BHI AGAR: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

A BHI agar vagy Brain Heart Infusion agar táptalaj tápláló szilárd tenyészet. Spanyolul az agyszív infúziós agarnak nevezzük. Nem szelektív táptalaj, ami azt jelenti, hogy mindenfajta gram-pozitív és gramnegatív baktérium, valamint élesztő és fonalas gombák fejlődhetnek ki.

Összetevője: borjúagy és szív infúzió, állati szövetek peptikus hidrolizátuma, kazein hasnyálmirigy hidrolizátuma, nátrium-klorid, glükóz, dinátrium-foszfát és agar.

BHI lemezek. Forrás: A fotó készítette MSc. Marielsa Gil.

Meg kell jegyezni, hogy a BHI agar az egyik leggyakrabban használt táptalaj a bakteriológiai laboratóriumokban. Kiegészítők nélkül felhasználható elsődleges tenyészetként, más szelektív táptalajon nyert kolóniák szubkultúrájaként vagy törzsek laboratóriumi fenntartására.

Másrészt ez ideális táptalaj, amelyet alapként lehet használni dúsított közegek, például vér-agar és csokoládé-agar előállításához. Mindkettő ideális az igényes mikroorganizmusok táplálkozási szempontból történő izolálására. Meg kell azonban jegyezni, hogy mivel glükózt tartalmaz, nem alkalmas a hemolízis mintáinak megfigyelésére.

Hasonlóképpen, a BHI agar felhasználható speciális közegek előállítására a nehezen növekvő patogén mikroorganizmusok elkülönítésére közönséges közegekben, köztük a Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae és Histoplasma capsulatum táptalajon.

Az antibiotikum-adalékanyaggal a BHI agar szelektív táptalajtá válik a gombák izolálására.

bázis

Tápláló táptalaj a közepesen igényes mikroorganizmusok izolálására, és gazdagodása fokozható vér és más táplálékkiegészítők hozzáadásával.

Nem szelektív táptalaj, ezért lehetővé teszi a legtöbb Gram-pozitív és Gram-negatív baktérium, valamint egyes gombák szaporodását. Antibiotikumok hozzáadásával szelektív is lehet.

A tápközeg tartalmaz borjúagy és szív infúziót, állati szövetek peptikus hidrolizátumát és kazein hasnyálmirigy hidrolizátumát; Mindezek a vegyületek vitaminok, aminosavak, nitrogén és szénforrásként működnek.

A glükóz egy szénhidrát, amely energiát szolgáltat a mikroorganizmusoknak, miután erjesztették őket. Eközben a nátrium-klorid és a dinátrium-foszfát fenntartja az ozmotikus egyensúlyt, és a semlegességhez közeli pH-t biztosít. Végül az agar közepes szilárd állagot ad.

Készítmény

Mérjünk be 52 gramm dehidratált közeget és oldjuk fel egy liter desztillált vízben. Az elegyet forrásig forrásig melegítjük, az oldódás során gyakran keverjük.

A BHI agarlemezek vagy ékek adalékanyagok nélkül elkészíthetők.

ékek

Az ékek előkészítéséhez addig tálaljuk az összetételt, amíg az egyes csövek fele meg nem töltődik, fedjük le és autoklávban sterilizáljuk 121 ° C-on 15 percig, távozásakor fektessünk egy alapra, amíg megszilárdulnak. Később felhasználásig tárolandó hűtőszekrényben.

BHI ékek a bakterioteca számára. Forrás: A fotó készítette MSc. Marielsa Gil.

Tányérok

Az oldott elegyet autoklávozzuk 121 ° C-on 15 percig, miközben hagyjuk lehűlni 50 ° C-ra, és 20 ml tápközeget táplálunk steril Petri-csészékben. Hagyjuk megszilárdulni, megfordítjuk és felhasználásig hűtőszekrényben tároljuk. A lemezeket a vetés előtt hagyja szobahőmérsékletre melegedni.

A közeg pH-jának 7,4 ± 0,2 értéken kell maradnia.

A nyers közeg bézs színű, az elkészített közeg világos sárga színű.

Vér agar készítése

A táptalaj sterilizálása után lehűtjük körülbelül 45-50 ° C hőmérsékletre, majd adjuk hozzá a vért (50 ml), óvatosan keverjük össze, hogy homogenizálódjunk, és az aszeptikusan 20 ml-t adjunk minden Petri-csészébe. Ha buborékok képződnek a lemezen, akkor a könnyebb lángot gyorsan át kell vezetni a buborékokon, hogy azok megszűnjenek.

Hasonlóképpen, speciális táptalajok is előállíthatók a megfelelő adalékanyagok hozzáadásával, amikor a keverék 45-50 ° C hőmérsékletet ér el.

A közeg cseresznyevörös marad.

