CSOKOLÁDÉ-AGAR: ALAP, FELHASZNÁLÁS ÉS ELKÉSZÍTÉS - BIOLÓGIA - 2026

A csokoládé-agar szilárd táptalaj, dúsítva, nem szelektív és nem differenciális. Elsősorban táplálkozási szempontból igényes mikroorganizmusok izolálására alkalmazzák, bár benne bármilyen baktérium nőhet.

Ennélfogva, különösen a steril minták, például a CSF és az ízületi folyadékok vetésénél növekszik hasznossága. Annak ellenére, hogy a polimikrobiális minták vetésére a kiválasztott eszközbe tartozik, ezekbe az esetekbe antibiotikumokat kell hozzáadni, amelyek gátolják az egyidejű növényt.

Csokoládé agar baktériumok növekedésével

Ennek a közegnek a jellegzetes barna színe van, nagyon hasonló a csokoládéhoz, ezért a neve is. A készítmény nagyon hasonló a vér-agarhoz, csak ebben az esetben a vért fel kell hevíteni, hogy a vörösvértestek lebonthassanak.

Előállítása, akárcsak a vér-agar, nagyon finom, mivel könnyen szennyeződik. Ezért sok laboratórium inkább ezt a médiumot szerezi be, amelyet már a kereskedelmi vállalatok készítettek elő, garantálva annak minőségét.

bázis

Ez a táptalaj tápanyagban gazdag agarbázisból és fűtött vérből áll. A vörösvértestek hemolízise biztosít X faktorot (hemin) és V faktorot (NAD), amelyek szükségesek bizonyos mikroorganizmusok, például a Haemophilus nemzetség szaporodásához. Nagyon hasznos a Neisserias sp.

A vér-agarhoz hasonlóan a táptalajok különféle táptalajok is felhasználhatók, az igénytől függően. A felhasznált közegek között szerepel az agyszív infúzió és a tripszikáz-szója-agar, bár a legelterjedtebbek a Columbia agar, a Müeller Hinton, a GC agar és a Thayer Martin agar.

A csokoládé-agar egyes változatai között szerepel a kereskedelemben kapható dúsított kiegészítés, az úgynevezett Isovitalex vagy a Polivitex.

Ezek a kiegészítők tartalmaznak B-vitamin- ₁₂, L-glutamin, adenin, guanin-hidrokloridot, p-amino-benzoesav, nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD), tiamin-pirofoszfát, vas-nitrát, tiamin-hidroklorid, cisztein-hidroklorid, L-cisztin, és a glükóz.

Fontos megjegyezni, hogy a csokoládé-agar dúsabb, mint a vér-agar, de ez nem teszi lehetővé a hemolízis mintázatainak megfigyelését.

Alkalmazások

Forrás: pixnio.com. Szerző:

Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Columbia agarral elkészített csokoládé agar

Ez a táptalaj kazein és szív hasnyálmirigy-emésztést, hús peptikus emésztést, nátrium-kloridot, agart, élesztõkivonatot és kukoricakeményítõt tartalmaz. Gazdag vitaminokban, ásványi anyagokban és esszenciális aminosavakban.

Ez a melegített vérbázis ideális a Neisseria nemzetségbe tartozó baktériumok izolálására. Másrészt, ha a tápközeghez kiegészítik a Brucella-kiegészítőt, akkor az említett mikroorganizmus elkülöníthető. Az eredmények a ló vérével javulnak.

GC-alapú agarral elkészített csokoládé agar (gonokokokhoz)

Ez a táptalaj peptonokat, kukoricakeményítőt, egybázisú és kétbázisú puffereket, nátrium-kloridot és agart tartalmaz.

A legtöbb kereskedelemben elkészített csokoládé-agar kiszerelés ezen alapon érkezik, és nem tartalmaz hevített vért, hanem inkább a hemin szintetikus keverékét és a növekedési faktorok, vitaminok, ásványi anyagok, aminosavak, V faktor és glükóz kémiai kiegészítését tartalmazzák.

A Müeller Hinton agarral elkészített csokoládé-agar

Az igényes mikroorganizmusok, például a Streptococcus pneumoniae antimikrobiális érzékenységének tesztelésére használják 5% fűtött juhvér felhasználásával.

Neisserias és Haemophilus primer izolálására is használják, de a Haemophilus izolálásának konkrét esetben a lóvért részesítik előnyben, mivel gazdag X és V faktor forrása.

