EPE-ESCULIN AGAR: INDOKLÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁS - BIOLÓGIA - 2026

Az epe-esculin agar szelektív és differenciál tápközeg szilárd tenyészet. Diagnosztikai tesztként alkalmazzák egy bizonyos mikroorganizmus azon képességének meghatározására, hogy az epetartalmú tápközegben növekedjen-e, és hogy a glükozid-eskulin szétválasztása esculetinra és glükózzá alakuljon.

Ezt a diagnosztikai tesztet arra használják, hogy megkülönböztessék a Streptococcus nemhez tartozó, a D csoporthoz tartozó fajokat (epe-eskulin-pozitív) a Streptococcus-csoport többi csoportjától, amelyek negatívan reagálnak erre a tesztre.

Epe-esculin agarlemez, Enterococcus törzsrel beoltva (a vizsgálat pozitív). Forrás: A gép nem olvasható. Philippinjl feltételezte (szerzői jogi állítások alapján).

Meg kell jegyezni, hogy a viridans csoport egyes Streptococcusai hidrolizálhatják az esculint, de nem képesek epe jelenlétében 40% -os koncentrációban növekedni, ezért ebben a közegben a csoportra adott reakció negatív.

Másrészről, az epe-esculin táptalaj szintén hasznos a Listeria monocytogenes vagy az Aerococcus sp fajok diagnosztizálásában, mivel ezek a mikroorganizmusok az epe-esculin-pozitívak.

Az Esculin Bile Agar peptonból, húskivonatból, oxebéjből, eszkulinből, vas-citrátból, agarból és desztillált vízből áll. Néhány kereskedelmi ház nátrium-azidot tartalmaz a közeg összetételében.

A tápközeget el lehet készíteni a laboratóriumban, ha az összes vegyület külön van, vagy elõállítható a kereskedelemben szárított tápközegbõl.

bázis

Az epe-eszkulin táptalaj peptoneket és húskivonatot tartalmaz, mindkét vegyület biztosítja a szükséges tápanyagokat a mikroorganizmusok szaporodásához.

Ezenkívül esculint is tartalmaz; Ez a vegyület egy glikozid, amelyet egy egyszerű monoszacharid (glükóz) és a 6,7-dihidroxi-kumarin vagy -esculetin (aglukon) elnevezésű vegyületének egyesítése képez, amelyet egy acetál- vagy glükozid-kötés köt össze.

A vizsgálat azon alapul, hogy a baktériumok képesek-e az eszculin hidrolizálására. Ha ez megtörténik, az eszkulin lebontja esculetin és glükóz. Az Esculetina reagál a közegben lévő vasmal, sötétbarna, majdnem fekete vegyületet képezve.

Ez azt jelenti, hogy a vas-citrát reakciófejlesztőként működik. Ez a tulajdonság a Bile Esculin Agar-t differenciális közeggé teszi.

A maga részéről az epe gátlószer, amely megakadályozza egyes mikroorganizmusok szaporodását, ezért a baktériumnak az esculin felosztása előtt képesnek kell lennie epe jelenlétében történő szaporodásra. Ezért ezt a közeget szelektívnek tekintjük.

Azok a baktériumok, amelyek ebben a környezetben fejlődhetnek, elsősorban azok, amelyek a bélben élnek.

Ebben az értelemben egyes kereskedelmi társaságok nátrium-azidot adnak a tápközeghez, hogy tovább gátolják a bélben oldódó gram-negatív baktériumok növekedését, növelve a táptalaj szelektivitását a Streptococcus növekedéséhez.

Végül az agar szilárd állagot biztosít a közeghez, és a víz a vegyületek oldószere.

Készítmény

Az epe-esculin agar házi készítése

Mérni:

5 g peptonok

3 g húskivonat

40 g marhahús epe

1 g eszkulin

0,5 g vas-citrát

15 g agar

1000 ml desztillált víz

Nátrium-azid hozzáadása esetén 0,25 g / liter mennyiséget mérünk és adunk az elegyhez.

Oldjuk fel az összetevőket liter desztillált vízben, melegítsük, amíg a vegyületek teljesen fel nem oldódnak. Osszunk el 5 ml-t 16 x 125 mm-es csavaros kupakkal ellátott kémcsövekbe. Autokláv 121 ° C-on, 15 kiló nyomáson 15 percig.

