BEVONT AGAR: INDOKLÁS, FELHASZNÁLÁS ÉS ELŐKÉSZÍTÉS - BIOLÓGIA - 2026

A CLED agar (cisztin-laktóz-elektrolit-hiány) szilárd tápközeg-különbség, húgyúti fertőzések diagnosztizálására szolgál. A tápközeg összetételét a húgyúti patogének jó növekedésére tervezték, és ideális a kolóniaképző egységek (CFU) mennyiségi meghatározására.

A CLED tápközeg nem szelektív, mivel a gramm negatív és a gramm pozitív mikroorganizmusok növekedhetnek benne. De ez nem jelent problémát, mivel a legtöbb UTI-t csak egy típusú mikroorganizmus okozza.

CLED agar

Polimikrobiális fertőzések esetén 2 vagy 3 különböző baktérium nyerhető, de ez nagyon ritka, és legtöbbször szennyezett minták.

Az ebben a táptalajban növekedni képes gram-negatív baktériumok között megtalálhatók az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok és az egyéb bélben található baktériumok, amelyekben a vizeletmintákban leggyakrabban elkülönítik az uropatogéneket: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, többek között.

Hasonlóképpen, a közegben növekedni képes gram-pozitív baktériumok között a Staphylococcus aureus, a Staphylococcus saprophyticus, az Enterococcus faecalis, a Streptococcus agalactiae, a Corynebacterium sp, a Lactobacillus sp és még az élesztők is növekedhetnek, például a Candida albicans komplexben.

A tápközeg kémiai összetétele miatt azonban nem teszi lehetővé néhány igényes urogenitális kórokozó növekedését, mint például a Neisseria gonorrhoeae, a Gardnerella vaginalis.

CLED agar indok

A CLED tápközeg energiahordozóként húskivonatot, kazein hasnyálmirigy hidrolizátumát és zselatin hidrolizátumát tartalmazza. Tápanyagokat biztosítanak a szükségtelen baktériumok fejlődéséhez.

Cisztinet is tartalmaz, egy aminosavat, amely lehetővé teszi a koliformák növekedését, kis méretük alapján megkülönböztethető.

Hasonlóképpen, laktózt tartalmaz fermentálható szénhidrátként, ezért ez a közeg differenciál; képes megkülönböztetni a fermentáló baktériumokat a nem laktózos fermentációtól.

Az erjesztő baktériumok a tápközeg pH-jának megváltozását okozják savak előállításával, sárga kolóniák kialakulásával, míg a nem erjedő baktériumok nem idéznek elő változást a tápközegben, ezért az eredeti agar zöld színét veszik fel.

A fermentációs reakció a pH-indikátor jelenlétével derül ki, amely ebben a közegben brómtimolkék.

Másrészt a táptalaj alacsony elektrolitkoncentrációja gátolja a Proteus nemzetség tipikus invazív növekedését, az úgynevezett rajzás hatását. Ez előnyt jelent más táptalajokkal szemben, mivel lehetővé teszi a CFU-k számlálását, beleértve a Proteus nemzetség jelenlétét is.

Az elektrolitok alacsony koncentrációja azonban gátolja a Shigella nemzetség egyes fajainak növekedését, ez hátrány a többi táptalajhoz képest.

A CLED agar (Bevis) indoklása

Van egy változat vagy módosítása ennek a táptalajnak, amelyet Bevis készített, aki a savas fuksint (Andrade-indikátor) beépítette az eredeti összetételbe. A brómtimolkékkel együttműködve megkülönbözteti a fermentációt a nem erjedő baktériumoktól.

A szokásos és a módosított táptalajok közötti különbség az, hogy a kolóniák milyen színűek. A laktóz-erjesztő baktériumok esetében a kolóniák vöröses-narancssárgára válnak rózsaszínű vagy vörös halogénnal, míg a nem-erjesztő kékeszürkék.

Alkalmazások

A CLED agart kizárólag a vizeletminták vetésére használják. Ennek a közegnek az alkalmazása különösen gyakori az európai laboratóriumokban, Amerikában kevésbé.