Másrészt, ha a vethető minta nem steril területről származik, akkor az antibiotikumok hozzáadása ajánlott a terület normál növényzetének gátlására.

Példa légúti mintákra, amelyekben feltételezhető a Haemophilus nemzetségbe tartozó baktériumok jelenléte, a bacitracint használják a Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus és a szaprofit Neisserias növekedésének gátlására.

A nemi genciális minták esetében, amelyekben a Haemophilus ducreyi gyanúja merül fel, az alábbiak szerint elkészített csokoládé-agart használtak sikeresen: Müeller - Hinton agar 5% csokoládés ló vérrel, 1% Isovitalex dúsítással és 3 µg / ml vankomicin.

Thayer Martin agarral elkészített csokoládé-agar

Ez a közeg a Neisseria gonorrhoeae izolálására szolgál. Ennek tartalmaznia kell antibiotikumokat a kísérő növényvilág gátlására. Bárány vérét használják fel.

Készítmény

Látnia kell a felhasználható alapanyag elkészítésének jelzéseit. A dehidratált közeg tartályának hátulján találhatók. Általában leírják, hogy mennyit kell megmérnie egy liter táptalaj elkészítéséhez.

A pontos mennyiséget a laboratóriumban elkészítheti, liternél több vagy kevesebb lehet.

számítások

A kívánt mennyiség előkészítéséhez a három szabály alapján számítják ki, hogy mekkora mennyiséget kell mérni. Példa:

Ha 1 literre 40 grammot kell mérni, és a laboratórium 800 ml-t igényel, akkor azt mondják:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

A képlet a következő:

X = 32 gr (800 ml-re mérhető mennyiség).

Mérjük meg és oldjuk fel

A szükséges mennyiséget lemérjük és egy vízzel lombikba helyezzük.

Melegítsük mérsékelt hőn, és óvatosan keverjük forgó mozdulatokkal, amíg a dehidratált közeg teljesen fel nem oldódik, és 1 percig hagyjuk forrni.

sterilizálás

A lombikot az autoklávba helyezzük, hogy a táptalajt 20 percig 121 ° C-on sterilizáljuk.

Vér aggregátum

Az autoklávból való kilépéskor nyugodni hagyjuk, amíg a közeg hőmérséklete megközelítőleg 56-70 ° C között van, hogy elhelyezzük a vért, és addig keverjük, amíg az közeg barnává nem válik.

Ha kiegészítőket ad hozzá, akkor itt az ideje. Ezt követően keverjük össze és 20 ml-t tálaljunk minden egyes Petri-csészébe.

A teljes eljárást lamináris áramlású burkolatban vagy a Bunsen égő körül kell elvégezni.

Hagyjuk állni, amíg megszilárdulnak, és fordított helyzetben tároljuk a hűtőszekrényben.

Egy másik módszer a csokoládé agar elkészítésére vér nélkül

Az alap táptalajt a fentiek szerint készítjük el, a kereskedelemben kapott dehidratált hemoglobint feloldjuk és sterilizáljuk az autoklávban.

Mindkét oldatot hagyjuk lehűlni 50 ° C-ra, egyesítjük és hozzáadjuk a kiegészítőt. Keverjük össze aszeptikus körülmények között, majd tálaljuk steril Petri-csészékben.

QA

Fontos, hogy a vért a megadott hőmérsékleten helyezzük, mivel ez ideális a vörösvértestek lizálására és ugyanakkor a hőérzékeny V faktor fenntartására.

Az agar felületén semmilyen buborék nem maradhat. A 100 lemez minden egyes tételéből egy vagy két lemezt inkubálunk a kemencében 37 ° C-on 24 órán át, hogy ellenőrizzék sterilitásukat.

A legjobb eredmény elérése érdekében a csokoládé-agart röviddel az elkészítés után kell használni.

A kontroll baktériumtörzseket laboratóriumban kell tartani, hogy felmérjék a friss táptalaj hatékonyságát a klinikai szempontból fontos fő igényes mikroorganizmusok szaporodására.

Irodalom

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Gyakorlati klinikai mikrobiológia. Cadizi Egyetem, 2. kiadás. UCA Kiadványok Szolgálata.
2. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentína. Szerkesztő Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztõ Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. A GC-Biocen Agar alap táptalaj alkalmazásának megvalósíthatósága a mikrobiológiai laboratóriumban. Cubana Rev Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Elérhető a következő címen: scielo.sld.
5. Wikipedia közreműködői. Csokoládé agar. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. december 17., 19:54 UTC. Elérhető: en.wikipedia.org.