HEMATOXILIN-EOZIN FESTÉS: JELLEMZŐK, FELHASZNÁLÁSOK, TECHNIKÁK - KÉMIA - 2026

A hematoxilin - eozin festési módszer a hematoxilin és az eozin kombinációjának felhasználásával. Ez a pár festék tökéletes duót képez, mivel a hematoxilin alapfestékként működik, az eozin pedig savfesték.

Az lúgos vagy savfestékek megnevezése nem utal az oldatban elért pH-értékre, hanem inkább az uralkodó arányról beszél a birtokukban lévő anionos vagy kationos töltések vagy a kromoforcsoport elhelyezkedése szempontjából.

Hematoxilin - eozinnal (HE) festett, csillogott oszlopos epitélium Forrás: Todd Straus és Vladimir Osipov

Ebben az értelemben a hematoxilint bázikus (kationos) festéknek tekintik, és ezért affinitást mutat a savszerkezetekhez, például a sejtek magjához. Míg az eozin, mint savas (anionos) festék, affinitással rendelkezik lúgos vagy bázikus struktúrákkal, például sejt-citoplazmával szemben.

Ezért ezt a színezék-kombinációt széles körben használják a szövetek festéséhez, mivel ez lehetővé teszi a magok és a citoplazmák egyértelmű megkülönböztetését. A magok sötétkék vagy lila, a citoplazma rózsaszínűek.

A hematoxilin-eozin festés az egyik legszélesebb körben alkalmazott festési módszer a szövettan és a citológia területén, könnyebb kezelhetősége és olcsó költsége miatt. A sejtek, a vastag idegrostok és bizonyos szövetekben található mikroorganizmusok - például paraziták, gombák és baktériumok - megjelenítésére használják.

jellemzők

Hematoxiiin

A hematoxilin semleges festék. A színt biztosító komponens (kromofor) azonban a molekula kationos vagy bázikus központjában található. Ezért affinitása a savszerkezetekhez. Kémiai képlet C ₁₆ H ₁₄ O ₆ és tudományos név 7,11b-indeno kromén-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Elsősorban a sejtekmagjait festi meg, mivel ezek nagyon gazdagok a nukleinsavakban. Megfestheti a vírus eredetű citoplazmatikus zárványokat is.

Annak érdekében, hogy a hematoxilin elszíneződjön, oxidált állapotban kell lennie, és fémhez kötve kell lennie. Ez utóbbi arra szolgál, hogy rögzüljön a szövethez, vagyis peptidként működjön.

Amikor a hematoxilin oxidálódik, hematinné nevezzük. Az oxidációt úgy érik el, hogy a reagenst oxigénnel érintik (öregedés), vagy olyan anyagokkal, amelyek elősegítik annak oxidációját (kémiai oxidáció).

eozin

Az eozin egy vörös vagy rózsaszínű festék. Vízben nem oldódik, bár van egy vízoldható változat. Az eozint általában alkoholban (95 ° etanol) történő feloldással állítják elő.

Festi a citoplazmákat, az izomrostokat, a citoplazmatikus organellákat és a kollagént, de nem festi meg a sejtmagokat. Ennek oka az, hogy negatív töltésű, tehát affinitása van a pozitív töltésű struktúrákhoz.

Kétféle típusú eozin létezik: "Y" és "B". Az "Y" eozin sárga eozin néven ismert. Tudományos neve tetrabróm-uorescein, kémiai képlete C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅.

Másrészt a "B" eozint néha kékes B-eritrozinnak nevezik. Tudományos neve dibromodinitro-uorescein, és a képlet C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉. Mindkettő nagyon hasonló, és a különbség az egyik vagy a másik használat között nem igazán észrevehető. A legnépszerűbb azonban az "Y" eozin.

Az eozinnak az a tulajdonsága, hogy megkülönböztesse az élő és az elhalt sejteket, mivel csak akkor képes átmetszeni a membránt, hogy megfestse citoplazmáját, amikor a sejtek meghalnak, és a sejt citoplazmája színtelen marad, ha életben marad.

Alkalmazások

Az idegrostok festése

A vastag idegrostok megfesthetők és hematoxilin-eozinnal azonosíthatók. Ez azonban nem használható vékony idegrostok festésére, mivel ezüst festés szükséges az utóbbi megjelenítéséhez.

A szövettani bőrrész foltok

A bőr szarvas rétegének festésénél az eosin a ható festék, mivel ezen a szinten a sejteknek nincs magja.

A bőr szemcsés rétegében a hematoxilin erősen megfesti a keratohyalin granulátumot a granulátum sejtekben. Éppen ellenkezőleg, a bőr spinózus rétegét hematoxilinnel gyengén festették, míg az alap- vagy a csíraréteg meglehetősen festett.

Az eozin megfesti az összes sejt citoplazmáját, és a szín intenzitása rétegenként változhat.

A székletminták hematoxilin-eozin-festése

Gómez és mtsai., 2005-ben kimutatták, hogy a hematoxilin-eozinnal történő festés hatékonyabb volt az Entamoeba histolytica és az Entamoeba eltérése miatt kialakult amoebiasis eseteinek azonosításában, mint a friss megjelenítési módszer (sóoldat és lugol) akut hasmenéses betegekben.