A minták gyűjtésének meg kell felelnie bizonyos paramétereknek a megbízható eredmények elérése érdekében, ideértve a következőket:

• A szedés előtt ne szedjen antibiotikumokat.
• A vizeletet lehetőleg elsőként vegye reggel, mivel koncentráltabb, amikor invazív módszerekkel nem lehet mintát venni.
• Mielőtt elkezdené a mintát, alaposan mossa le a nemi szerveket.
• Dobja el az első vizelési vizet, majd helyezze a tartályt.
• Gyűjtsön 25-30 ml vizeletet egy jól felcímkézett steril tartályba.
• Azonnal vigye a jéggel körülvett laboratóriumba.
• A kibocsátástól számított 2 órán belül kell feldolgozni, vagy legfeljebb 24 órán keresztül 4 ° C-on hűtve.

Vizeletminták vetése

A vizeletmintát 1:50 arányban kell hígítani.

Hígításhoz tegyen be 0,5 ml beteg vizeletét és hígítsa 24,5 ml steril fiziológiás oldattal.

Mérjünk ki 0,1 ml hígított vizeletet és a felületet drigalski spatulával terjesszük a CLED táptalajra. Ez a legjobb vetési módszer a kolóniák számlálására. Ezért a vizeletmintákban használják, mivel az eredményeket CFU / ml-ben kell kifejezni.

A kapott kolóniák számszerűsítéséhez az alábbiak szerint járjon el: számolja a telepeket a tányérra, szorozza meg tízszer, majd 50-del. Ez adja a CFU / ml vizelet mennyiségét.

Értelmezés

100 000 CFU / ml feletti mennyiség - jelzi húgyúti fertőzést

1000 CFU / ml alatt számít - nincs fertőzés

Számít 1000-10 000 CFU / ml között - Kétes, lehetséges szennyeződés, ismételje meg a mintavételt.

ID

A CLED agaron termesztett telepeknek Gram-mal kell rendelkezniük, és a mikroorganizmus morfotintorális tulajdonságaitól függően egy bizonyos szubkultúrát végeznek.

Például, ha ez egy gram-negatív bacillus, akkor MacConkey agar agarra vetették be, ahol a laktóz erjedése vagy sem megerősítése megtörténik. Ezenkívül tápanyag-agart is csatolunk az oxidáz-teszt elvégzéséhez.

Abban az esetben, ha a Gram Gram-pozitív cocci-kat mutat, akkor szubkultúrázható sós mannit-agar és tápanyag agaron. Az utóbbiban a kataláz tesztet végezzük. Végül, ha élesztőt észlelnek, azt Sabouraud agarra vetik.

Sok laboratórium elkerüli a CLED táptalaj alkalmazását, és inkább a vér agar, a MacConkey és a tápanyag agar használatát választja a vizeletminták vetésére.

Készítmény

Egy liter desztillált vízzel ellátott lombikban oldjunk fel 36,2 g CLED agarport. 5 perc állás után melegítjük az újraszuszpendált agart, folyamatosan keverve 1 percig forraljuk.

Ezután 121 ° C-on 15 percig sterilizáljuk az autoklávban. Az idő végén eltávolítják az autoklávból, és hagyják lehűlni 45 ° C hőmérsékletre. Ezt követően mindegyik steril Petri-csészébe 15-20 ml-t tálalunk.

A szennyezés elkerülése érdekében a tányér kiszolgálását lamináris áramlású burkolaton belül vagy a Bunsen égő előtt kell elvégezni.

A kiszolgált lemezeket megszilárdulni hagyjuk, fordított állványban elrendezzük, és felhasználásig hűtőszekrényben (2-8 ° C) tároljuk.

Az elkészített táptalaj végső pH-jának 7,3 ± 0,2 kell lennie.

Irodalom

1. Ajánlások a húgyúti fertőzés mikrobiológiai diagnosztizálására. gyer. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Elérhető a scielo.org oldalon.
2. Panchi J. A húgyhólyag katéterezés alatt álló betegekben húgyúti fertőzéseket okozó mikrobiális anyag azonosítása. 2016. évi egyetemi munka a klinikai laboratóriumi alapképzés megszerzéséhez. Ambato Műszaki Egyetem. Ecuador.
3. Britannia Laboratories. CLED közepes. Elérhető a következő címen: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Használati utasítás, CLED agar. 2013 elérhető: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Alapvető kézikönyv a mikrobiológiáról. Elérhető: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, MD Díaz, Vicente T, Bouza E. A CLED agar opció a vizelettenyésztés rutinjában. Prospektív és összehasonlító értékelés. Diagnózis Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Gyakorlati klinikai mikrobiológia. Cadizi Egyetem, 2. kiadás. UCA Kiadványok Szolgálata.