Alkalmazások

Kiegészítők nélkül használható

Az adalékanyagok nélküli BHI agar hasznos elsődleges tenyészetként és alacsony vagy közepes igényű mikroorganizmusok tiszta törzseinek vetésére későbbi azonosítása céljából.

Mivel ez világos színű közeg, ideális pigmentek megfigyelésére, és mivel nem tartalmaz zavaró anyagokat, bizonyos biokémiai vizsgálatokat, például oxidázt és katalázt is végezhetnek rajta, vagy más biokémiai tesztek elvégezhetők ebből a telepekből. agar.

Hasonlóképpen, a BHI agar ékeket széles körben használják a törzsek fenntartására egy ideig a laboratóriumban (bakterioteca).

A baktériumtörzsekkel felülettel beoltott lemezeket vagy ékeket 37 ° C-on inkubálják 24–48 órán át. Eközben a gombákban a hőmérséklet és az inkubációs idő függ a keresett gomba típusától.

Bázis agarként más táptalajok előállításához

Ezen bázissal dúsított és szelektív közegek készíthetők.

dúsított

Fő feladata, hogy alapul szolgáljon a vér agar elkészítéséhez a mikrobiológiai laboratóriumokban történő rutin alkalmazásra. Különösen, a BHI-bázis elősegíti a Streptococcus sp. Ennek hátránya azonban, hogy nem alkalmas a hemolízis mintáinak megfigyelésére, mivel glükózt tartalmaz.

Nyúl vagy ló vér agarjának előállításában is felhasználják a Haemophilus sp. A legjobb eredmény elérése érdekében dúsító kiegészítést (IsoVitaleX) adhatunk hozzá.

Ha a minták a légzőrendszerből származnak, az agarhoz bacitracint adhatunk, hogy gátoljuk a kísérő növényt és növeljük a Haemophilus sp.

Alternatív megoldásként a Corynebacterium diphtheriae izolálására cisztin-tellurittal készített vörös (bárány- vagy emberi) agar készíthető. Hasonlóképpen, a Francisella tularensis izolálására hasznos nyúl vér agar készítése cisztin és glükóz hozzáadásával.

A vér-agarlemezek beoltását kimerüléssel végezzük, és 35-37 ° C-on inkubáljuk 24-48 órán át mikroaerofilitásban (5-10% CO ₂).

Szelektív

Ez a táptalaj antibiotikumok hozzáadásával helyettesítheti a Sabouraud agart a gombák izolálására.

A BHI agar kombinációja a kloramfenikollal - gentamicinnel vagy penicillinnel -, sztreptomicinnel és lóvérekkel ideális a Histoplasma capsulatum izolálására.

Az elkülönítendő mikroorganizmustól függően, 35–37 ° C-on vagy szobahőmérsékleten, aerobiosisban történő inkubálás ajánlott. Időnként inkubálásra van szükség mindkét hőmérsékleti tartományban, ehhez 2 lemezt kell használni.

Egyes gombákat, mint például a Trichophyton mentagrophytes, szobahőmérsékleten, legfeljebb 7 napig kell inkubálni.

QA

Minden egyes előállított tételből ajánlott egy lemezt vagy éket inkubálni 37 ° C-on 24 órán keresztül, és ellenőrizni, hogy nincs növekedés; Különösen fontos a vér-agar elkészítésekor, mivel ez könnyen szennyező közeg.

Másrészt a táptalaj minősége az ismert vagy tanúsított standard törzsek beoltásával és fejlődésük megfigyelésével értékelhető.

Ebben az értelemben a BHI-agar adalékanyagok nélküli értékeléséhez Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 vagy Candida albicans ATCC 10231 törzseket lehet használni. Minden esetben kielégítő növekedés várható.

A Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 vagy a Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 törzseit be lehet vetni a vér agarlemezek értékeléséhez.

A baktérium törzseket 37 ° C-on, mikroaerofilitásban inkubáljuk 24 órán át, míg a gomba szobahőmérsékleten, nedves kamrában, legfeljebb 7 napig inkubálható. Minden esetben kielégítő növekedés várható.

Irodalom

1. Britannia Laboratories. Agyszív infúzió agar. 2015. elérhető: britanialab.com.
2. BD Laboratories. Agyszív infúzió (BHI) agar. 2013. Elérhető a következő oldalon: bd.com.
3. Laboratoryios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Agyszív infúzió agar. 2009.
4. Neogén laboratórium. Agyszív infúzió agar. Elérhető a következő címen: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Blood agar: alapozás, felhasználás és előkészítés. 2018. Elérhető a következő oldalon: lifeder.com.
6. Wikipedia közreműködői. Agy szív infúzió. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. szeptember 19, 03:58 UTC. Elérhető a wikipedia.org oldalon. Belépés 2019. március 2-án.
7. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.