CZAPEK AGAR: INDOKLÁS, ELŐÁLLÍTÁS, FELHASZNÁLÁS ÉS KORLÁTOZÁSOK - BIOLÓGIA - 2025

A Czapek (CZA) egy szelektív szilárd táptalaj, amelyet kifejezetten szaprofit baktériumok és gombák termesztésére terveztek. Ezt a lengyel eredetű Friedrich Johann Franz Czapek botanikus és Arthur Wayland Dox amerikai vegyész készítette; ezért az agart Czapek-Dox táptalajnak is nevezik.

Az eredeti táptalaj folyékony volt, de később agart adtunk hozzá, hogy szilárd táptalajává váljunk. A Czapek táptalaj nátrium-nitrátból, bikálium-foszfátból, magnézium-szulfátból, kálium-kloridból, vas-szulfátból, szacharózból, agarból és desztillált vízből áll.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Forrás: A. Medmyco / B. Fotó: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

A Czapek agar pH-ja 7,3, de van egy változat, amelyhez 10% tejsavat adunk, amelynek pH-ja 3,5-nél marad. Ezt a savközeget savasofil mikroorganizmusok tenyésztésére használják.

Másrészről, néhány kereskedelmi ház módosította a Czapek agar összetételét magnézium-szulfát és bikálium-foszfát glicerofoszfáttal történő megváltoztatásával; ez a módosítás megakadályozza a magnézium-foszfát csapadék képződését a hagyományos képlettel. Hasonlóképpen, van még egy változat, amelyhez élesztőkivonatot adnak.

Végül, az APHA amerikai közegészségügyi szövetség javasolja a Czapek agart az Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp és Penicillium sp. Ezeket a fajokat környezeti mikroorganizmusok és opportunista patogének jellemzik.

bázis

Ez a közeg szacharózt tartalmaz; Ez a szénhidrát szolgál szénforrásként, míg a nátrium-nitrát a nitrogénforrás, ám más táptalajokkal ellentétben a biztosított nitrogén szervetlen.

Ezért a Czapek táptalajt szelektívnek tekintik, mivel csak azok a mikroorganizmusok képesek növekedni, amelyek szervetlen vegyületeket képesek egyetlen nitrogénforrásként felhasználni.

A táptalaj ozmolaritásának szabályozó anyaga a bikálium-foszfát. A magnézium-szulfát, a kálium-klorid és a vas-szulfát a maga részéről nélkülözhetetlen ásványi anyagokat biztosít a szaprofit (szabadon élõ) mikroorganizmusok szaporodásához. Ez a képlet magnézium-foszfát csapadékot képez.

Végül az agar-agar az a vegyület, amely szilárd állagot biztosít a közeghez, és víz az oldószer az összes alkotóelem számára.

A módosított Czapek agar formulával nincs csapadékképződés, és javítja egyes gombák növekedési teljesítményét.

A savas Czapek-agar szélsőséges savassága szelektívebb táptalajt tesz lehetővé, csak szerves szerves nitrogén felhasználására képes acidofil mikroorganizmusok növekedését teszi lehetővé. Eközben a Czapek-élesztő agar javítja egyes gombák teljesítményét.

Készítmény

Közepes Czapek-Dox

Mérjünk ki 49 g dehidratált tápközeget és oldjuk desztillált vízben. Melegítsük forrásig. Rázza fel a keveréket gyakran, amíg teljesen fel nem oldódik.

-Czapek Agar ékek

Osszuk el az oldott keveréket csövekbe és autoklávban 121 ° C-on 15 percig. Amikor eltávolítja az autoklávból, a csövek lerakása előtt homogenizálja és hagyja megszilárdulni.

-Czapek agarlemezek

Az oldott elegyet autoklávozzuk 121 ° C-on 15 percig, hagyjuk 50 ° C-ra hűlni, homogenizáljuk, és öntsünk 20 ml-t steril Petri-csészékbe. Hagyja megszilárdulni, fordítsa meg és tárolja a hűtőszekrényben felhasználásig.

A pH-nak 7,3 ± 0,2-nél kell maradnia. A dehidrált táptalaj színe fehér, az elkészített táptalaj pedig világosbarna színű, enyhén zavaros a flokkuláló csapadék jelenléte miatt.

Czapek közeg savas pH-n

Készítsük el a már leírtak szerint, de hozzáadunk 10 ml steril 10% tejsavat minden elkészített táptalajhoz. A módosított Czapek táptalaj pH-ja 3,5 ± 0,2 legyen.

Módosított Czapek közepes

Mérjünk ki 45,4 g dehidrált közeget és oldjuk fel 1 liter vízben. A készítmény többi része megegyezik a fentiekkel. A dehidrált közeg színe fehér, az elkészített táptalaj fehéres. A tápközeg végső pH-ja 6,8 ± 0,2.

