XANTHOPROTEIN REAKCIÓ: INDOKLÁS, ELJÁRÁS, FELHASZNÁLÁS - KÉMIA - 2025

A xanthoprotein reakció egy kémiai eljárás, amelynek segítségével meghatározzuk az aromás aminosavak, például tirozin és triptofán jelenlétét vagy hiányát, amelyek szabad formában lehetnek, vagy oldható fehérjéket, peptideket vagy polipeptideket képezhetnek.

Arra is felhasználták, hogy felmérjék a vérben olyan mérgező anyagokat, amelyek szerkezetükben benzolcsoportot tartalmaznak. Ez a teszt a xanthoprotein Becher reakcióként is ismert.

Pozitív xanthoprotein reakció Forrás: A videóból vett:

A xantoprotein reakcióban koncentrált salétromsavat, hőt és semlegesítő lúgot használnak. Ha az oldat semlegesítésekor sárgáról narancssárgára változik, a vizsgálat pozitívnak tekinthető. A megfigyelt elszíneződés a benzolcsoportok nitrifikálásából származó nitrogéntartalmú vegyületek képződésének tudható be.

Ha mennyiségileg meg kell határozni a teljes fehérjemennyiséget, akkor egyéb fehérje-meghatározási módszereket, például Biuret-et kell alkalmazni.

A xantoprotein reakciót főként olyan anyagok elemzésekor használják, amelyek kémiai összetétele nem ismert. Ez a reakció általában egy olyan tesztsorozat része, amely segít meghatározni egy adott anyag vagy kivonat kémiai összetételét. Ezért széles körben használják a kutatók.

Másrészt a Becher xanthoprotein reakcióját fenol- és indoltartalmú anyagok kimutatására használják a vérben, lehetővé téve a nephropathia megjelenését, még mielőtt más későbbi paraméterek növekednének.

bázis

A reakció alapvetően a benzolcsoport jelenlétét detektálja mind az aminosavakban, mind a fehérjékben és a peptidekben. A salétromsav az aminosavak benzolgyűrűjére hat, és fenol-nitrovegyületeket képez.

A reakció végrehajtásához hő szükséges, általában csapadék képződik, amely elhomályosítja a közeget, és így tejszerűvé válik. A csapadék fehér vagy sárga színű lehet. Végül lúgosítási lépésre van szükség, amely hangsúlyozza a színt. Ehhez bázist, például 40% nátrium-hidroxidot vagy ammóniát alkalmazunk.

A reakciót akkor tekintjük pozitívnak, ha a melegítés során erős sárga színű, vagy a reakció lúgossá válásakor sötét narancssárga szín figyelhető meg. Az észlelt aminosavak elsősorban tirozin és triptofán.

Xanthoprotein reakció. Forrás:

A fenilalanin esetében, bár ez egy aromás aminosav, ennek az aminosavnak a benzolmagját nehéz egyszerű reakcióban nitrálni, ezért negatív vagy gyenge pozitív reakciót bocsát ki.

Általában a xanthoprotein teszt kiegészíthető a Hopkins-Cole teszttel, amelyet a triptofán specifikus azonosítására használnak. Ha a xanthoprotein-teszt pozitív, és a Hopkins-Cole-teszt negatív, akkor a triptofán jelenléte ebben az oldatban kizárt, főleg tirozin jelenlétére utalva. Hasonlóképpen, kiegészíthető többek között a tirozin kimutatására szolgáló Millon reakcióval.

Ez a reakció felhasználható vér-, plazma- vagy dezalbuminált szérummintákon is urémiás vagy veseelégtelenség diagnosztizálására. Ebben az esetben a bél puffadásból származó mérgező anyagok (fenolos és indol) kimutatására van szükség.

Ezeknek az anyagoknak benzolcsoportja van, és ezért pozitív xanthoprotein reakciót adnak, bár a reagáló anyag sem aminosav, sem fehérje.

Folyamat

- Xanthoprotein reakció az aminosavak aromás csoportokkal történő kimutatására

Helyezzen 1 ml vizsgálati mintát egy tiszta, száraz kémcsőbe.

- Adjunk hozzá 0,5 ml tömény salétromsavat.

- Inkubáljuk a keveréket 70 ° C-os vízfürdőben 2 percig. Korábban készítse elő a vízfürdőt az említett hőmérsékleten.

- Amikor eltávolítja a csövet a vízfürdőből, megfigyelhető, hogy az oldat tejszerűvé vált és bizonyos színű sárgásfehér színű lett.

-Az oldatot lehűtjük oly módon, hogy hideg vizet csepegtetünk a cső aljára.

-A készítmény lúgossá válik oly módon, hogy lassan (cseppenként) adunk 40% -os nátrium-hidroxid-oldatot, amíg a szín meg nem változik.

-Ha a teszt pozitív, sötét narancssárga gyűrű alakul ki a folyadékok felületén.

-Ha a reakció negatív, akkor nem alakul ki szín.

- Xanthoprotein reakció fenolos és indolos anyagok kimutatására a vérben

- Oldjunk ki 5 cm3-es 20% triklór-ecetsavat 5 cm3 vénás vérben, plazmában vagy szérumban, ez utóbbi a leginkább jelezve. Alaposan keverjük össze és szűrjük.

