A BIGGY agar táptalaj szelektív és differenciál kultúra. Úgy tervezték, hogy izolálja és segítse a fő Candida fajok azonosítását. A BIGGY név a Bismuth Glucose Glycine Yeast betűszóból származik.
Az eredeti formulát Nickerson készítette, ezért ezt a tápközeget Nickerson agar néven is ismert. Jelenleg élesztőkivonatból, glicinből, dextrózból, ammónium-citrátból, bizmut-citrátból, nátrium-szulfitból és agarból áll.
A BIGGY agar grafikus ábrázolása. Forrás: Flickr.com
A BIGGY agart a komplex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei és C. kefyr fajok megkülönböztetésére készítik, de más fajok is nőnek, mint például a Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum. és Saccharomyces cerevisiae.
Jó érzékenysége és specifitása, azonban hasonló funkcióval rendelkező más közegekhez viszonyítva, a második helyen van, felülmúlja a CHROMagar. Ezért sok laboratórium inkább az utóbbit részesíti előnyben, bár ez sokkal drágább.
Világosnak kell lennie, hogy a BIGGY agar, valamint más hasonló eszközök használata elősegíti a gyors feltételezhető azonosítást, de soha nem erősíti meg. Ezért további azonosítási módszereknek rendelkezésre kell állniuk; például a Vitek 32 és az API 20 azonosító rendszerek.
bázis
A BiGGY agart részlegesen szelektív táptalajnak tekintik az élesztők, különösen a Candida nemzetség izolálására, bár más nemzetek is növekedhetnek.
Ez szintén differenciális közeg, mivel az érintett fajtól függően eltérő tulajdonságokat fognak megfigyelni megjelenés, szín, forma és méret szempontjából. Kromogén közegnek tekintik, mivel a kolóniákban sokféle szín alakul ki.
Az élesztő kolóniák színét a bizmut-szulfit jelenléte képezi az agarban. Nickerson rájött, hogy a Candida nemzetség élesztõi extracellulárisan redukálják a bizmut-szulfitot, átalakítva azt bizmut-szulfiddá (oldhatatlan fekete anyag). Ennek eredményeként világosbarna vagy fekete kolóniák képződnek.
Ez az agar élesztőkivonatot és dextrózt tartalmaz, amely az alapvető tápanyagok és energia forrása az élesztő fejlődéséhez. A glicin élesztőnövekedést serkentő anyag, míg bizonyos baktériumok növekedését gátolja.
Ugyanebben az értelemben az ammónium- és bizmut-citrát, valamint a nátrium-szulfit gátolják a baktériumok növekedését. Az agar a közepes szilárd állagot biztosító anyag.
Készítmény
Mérjünk ki 45 g dehidratált tápközeget és oldjuk fel liter desztillált vízben. Rázza fel és hevítse az elegyet 1 percig forralva, amíg a teljes feloldódáshoz nem fordul elő. Ez a tápközeg nem autoklávozható.
Vízfürdőben kb. 45 ° C-ra hűtve 20 ml-t öntsünk a steril Petri-csészékre.
A dehidrált táptalaj színe sárgásszürke, az elkészített táptalaj sárgásfehér gél, amelyben enyhe flokkuláló csapadék figyelhető meg.
A pH-nak 6,8 ± 0,2-nek kell lennie.
Az elkészített tápközeget hűtőszekrényben (4 ° C) kell tárolni, fénytől védve. Mivel ez egy közeg, amelyet nem lehet autoklávozni, ezért a lehető leghamarabb fel kell használni. A készítmény előkészítése után 3 nappal ajánlott használni.
Használat
A lemezeket szobahőmérsékleten (25 ° C) inkubáljuk 24, 48 és 72 órán át, és az inkubációs idő 5 napra meghosszabbítható.
Minden Candida faj bizonyos tulajdonságokkal rendelkezik, amelyek megkülönböztetik őket egymástól. A tápközeg gyártói minden fajra a következő jellemzőket írják le:
-Candida albicans komplex: ezen az agaron sima, kerek, barna vagy fekete kolónia formájában alakul ki, enyhe mycelialis határral. Kivéve, hogy a sötét szín nem szóródik közepére.
-Candida tropicalis: világos, kicsi, sötétbarna kolóniák, fekete közepükkel és enyhe micélium szegéllyel. A sötét szín közepe felé szétszóródik, ez a fajra jellemző tulajdonság, miután 72 órán át inkubáltuk.
-Candida krusei nagy, lapos, durva kinézetű telepeket fejlesztenek, barna vagy fehéres szegéllyel.
-Candida parakrusei: közepes méretű telepek, legtöbbször durva, laposak. A szín változhat a világos sötét vörösesbarnától a világosbarnáig. A kolóniák határán kiterjedt, sárgás micélium található.
-Candida stellatoidea: közepes, lapos telepek alakulnak ki, sötétbarna, majdnem fekete. A mycelialis fejlődés nagyon ritka.
Yücesoy és Marol által 2003-ban elvégzett tanulmány kimutatta, hogy a CHROMagar táptalaj jobb érzékenységgel és specifitással rendelkezik a különféle Candida fajok megkülönböztetésére és azonosítására, mint a BIGGY agar.
QA
A sterilitás ellenőrzése érdekében az oltott lemezeket 25 ° C-on, sötétben, 24–48 órán keresztül inkubálják, várható, hogy semmiféle növekedés vagy színváltozás nem várható.
A tápközeg minőség-ellenőrzéséhez ajánlott ATCC törzsek:
Candida albicans ATCC 60193 komplex, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Mindegyikben a fentiek szerint növekedés várható.
A következő törzsek is használhatók:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 és Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Az első kettőben teljes gátlás várható, de részleges növekedés esetén a kolóniák krémszínűek lesznek.
A S. aureus esetében várhatóan teljesen gátolják, de ha részben növekszik, kolóniái fehérek.
korlátozások
Egyes baktériumok képesek növekedni ebben a közegben, és akár sötét színűvé is válhatnak, miközben a Candida kolóniát szimulálják, de amikor a kolóniát elkenik és mikroszkóp alatt megfigyelik, könnyen eldobható.
Táblázat: Néhány élesztő kolónia jellemzői a BIGGY agaron Yücesoy M és S. Marol munkájának megfelelően .
Forrás: Yücesoy M., Marol S. A CHROMAGAR Candida és a BIGGY agar teljesítménye az élesztőfajok azonosításához. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Irodalom
- Yücesoy M, Marol S. A CHROMAGAR Candida és a BIGGY agar teljesítménye az élesztőfajok azonosítása céljából. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Technikai adatlap BIGGY Agar. Elérhető a következő címen: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Elérhető a következő címen: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. BIGGY agar. Elérhető a következő címen: condalab.com
- BD Laboratories. BD BiGGY agar (bizmut glükóz-glicin élesztő agar). 2011. Elérhető a következő oldalon: bd.com