SIMMONS CITRATE AGAR: INDOKLÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁS - BIOLÓGIA - 2026

A Simmons agar citrát, ez egy szilárd táptalaj, amelyet biokémiai azonosítási teszt mikroorganizmusokként használnak, különösen a gram-negatív bacillákat. Az eredeti médiumot Koser 1923-ban hozta létre.

A Koser-citrát táptalaj nátrium-foszfátot, ammónium-foszfátot, monokálium-foszfátot, magnézium-szulfátot és nátrium-citrátot tartalmazó levesből állt.

A. Szárított Simmons-citrát-agar kereskedelmi táptalaj. B. Elkészített Simmons-citrát-agar. Forrás: A. Az MSc fényképe. Marielsa Gil B. Roto2esdios, a Wikimedia Commonsból

Mint látható, a közegben az egyetlen szénforrás a citrát, a nitrogénben pedig az ammónium-foszfát, ezeknek az elemeknek a forrásaként a fehérjék és a szénhidrátok hiányoznak, ezek általában más táptalajokban vannak jelen.

Ezért az ebben a táptalajban oltott baktériumok csak akkor tudnak szaporodni, ha képesek felvenni a szén citrátból. A teszt pozitív volt, ha zavarosság van a közegben, azonban annak hátránya, hogy nem-specifikus zavarosság jelentkezhet.

Ezt a problémát Simmons oldotta meg brómtimol-kék és agar hozzáadásával Koser eredeti képletéhez. Bár az elv ugyanaz, eltérően értelmezik.

bázis

Egyes baktériumok képesek túlélni fermentáció vagy tejsav képződés nélkül, és más szubsztrátok felhasználásával kell energiát szerezniük. Ebben a vizsgálatban az egyetlen felajánlott szénforrás a citrát.

Azokban a baktériumokban, amelyek ilyen körülmények között képesek túlélni, gyorsan metabolizálják a citrátot a hagyományos módszer alternatívájaként, a trikarbonsav ciklus vagy a citrát erjedési ciklus alkalmazásával.

A citrát baktériumok általi katabolizmusa enzimatikus mechanizmust foglal magában, az A koenzim beavatkozása nélkül. Ezt az enzimet citricáz (citrát-oxaloacetát-láz) vagy citrát-dezmoláz néven ismerték. A reakcióhoz kétértékű kation jelenléte szükséges, amelyet ebben az esetben a magnézium szolgáltat.

A reakció során oxaloacetátot és piruvátot állítanak elő, amelyek szerves savakat képeznek a lúgos pH közepén, amelyet a nitrogénforrás felhasználásával alakítottak ki. Ezeket a szerves savakat szénforrásként használják, karbonátokat és bikarbonátokat generálva, tovább lúgosítva a környezetet.

Vetési mód

A Simmons-citrát tápközeget egyenes hurok vagy tű segítségével enyhén beolthatja a halfarkba, és 24 órán át inkubálhatja 35–37 ° C-on. Az idő múlásával az eredményeket megfigyeljük.

A vetést csak az agar felületén végezzük. Ne szúrja át.

Értelmezés

Ha a tápközeg az eredeti színű (zöld) és nincs látható növekedés, akkor a teszt negatív, de ha a táptalaj kékké válik, akkor lúgos termékek jelenlétét jelzi, amelyet a pH-mutató detektál. Ebben az esetben a teszt pozitív.

Citrát (+) és (-). Forrás: MSc. Marielsa gil

Ennek oka az, hogy ha a baktérium a citrát szénét használja, akkor az ammónium-foszfát nitrogénjét is képes felvenni, amellyel ammóniát szabadít fel, és a tápközeget lúgosítja.

Másrészt, ha a tápközegben megfigyelték a baktériumok növekedését, de nincs színváltozás, akkor a tesztet is pozitívnak kell tekinteni, mivel ha növekedés történik, ez azt jelenti, hogy a baktériumok citrátot használtak szénforrásként, bár a pH-érték jelenleg nem változik (néha időt vehet igénybe).

