BAIRD PARKER AGAR: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁS - BIOLÓGIA - 2026

A Baird Parker agar táptalaj szilárd közepes szelektív és differenciálművelésű. 1962-ben hozták létre koaguláz-pozitív staphylococcusok (Staphylococcus aureus) kimutatására és számlálására.

Kazein hasnyálmirigy-hidrolizátumából, húskivonatból, élesztõkivonatból, lítium-kloridból, glicinbõl, nátrium-piruvátból, kálium-tellurátból, agarból és tojássárgája emulziójából áll.

Tipikus Staphylococcus aureus telepek Baird Parker agaron. Forrás: Daizy John

A Baird Parker Agar az S. aureus azon képességén alapszik, hogy csökkentse a tellurit és előállítsa a lecitinázt. Mindkét tulajdonság olyan kolóniát generál, amelynek ezen fajra jellemző tulajdonságai vannak. Ezért rendkívül hatékony e mikroorganizmus kimutatására.

A S. aureus tipikus kolóniái fekete vagy sötétszürke, színtelen szegéllyel és körülvevő világos halogénnel megkülönböztetik őket más mikroorganizmusoktól. Ez a kórokozó megtalálható klinikai mintákban, vizekben, kozmetikumokban és nyers vagy főtt ételekben.

Diagnosztizálása vagy kimutatása rendkívül fontos, az általuk előidézett patológiák sokfélesége miatt, például élelmezésmérgezés, pikkelyes bőr szindróma, toxikus sokk szindróma, tályogok, meningitis, septicemia, endocarditis.

bázis

Tápláló erő

A kazein, a húskivonat és az élesztőkivonat hasnyálmirigy-hidrolizátuma táplálja a tápanyagokat, vitaminokat és ásványi anyagokat az általános mikrobiális fejlődéshez, míg a piruvát és a glicin olyan vegyületek, amelyek elősegítik a Staphylococcus aureus fajlagos növekedését.

Szelektív

A Baird Parker Agar szelektív, mivel olyan anyagokat tartalmaz, amelyek gátolják a kísérő növényzet növekedését, miközben elősegítik a S. aureus fejlődését. A gátló vegyületek lítium-klorid és kálium-tellurát.

Differenciális

Ez a táptalaj lehetővé teszi az S. aureus megkülönböztetését a koaguláz-negatív staphylococcusok többi részétől. Az S. aureus képes a telluritot fémes fekete telluriummá redukálni, fekete vagy sötét szürke telepeket képezve.

Hasonlóképpen, a tojássárgája biztosítja a szubsztrátokat a lecitináz és lipáz enzim jelenlétének kimutatására. Az S. aureus lecitináz-pozitív, ezért tiszta halogót figyelünk meg a kolónia körül, jelezve, hogy a lecitin hidrolizálódik.

Ebben az értelemben a fényes fekete vagy sötét szürke kolónia, ezen a környéken egy könnyű halogén található, ezen az agaron S. aureus jelenlétét jelzi.

Ha csapadékképző zóna alakul ki, akkor ez a lipázaktivitásra utal. Néhány S. aureus törzs lipáz pozitív, mások negatív.

Abban az esetben, ha az S. aureus lipáz-pozitív, akkor a fekete vagy sötét szürke kolónia körül átlátszatlan területet fog megfigyelni, amelyet a lecitináz hatása következtében könnyű halogén követ.

A S. aureus kivételével az ezen a táptalajon növekedni képes baktériumok olyan színtelen vagy barna kolóniák alakulnak ki, amelyek nem tartalmaznak körülvevő halogént.

Az atipikus fekete kolóniák színtelen szegéllyel vagy anélkül, de világos halo nélkül is láthatók. Ezeket a kolóniákat nem szabad figyelembe venni, nem felelnek meg a S. aureus-nak.

Készítmény

Tojássárgája emulzió

Vegyünk egy friss csirketojást, mossuk le és tegyük 70% -os alkoholba 2-3 órán át. A tojást ezután aszeptikusan kinyitják, és a fehéret óvatosan elválasztják a tojássárgájától. Ezután 50 ml tojássárgáját veszünk és 50 ml steril fiziológiás oldattal keverjük.

Kálium-tellurát 1 tömeg / térfogat%

Egyes kereskedelmi házak felhasználásra kész 1% kálium-telluritot árusítanak. A tápközeghez adjuk, mielőtt a táptalaj megszilárdul.

Az oldat laboratóriumi előállításához 1,0 g kálium-telluritot lemérünk és feloldunk egy vízben. Ezt követően a vízmennyiséget a 100 ml-ig elérték. Az oldatot szűrési módszerrel kell sterilizálni.

A tápközeg elkészítése

Mérjünk ki 60 g dehidratált tápközeget és oldjuk 940 ml desztillált vízben. Hagyja az elegyet körülbelül 5-10 percig ült.

A tápközeget gyakran keverve melegítsük fel az oldódási folyamat javítása érdekében. Forraljuk egy percig. Sterilizáljuk az autoklávban 121 ° C-on 15 percig.