Azt is kimutatták, hogy rendkívül érzékeny az eritrohagocitózis kimutatásában (eritrocytákat elnyelő amőbák).

A szövettani szakaszok festése a fertőzés diagnosztizálására

Walwyn és munkatársai 2004-ben szövettani foltok alkalmazását javasolták a fertőzést okozó mikroorganizmusok kimutatására.

Hematoxilin-eozin festéssel képesek voltak megjeleníteni a Clostridium, Actinomyces, spirillae vagy Candida által okozott fertőzéseket. Megfigyelték a Sarcoptes escabiei parazita jelenlétét a bőr szekcióiban, valamint a citomegalovírus és herpesz vírusos zárványait különböző szövetek metszeteiben.

technikák

Szövettani mintákhoz

A szövettani szakasz festése egy lépés sorozatán megy keresztül. Az első dolog a szövettani szakasz megszerzése. Ezt meg kell viaszolni, hogy később mikrotommal megkaphassuk a darabokat (ultrafinom). A technika a következő lépésekből áll:

1 - A felesleges paraffin eltávolítása: ehhez használhat xilolt vagy Heme-D-t, merítsen 3-5 percig.

A minta 2-rehidratálása: ezt úgy érjük el, hogy a mintát csökkenő sorrendben (100 °, 90 °, 70 °) merítjük különböző alkoholkoncentrációkba (etanol). Minden esetben 7 percig.

3-Az alkohol feleslegének kiküszöbölése: ehhez 7 percre vízbe merül.

4-festés hematoxilinnel: a mintát 6-10 percre merítik egy hematoxilint tartalmazó tálcába. Az expozíciós idő a minta méretétől és vastagságától függ.

5-A felesleges hematoxilin eltávolítása: vízzel mossuk 5 percig, majd gyors átjutást (10-20 másodperc) hajtunk végre savas alkoholon keresztül. Később még 5 percig vízzel mossuk. Ezután etanolba merítjük 96 ° C-on 1 percig.

6-eosinnal történő festés: ehhez a mintát 5 percre merítik az eozin-tálcában.

7-A minta kiszáradása: ehhez az alkoholtartályokon (etanol) halad át, de ezúttal növekvő sorrendben. (70 °, 90 °, 100 °). (5 másodperc, 5 másodperc, illetve 1 perc).

8 - A minta tisztítása: ehhez 5-10 percig xilolnak tesszük ki, és szárítjuk, hogy véglegesen kanadai balzsammal vagy más hasonló anyaggal lezárjuk.

Székletmintákra keres

A tárgylemezen kenet kerül a beteg székletével, és 80% alkohollal rögzítjük 5 percig. A lemezt 5 percre merítjük hematoxilinbe, és azonnal vízzel mossuk.

Ezt követően gyorsan savas alkoholba, majd ammóniás vízbe merítik. Ez vízzel mossuk. 5 percig eozinnal színezve. A mintát a technika állása szerint magyarázzuk, és végül xilollal öblítjük.

Reagensek előállítása

- Hematoxilin

Oldjunk fel egy liter desztillált vízben 50 g kálium- vagy ammónium-alumínium-szulfátot. Amikor teljesen feloldódik, adjunk hozzá 1 gramm kristályos hematoxilint. A teljes feloldódáshoz hozzáadunk 1 g citromsavat, 50 g klór-hidráttal és 0,2 g nátrium-jodáttal.

Az elegyet 5 percig forraljuk, majd hagyjuk lehűlni és szűrjük, hogy eltávolítsuk a maradék szilárd részecskéket. Az így előállított reagens azonnal felhasználható.

- Eozin

Elkészíthető alkoholos bázissal vagy vízbázissal.

Alkoholos eozin

100 ml etanolban 95 ° C-on oldjunk fel 0,5 g "Y" eozint. Ezután adjunk hozzá néhány csepp jégecetet.

2% -os vizes eozin

1250 ml desztillált vízben oldjunk fel 25 gramm vízoldható „Y” eozint. Ezután adjunk hozzá néhány csepp jégecetet.

Savas alkohol

Mérjünk be 0,5 ml tömény sósavat és töltsük fel 100 ml-re abszolút alkohollal.

Ammónia víz

Mérjünk be 0,5 ml koncentrált ammóniát, és töltsük fel 100 ml-re desztillált vízzel.

Irodalom

1. Navarrete, G. A bőr szövettana. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Elérhető a következő oldalon: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Az Entamoeba histolytica / E azonosítása Eltérés a friss amőba technikával szemben a hematoxilin-eozinnal történő festéssel szemben akut hasmenés esetén. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Elérhető a következő oldalon: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. A szövettani technikák hasznossága anatómiai minták fertőzésének diagnosztizálására. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Elérhető a következő címen: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW reagensek. Hematoxilin-eozin-folt. 2017, Spanyolország. Elérhető az itwreagents.com oldalon
6. Eozin. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. november 7., 08:18 UTC. 2019. augusztus 4., 22:13 en.wikipedia.org
7. „Hematoxiiin.” Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2019. május 3., 11:23 UTC. 2019. augusztus 4., 22:48 wikipedia.org