Czapek-élesztő táptalaj

Czapek élesztõkivonat-agarnak (CYA) is hívják. A klasszikus Czapek agar és élesztõkivonat elemeit tartalmazza.

Használat

A Czapek táptalajt szaprofit mikroorganizmusok keresésére használják többek között a talaj, zöldség, gabona, levegő, rovarok mintáiban.

A savas pH-n lévő Czapek agart a savasofil mikroorganizmusok szaporítására használják, míg a módosított Czapek agar különösen hasznos a chlamydospórák képződéséhez a Candida albicans komplex fajain.

Végül, a Czapek-élesztő agar nagyon hasznos Aspergillus és Penicillium izolálására.

elvetett

-Czapek agar

Aktinomiceták talajban történő kereséséhez az alábbiak szerint járjon el: a mintát fenolizált vízzel kezeljük 30 percig, majd 1 ml szuszpenziót Czapek agarra vetjük. Inkubáljuk 28 ° C-on 5-7 napig.

Zöldség-, gabona- és rovarmintákhoz közvetlenül az agarra helyezik őket. Ezenkívül hígításokat végezhet, és 0,1 ml-et vethet fel az agar felületére.

-Módosított Czapek agar

A vetéshez egyenes hurkot vagy tűt használunk, impregnáljuk a tamponnal, és az agart oltjuk oly módon, hogy addig szúrjuk be, amíg az meg nem érinti a lemez alapját. Inkubáljuk 24 órán keresztül 28 ° C-on, és mikroszkóp alatt vizsgáljuk meg a lemez fölött és alatt, hogy megfigyelhető legyen-e chlamydospores.

Inkubációs hőmérséklet és idő

Az inkubációs hőmérséklet és az idő függ az izolálandó mikroorganizmus típusától. A lemezeket általában egy-két héten inkubálják 20-25 ° C hőmérsékleti tartományban.

Bizonyos törzsek esetében azonban vannak speciális feltételek. Például az Aspergillus nemzetség legtöbb faja optimálisan növekszik 30 ° C-on; az A. fumigatus azonban 50 ° C-on növekszik.

Az egy vagy két hetes inkubációs idő szempontjából normális, azonban a Candida albicans 24-48 órán belül kialakulhat 25 ° C-on.

Néhány kolónia jellemzői ezen a táptalajon

-Penicillium atrovenetum

12 napig tartó inkubáció során 27 ° C-on fejlődik ki. Kolóniáik kicsik (25 mm).

A kolóniák bársonyos megjelenésűek, meghatározott fehér szegéllyel és közepén kék-zöld színű árnyalattal, amely öregedéskor szürkévé válik. A kolónia hátoldala narancssárga, a közepét ugyanolyan színűvé teszi a pigment előállítása.

-Aspergillus niger

Fehér-sárga micéliummal és fekete spórákkal fejlődik ki.

-Candida albicans

Krémes világos bézs telepek alakulnak ki. A módosított Czapek agarban chlamydospórákat képez.

-Aspergillus parasiticus

A sötétzöld micélium 7 napon belül 25 ° C-on fejlődik ki.

QA

A tápközeg minőségének értékelése céljából tanúsított kontroll törzseket ültethetünk, például: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Az Aspergillus niger körülbelül 5 napon belül fehér vagy sárga micéliumban és fekete spóraban fejlődik ki, míg a Candida albicans növekedése 24 óra hosszat 25 ° C-on történő inkubálás során kielégítően növekedni fog; a kolóniák krémszínűek.

korlátozások

Néhány tanulmány kimutatta, hogy az Actinomycetes visszanyerésekor a legjobb hozamú agar a burgonya-dextróz agar, a második helyen a Czapek agar, az Aspergillus és a Penicillium visszanyerésekor azonban a legnagyobb a visszanyerési arány a Czapek agar.

Irodalom

1. M. Dávila és mtsai. Antagonista aktinomycetes mezőgazdasági jelentőségű fitopatogén gombákkal szemben. Mex. Tiszteletes Tudomány. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Elérhető a scielo.org oldalon.
2. M Luna, Y Lozada, Búza Á. Az Aspergillus niger törzsek izolálása ochratoxin A előállítására tárolt zöld kávéban (Coffea arabica). Mex. Tiszteletes Mic. 2010-ben; 32: 63-68. Elérhető a.scielo.org oldalon.
3. Wikipedia közreműködői. Czapek közepes. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2019. január 13., 20:30 UTC. Elérhető: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Módosított Czapek-Dox agar. Elérhető a következő címen: condalab.com
5. Culture Media Microkit. Czapek-Dox Agar. Diosponible: Medioscultivo.com