Ha kétségek merülnek fel a végső szín értelmezésekor, akkor összehasonlíthatók egy nem beoltott citrátcsővel.

Készítmény

Mérjünk be egy 24 liter vízhez 24,2 g dehidrált közeget. Keverje össze és hagyja kb. 5 percig pihenni. Fejezze be a tápközeg feloldását melegítés közben egy vagy két percig, gyakran rázva.

Öntsön 4 ml-t a kémcsövekbe és autoklávot 121 ° C-on 15 percig. Az autokláv elhagyásakor hajtsa le egy hordozó segítségével oly módon, hogy az agar megszilárduljon egy fúvós csőr alakjában, kevés tömbtel vagy fenékkel és ferdebbel.

A citrátközeg végső pH-ja 6,9 (zöld színű). Ez a közeg nagyon érzékeny a pH-változásokra.

PH = 6 vagy annál alacsonyabb hőmérsékleten a táptalaj sárgára vált. Ezt a színt nem figyelték meg a baktériumtesztben.

És pH = 7,6 vagy magasabb felett a közeg mély porosz kékké válik.

Használat

A Simmons Citrate Agar bizonyos mikroorganizmusok, különösen az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok és más nem glükóztartalmú baktériumok azonosítására szolgál.

Forrás: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.

Végső gondolatok

A Simmons citrát táptalaj nagyon kényes teszt, mivel hamis pozitív eredmény érhető el, ha bizonyos hibákat elkövetnek.

A következő óvatossággal kell eljárni:

Az oltóanyagot

Nem szabad nagyon vastag vagy megterhelt baktérium-oltóanyagot készíteni, mivel a vetés helyén rézsárga szín kialakulását okozhatja, anélkül, hogy a táptalaj fennmaradó részét befolyásolná, de azt feltételezheti, hogy növekedés történik. Ez nem jelenti a teszt pozitivitását.

A vastag oltóanyag hamis pozitív eredményt is generálhat, mivel a haldokló baktériumok sejtfalában előállított szerves vegyületek elegendő mennyiségű szén- és nitrogént szabadíthatnak fel a pH-indikátor elfordításához.

Ezért az ideális a platina fogantyú helyett a tű felhasználásával vetni, hogy elkerüljük a felesleges anyag beszedését.

elvetett

Másrészről, amikor a kérdéses mikroorganizmus azonosítására szolgáló biokémiai tesztek csomagot ültetnek, fontos, hogy a citrátteszt legyen az első oltás, hogy elkerüljük a fehérjék vagy szénhidrátok átvitelét egy másik táptalajból.

Ilyen körülmények között hamis pozitív eredmény érhető el, mivel a véletlenül bevezetett anyagok bármelyike ​​metabolizálódik, és a pH változását okozza.

Az anyagok átvitelének elkerülésének másik módja az, hogy a hurkot jól égetik, és új inokulumot vesznek a másik vizsgálat között.

Óvatosan kell eljárni a kolónia megérintésén is az oltás elvégzéséhez, mivel a fentebb ismertetett okok miatt kerülni kell az agar egy részének a kultúrából történő húzását, ahonnan a baktériumok származnak.

Ebben az értelemben Matsen, Sherris és Branson azt javasolja, hogy az inokulumot fiziológiás oldatban hígítsák meg, mielőtt a citráttesztet beoltják, hogy elkerüljék más szénforrások átadását.

Színintenzitás

Figyelembe kell venni, hogy a pozitív teszt színének intenzitása a kereskedelmi ház függvényében változhat.

Ezen kívül vannak olyan mikroorganizmusok, amelyek pozitív teszteket mutatnak 24 óra múlva, de vannak olyan törzsek is, amelyeknél legalább 48 óra szükséges a pH-változás eléréséhez.

Irodalom

1. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok a klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztő Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
2. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
4. BD Laboratories. BBL Simmons citrát-agar. 2015. Elérhető a következő oldalon: bd.com
5. Britannia Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
6. Valtek Diagnostic Laboratories. Simmons Citrate Agar. 2016.Támogatható: andinamedica.com.