Hagyjuk állni, amíg el nem éri a 45 ° C hőmérsékletet, és adjunk hozzá 50 ml tojássárgája emulziót és 10 ml 1% telluritot. Alaposan keverjük össze, és öntsünk 15-20 ml-t a steril Petri-csészékre.

Hagyja megszilárdulni, fordított lemezt rendeljen, és használatig tárolja a hűtőszekrényben.

Az elkészített táptalaj végső pH-jának 6,8 ± 0,2-nek kell lennie.

A minta vetése előtt várja meg, amíg a lemez szobahőmérsékletű lesz. A lemezeket vetés után vagy Drigalski spatulával felszíni vetéssel vetjük be.

A dehidrált táptalaj színe világosbarna, az elkészített táptalaj pedig világosbarna színű.

Használat

Klinikai minták

A klinikai mintákat közvetlenül vetik el, az anyag egy részét a lemez egyik végén ürítve, majd onnan kimerüléssel csíkozzák fel. Inkubáljuk 24–48 órán át 35–37 ° C-on.

Ételminták

Mérjünk be 10 gr élelmiszer-mintát és homogenizáljuk 90 ml 0,1% peptonvízben, ahonnan szükség esetén hígításokat készítünk. Inokuláljuk a lemezeket három példányban 0,3 ml előkészített oldatokkal, és a magokat a felületre Drigalski spatulával fedjük be. Inkubáljuk 24–48 órán át 35–37 ° C-on.

Ez a módszer lehetővé teszi a kapott tipikus kolóniák megszámlálását, és ideális, ha feltételezhető, hogy az S. aureus jelenléte 10 CFU / g / ml mintában van.

Ha gyanítható, hogy az S. aureus mennyisége kicsi, vagy sok kísérő növényvilág létezik, akkor javasoljuk, hogy a mintát tripszikáz szójalevesben 10% NaCl-oldattal és 1% nátrium-piruváttal dúsítsák. Ez elősegíti a S. aureus növekedését és gátolja a kísérő növényzet fejlődését. Zavaros csöveket beoltunk Baird Parker agarra.

Vízminták

Sterilizált vákuumszűrő rendszerben 100 ml vizsgálati vizet szűrünk, majd a 0,4 mikronos mikroporózus membránt steril csipeszekkel eltávolítjuk és a Baird Parker lemezre helyezzük. Inkubáljuk 24–48 órán át 35–37 ° C-on. Ez a módszer lehetővé teszi a tipikus S. aureus kolóniák megszámlálását.

QA

Az ismert törzsek, mint például a Staphylococcus aureus ATCC 25923, a Staphylococcus aureus ATCC 6538, a Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, az Escherichia coli ATCC 25922 vagy a Proteus mirabilis ATCC 43071, felhasználhatók a Baird Parker agar minőségének értékelésére.

A S. aureus ATCC törzsek esetében ismert, hogy csökkentik a tellurit, ezek lipáz- és lecitináz-pozitívak. Ezért kielégítő fejlődésnek kell lennie, és domború kolóniákat kell termeszteni, fekete közepükkel és színtelen szegéllyel, átlátszatlan haloval és könnyű legkülső haloval.

A maga részéről az S. epidermidis várhatóan gyengén fejlődik ezen a táptalajon, barnásszürke-fekete kolóniákkal, könnyű halo nélkül.

Az E. coli és a P. mirabilis esetében várhatóan teljesen vagy részlegesen gátolták. Növekedés esetén barna kolóniák képződnek átlátszatlan terület vagy világos hal nélkül.

ajánlások

-A tápközeget nem szabad melegíteni a tellurit és a tojássárgája hozzáadása után.

-A tojássárgája emulzió elkészítése és közepére történő hozzáadása nagyon veszélyeztetett lépés a szennyeződés szempontjából. Különös óvatossággal kell eljárni.

- Ha vannak tipikus S. aureus kolóniák, akkor ezt az említett törzsre koaguláz-teszttel kell megerősíteni.

-Ha kétes eredmények mutatkoznak a koagulázzal, akkor további megerősítő teszteket kell elvégezni.

- Ügyeljen arra, hogy ne keverje össze a tipikus S. aureus kolóniák és az atipikus fekete kolóniák jelenlétét.

Irodalom

1. Wikipedia közreműködői. Baird-Parker agar. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2017. március 15, 19:36 UTC. Elérhető a következő oldalon: wikipedia.org/ Hozzáférés 2019. február 18-án.
2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Elérhető a következő oldalon: bd.com
3. Britannia Laboratories. Baird Parker agar alap. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Elérhető a következő címen:
5. Britannia Laboratories. Kálium-tellurát. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M., Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Enterotoxigén Staphylococcus aureus A típusú hordozása az orvosi kezelõk orr-orr-kenetében. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelai Standard Covenin 1292-89. (1989). Élelmiszerek. A Staphylococcus aureus izolálása és felsorolása. Elérhető a következő címen: sencamer.gob.ve