Vegye ki az autoklávból, és döntse a csöveket egy hordozón, hogy az agar megszilárduljon egy széles fuvolacsőrben.

Használatig hűtőszekrényben tárolandó. A vetés előtt melegítsük szobahőmérsékletre.

Epe-esculin agarlemezek is elkészíthetők; ebben az esetben a teljes keveréket autoklávozzuk egy lombikban, majd steril Petri-csészékbe osztjuk. Hagyja megszilárdulni és tárolja a hűtőszekrényben.

A tápközeg pH-jának 6,6 ± 0,2-nek kell lennie.

Az epe-eskulin-agar előállítása egy kereskedelmi közegből

Mérjük meg a betétben megadott mennyiséget. Ez üzlethelyiségenként változhat. Ezt követően járjon el a fentiek szerint.

A tápközeg pH-jának 6,6 ± 0,2-nek kell lennie. A dehidrált közeg színe világos bézs, az elkészített közeg sötétbarna színű.

Kereskedelmi epe-eszculin táptalaj. Forrás: A fotó készítette MSc. Marielsa Gil.

Alkalmazások

Az epe-eszkulin tápközeget elsősorban a D csoport Streptococcus (epe-esculin-pozitív) megkülönböztetésére használják a Streptococcus többi csoportjától (epe-esculin-negatív).

A túlzott sózott leves növekedésteszt és az epe-eskulin-teszt kombinálásával meghatározható a D csoport Streptococcus-csoportjának az Enterococcus nevű speciális csoportja.

A Streptococcus e különleges csoportja a fent említett nemzetség D csoportjába tartozik, és képesek az esculin hidrolizálására epe jelenlétében, mint a D csoport többi tagja is, de képesek kifejlődni hipersótt közegben (BHI kloriddal 6,5% nátrium), ez a tulajdonság megváltoztatja.

Ezért azokat a streptococcusokat, amelyek hidrolizálják az esculin epet, de nem nőnek túlzott sótartalmú tápanyagban, nevezzük nem enterococcus D csoport streptococcusoknak.

elvetett

A tápközeget oltjuk, lehetőleg tiszta Todd-Hewitt 24 órás tápközegből.

Adjunk hozzá 2 csepp a közeg felületéhez Pasteur-pipetta segítségével, és platinahurdal szétszórjuk a közegben.

Inkubáljuk 35 ° C-on 48 órán keresztül, miközben az inkubációs idő teljesül, ellenőrizni lehet, hogy van-e pozitív reakció. Ha az idő végén a reakció negatív marad, akkor 72 órán keresztül inkubálható.

Értelmezés

Pozitív reakció: sötétbarna, majdnem fekete színű megjelenés a fuvolacsőrben (a csőteszt esetében) vagy az agar feketedés a telepek körül (a lemezteszt esetében).

Negatív reakció: a tápközeg nem feketedik el, vagy a cső kevesebb, mint felében 72 óra inkubálás után fekete színű megjelenés tapasztalható. Másrészt negatív tesztnek kell tekinteni a tápközegben a baktériumok növekedését, a fekete szín megjelenése nélkül.

QA

A tápközeg minőségének értékeléséhez pozitív kontrollként Enterococcus faecalis ATCC 29212 törzset, negatív kontrollként pedig a D csoporthoz nem tartozó Streptococcus törzset kell rendelkezésre bocsátani.

korlátozások

-A nátrium-azidot nem tartalmazó médiumok lehetővé teszik a bélben oldódó gram-negatív baktériumok növekedését. Néhányuk a feketét feketézi.

- Néhány kereskedelmi ház alacsony epekoncentrációval jár (10%), és ezért néhány Streptococcus, amely nem tartozik a D csoporthoz, kialakulhat a közegben és hidrolizálja az eszculint, ami értelmezési hibákat okozhat.

Irodalom

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok a klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztő Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
4. Lab. Britannia. Esculin epe azid-agarral. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
5. "Epe Esculin Agar." Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2017. augusztus 22., 17:30 UTC. 2019. április 22., 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Epe Esculin Agar Slants. 2015. Elérhető a következő oldalon: bd.com
7. Neogen Laboratories. Az epe-esculin agar. Elérhető a következő címen: foodsafety.neogen.com