- Vegyünk 2 ml szűrletet és keverjük össze 0,5 ml salétromsavval. Ezután forrásig melegítjük, ehhez a csövet 30 másodpercre közvetlenül a könnyebb láng fölé helyezzük. Ezután vízzel lehűtjük, és 1,5 ul 33% nátrium-kloridot adunk hozzá.

Ezt a következőképpen kell értelmezni:

- Negatív eredmény: sárgás színű.

-Pozitív (+) citrom-sárga eredmény.

- (++) aranysárga.

- (+++) sötét sárga-barna

Értelmezhető egy referencia Autenrieth kolorimetrikus skála felhasználásával is, amely különböző kálium-dikromát koncentrációkból áll. Ezt 10:10 hígításban állítjuk elő 0,03874% -os törzsoldatból. Minden cső százalékot képvisel.

Értelmezési skálák

Kétféle értelmezési skálát hívunk: ősi és modern. A normál értékek:

Régi asztal: 75-85%

Modern asztal: 15-25% között

Ha a tesztcső színe két standard cső közepén van, a két mérés között átlagot kell meghatározni.

A kálium-dikromát-standard oldatot az alábbiak szerint készítjük: megmérünk 7,9 ml 10 N kálium-dikromátot, és töltsük fel 100 ml-re egy mérőlombikban. A hígításokat az Autenrieth kolorimetrikus táblázata szerint követjük.

Autenrietus kolorimetrikus táblázat. Forrás: Vásquez A. Xanthoprotein reakció. Spanyol klinikai folyóirat. 1949 35 (5): 326-327. Elérhető a következő oldalon: Elsevier

Használat

A xanthoproteinreakció egy része a biokémiai vizsgálatoknak, amelyek segítik az ismeretlen anyagok kémiai összetételének megismerését. Ez a teszt hozzájárul a fehérjék kémiai elemzéséhez, amelyek szerkezetükben benzolcsoportokat tartalmaz.

Ezt a reakciót a kutatók széles körben használják az érdeklődésre számot tartó anyagok különféle tanulmányaiban.

Ebben az értelemben Vásquez-Jorge és munkatársai ezt és más reakciókat felhasználták a mangrove kagylóból (Crassostrea rhizophorae) kivont folyadékok fehérjetartalmának vizsgálatához.

Hasonlóképpen, Rojas és munkatársai (2009) tesztsorozatokat alkalmaztak, beleértve a xanthoprotein reakciót is a glikomakropropeptidek elemzésére a ricotta savósav csapadékokban.

Másrészről, a Becher xanthoprotein reakcióját Volhard módosította, hogy más célokra felhasználhassa. Ebben az esetben olyan fenolos és indolos anyagok kimutatására, amelyek sokkal korábban (hetekben vagy hónapokban) emelkedhetnek, mielőtt a karbamid és a maradék nitrogén szintje a vérben megnő.

Ezeket a mérgező hulladékokat az ételek bélcsípése képezi.

Ezek az anyagok felhalmozódnak a vérben, ha nem megfelelően választják el, ezért a pozitív xanthoprotein-teszt előre tudja jelezni a veseelégtelenség vagy az urémiás állapot korai kialakulását.

A szín intenzitásától függően meghatározhatja, mennyire fejlett. Ebben az esetben a teszt mennyiségi.

Egészséges embereknél ez a teszt enyhén sárga színű, amely megfelel a vérben lévő triptofán és tirozin normál szintjének.

Míg vesebetegekben a xanthoprotein reakció erősen pozitív, többek között a következő anyagok jelenléte miatt: fenol, indol, paracresol, aromás oxisavak.

Óvintézkedések

Ezt a tesztet képzett szakembereknek kell elvégezni. Valamennyi biobiztonsági előírást figyelembe kell venni, mivel a felhasznált reagensek maró savak és lúgok.

Ha véletlenül néhány csepp salétromsav esik a bőrre vagy a körömre, akkor sárgává válnak, mivel mindkét szerkezet fehérjéket tartalmaz. Ezenkívül a bőrön és a nyálkahártyán súlyos égési sérüléseket okoz.

Bőrrel való érintkezés esetén az alkalmazandó protokoll szerint a területet szappannal és vízzel azonnal kb. 20 percig mossa le.

Ha a szembe fröccsen, bőséges mennyiségű friss vízzel kell lemosni, igyekezve nyitva tartani a szemét.

Irodalom

1. "Xanthoprotein reakció" Wikipédia, A Ingyenes Enciklopédia. 2019. szeptember 2., 17:49 UTC. 2019. október 21., 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. A mangrove-osztriga (Crassostrea rhizophorae) folyadékkivonatainak fizikai-kémiai jellemzése és fehérjetartalma. Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. Redalyc-ben kapható.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. A GMP izolálása és teljesítése savó kicsapásával triklór-ecetsavval. Elegendő. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Elérhető a: ve.scielo oldalon.
4. Vásquez A. Xanthoprotein reakció. Spanyol klinikai folyóirat. 1949 35 (5): 326-327. Elérhető a következő oldalon: Elsevier
5. I. Gálvez, O. Gárate. Becher és Andrewes reakciói húgyúti műtétben. A Spanyol Kórház Urológiai Szolgálata. Argentin urológia folyóirat, 395–404