégecetben, előnyösen forróban, és szobahőmérsékleten hozzáadunk 55 ml desztillált vizet.

Ezután folyamatosan keverjük, hogy homogenizáljuk az oldatot, és később hagyjuk pihenni, amíg lehűl. Végül, 4 ° C-on, sötét üvegekben tárolják. Ezt a készítményt a Flores 2012 használja a tehén petesejtek érési szakaszának megfigyelésére.

Ebben az esetben például az aceto-orcein oldatot a szövetre helyezik, amelyet korábban ecetsav-etanolban rögzítettek 24 órán keresztül. Ezt a festési folyamatot 30 percig folytatjuk, majd a szövet elszíneződik.

Hasonlóképpen felhasználható a többsejtű szövetekben lévő organellák azonosítására. Ebben az esetben a száj nyálkahártyájának kenetét megfestettük egy csepp aceto-orcein oldattal, a fedőlemezt a tárgylemezre helyezték, és a sejt alszerkezeteivel rendelkező magja azonnal megfigyelhető.

Lacto-proponikus oldat, 1% orcein

Ezenkívül az orceint más vegyszerekkel, például tejsavval és propionsavval is el lehet készíteni. Ehhez szobahőmérsékleten 23 ml tejsavat és 23 ml propionsavat egy gramm orceint oldunk szobahőmérsékleten; töltsük fel a mennyiséget desztillált vízzel 100 ml-ig.

Ezzel a lakto-propionos orcein oldattal megfigyelhető a növényi sejtek meiotikus megosztásának különböző fázisai. Ebben az esetben az előre rögzített és hidrolizált mintát 15 percre helyezik a lakto-propionos orcein oldatban, majd a szövetet eloszlatják a mikroszkóp lemezein.

A Duque poligén kromoszómákról szóló 2016. évi tanulmányában 2 gramm ecetsavval és 85% tejsavval hígított, 65% ecetsavval hígított orceint tartalmazó készítményt használt. Végül megnézte a Drosophila melanogaster nyálmirigyeinek kromoszómáit.

Orcein A és Orcein B

Fontos megjegyezni, hogy a mintától és az értékelendő tényezőktől függően elkészítjük a megfelelő orcein-oldatot. Így például az orcein A oldathoz 1 N sósavat adunk az osztó sejtek megfigyelése céljából.

Az orcein B oldatot 45% ecetsavban oldjuk. Ez a módszer egy rövidített festési módszer, és általában a kromoszomális struktúrák festésének kiegészítéseként alkalmazható.

Végső gondolatok

Az elmúlt évszázadok óta olyan zuzmók, mint például a Lecanora, Parmelia és Umbilicaria találhatók olyan amerikai országokban, mint Argentína, amelyek nagy orceinforrások. Az olyan európai területek is, mint például a Kanári-szigetek, akkoriban az orchilla nagy termelői voltak.

Ezt exportálták ugyanazon kontinens más városaiba, például Genovába és olyan országokba, mint Anglia, míg Hollandia monopóliumba helyezte a lakmus előállítását az orchillaból. Ezért ezt a zuzmót később csökkentették, amíg hamarosan kihalt.

Ennek eredményeként az orchillát helyettesítették más, festékhatású növényekkel. A szintetikus festékek megjelenése azonban hozzájárult az orcein eredetű zuzmó kereskedelmének megszűnéséhez.

Ez annak köszönhető, hogy Cocq, aki 1812-ben leírta az orcein szintézisét, tudván, hogy azt az orcinol nevű fenolos vegyület szintetizálja. Ennek ellenére a mai napig a legfontosabb az orcein.

Ennek oka lehet az, hogy az orcinol nagyon erős illatú vegyület, és hosszan tartó expozíciója egészségügyi kockázatokat hordozhat, például elveszíti a szagok észlelési képességét. Ezek az agyalapi mirigy átmenetileg végleges lehet, annál nagyobb az expozíció.

Irodalom

1. Ortega L, García R, Morales C. "Gomba által előállított lakkáz felhasználása mikrobiológiai színezékek (orcein és kristályibolya) lebontására." Fiatalok a tudományban 2. 2015; 633-637. Elérhető a: jovenesenlaciencia.ugto.mx oldalon.
2. Barcat J. Orceína és elasztikus szálak. Orvostudomány (Buenos Aires) 2003; 63: 453-456. Elérhető a következő címen: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. A hüvelykujj repülõ arcbõrének szövettani jellemzõi chilei egyéneknél a daktilogram elhalványulásával. J. Morphol. 2017-re; 35 (3): 1107-1113. Elérhető a scielo.conicyt oldalon.
4. Orrillo M, Merideth B. "Burgonya szaporodási biológia és citogenetika." Nemzetközi Burgonya Központ (CIP). Műszaki leírás. Elérhető a következő címen: research.cip.cgiar.org/
5. Flores F. "A tehén petesejtek (bos taurus) gyűjtése, tenyésztése és in vitro érlelése a bolíviai felvidéken.". Az Altiplano Nemzeti Egyetem, Puno-Peru; 2012. Elérhető a következő címen: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Polénikus kromoszómák: Az endoreduplikáció jelenségének áttekintése. Kolumbiai Nemzeti Egyetem, Medellín; 2016. elérhető: edu.
7. Camarena F. sejt- és molekuláris biológia. Gyakorlati kézikönyv. A kaliforniai Baja Autonóm Egyetem. 2017. Elérhető a következő címen: pez.ens.uabc.mx.
8. FAO / NAÜ. 2018. Kézikönyv a vad és tenyésztett Anastrepha ludens (Loew) megkülönböztetésére a normál törzsből („bi-szexuális”) és a genetikailag nemű törzsből (Tapachula-7), besugárzva és besugárzva. Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF és a Soto García DN Egyesült Nemzetek Élelmezési és Mezőgazdasági Szervezete. Róma, Olaszország, 95 pp.
9. Orcein. (2018, november 30). Wikipédia, a szabad enciklopédia. A konzultáció dátuma: 2019. július 31, 03:38, es.wikipedia.org.
10. Merck Millipore. (2018, július 16). Orcein mikroszkópia a Certistain mikroszkópos vizsgálathoz. Elérhető a merckmillipore.com oldalon