Az EMB agar szelektív és differenciálközeg, amelyet a Gram-negatív baktériumok, különösen az Enterobacteriaceae és más, Gram-negatív baktériumok szilárd tenyészeteinek izolálására használnak. Az EAM rövidítés is ismert, amely az eozin-metilén-kék jelentése.
Ezt a tápközeget 1916-ban hozták létre Holt-Harris és Teague. Peptont, laktózt, szacharózt, dikálium-foszfátot, agart, eozint, metilénkék és vizet tartalmaz. Nagyon hasonló a MacConkey Agar-hoz, különösen akkor, ha Levine módosított EMB agarját alkalmazzuk, amely nem tartalmaz szacharózt.
Az Escherichia coli fémes fénye az EMB agaron Forrás: Carmen Moreno González, a Wikimedia Commonsból
Valójában minden laboratórium eldönti, hogy dolgozzon-e egymással, mivel ugyanazt a funkciót látják el, bár biokémiai szempontból eltérőek.
Még ugyanazzal a hátránnyal rendelkezik, mint a klasszikus MacConkey agar, a Proteus nemzetség rajzásának szempontjából. Ezért e jelenség elkerülése érdekében az agarkoncentráció akár 5% -kal is növelhető.
bázis
Szelektív
Az EMB agar finoman szelektív, mivel anilinfestékeket (eozint és metilénkék) tartalmaz, amelyek gátlókként gátolják a legtöbb gram-pozitív baktérium és néhány igényes Gram-negatív rúd növekedését.
Ennek az agarnak az a hátránya, hogy néhány gram-pozitív baktérium képes ellenállni a gátló anyagok jelenlétének és kis színtelen punctat kolóniákként növekedni, például Enterococcus faecalis és néhány Staphylococcus.
Egyes élesztők is növekedhetnek, például a Candida albicans komplex, amely nagyon kicsi rózsaszínű kolóniákat eredményez. A chlamydospórák ebből az élesztőből is kialakulhatnak, ha a mintát mély magvakkal vetik be.
Differenciális
Másrészről, az EMB agar szintén differenciális közeg, mivel ezeknek a színezékeknek (az eozin és a metilénkék) együttesen olyan tulajdonsága van, hogy savas pH-ban csapadékot képeznek, ezért a termelés mutatóiként szolgálnak.
Így a gyengén laktóz- vagy szacharózos erjesztő baktériumok lila kolóniákat hoznak létre 24–48 órán belül. Például a Klebsiella, az Enterobacter és a Serratia nemzetségek.
Azok a baktériumok, amelyek erősen fermentálják a laktózt, például az Escherichia coli vagy a szacharóz, például a Yersinia enterocolitica vagy a Proteus penneri, zöldesfekete csapadékot képeznek, és jellegzetes fémes fényű megjelenést mutatnak ezekben a fajokban.
Meg kell jegyezni, hogy ha EMB levén tápközeget (szacharóz nélkül) használnak, a Yersinia enterocolitica és a Proteus penneri tiszta kolóniákat hoz létre.
A laktózt vagy szacharózt nem fermentáló baktériumokat peptonok táplálják, amelyek biztosítják a baktériumok növekedéséhez szükséges aminosavakat és nitrogént, és tiszta kolóniákat hoznak létre. Például a Salmonella és Shigella nemzetségek.
Hasonlóképpen, fontos megjegyezni, hogy az Acinetobacter nemzetség levendulakék telepeket is tartalmazhat, annak ellenére, hogy nem laktóz-fermentor vagy szacharóz, hanem azzal a tulajdonsággal rendelkezik, hogy a metilénkék rögzíti a sejtfalán. Ez történhet más oxidatív baktériumokkal is.
Készítmény
Az eredeti dehidrált közeg világos bézs színű.
Ennek a tápközegnek a elkészítéséhez 36 gramm dehidrált tápközeget meg kell mérni és szuszpendálni egy lombik desztillált vizet tartalmazó lombikban.
Miután hagytuk a keveréket 5 percig pihenni, vigyük a lombikot hőforrásra, erőteljesen és folyamatosan keverve, amíg felforr és teljes feloldódik.
Ezt követően a már feloldott tápközeget autokláv alkalmazásával sterilizálni kell 121 ° C-on 15 percig.
Az idő végén eltávolítják az autoklávból, és hagyják, hogy rövid ideig álljanak. Ezután még meleg (45-50 ° C) hőmérsékleten 15-20 ml agart adagolunk minden egyes Petri-csészébe. A közegnek lakmuszkéknek kell lennie.
Tálalás után a lemezeket enyhén fedetlen állapotban hagyjuk, amíg az agar kissé lehűl. Ezután lefedik és hagyják, hogy teljesen megszilárduljanak. Ezt követően fordított lemeztartókba helyezik, és felhasználásig hűtőszekrényben (8 ° C) tárolják.
Ezt az eljárást lehetőleg lamináris áramlású burkolatban vagy egy Bunsen égő előtt hajtják végre a szennyeződés elkerülése érdekében.
Fontos szem előtt tartani, hogy minden kereskedelmi ház feltünteti a tápközeg előkészítéséhez mérlegelendő mennyiséget.
A tápközeg végső pH-jának 7,2 ± 0,2-nek kell lennie
Alkalmazások
Ezt a tápközeget vizelet és ürülék, vagy bármilyen típusú klinikai minta vetésére használják, különösen akkor, ha nem ízléses Gram-negatív bacillusok jelenléte gyanúja áll fenn, például az Enterobacteriaceae családba tartozó bacillusok, amelyek ezen a táptalajon nagyon jól növekednek.
A Shigella és a Salmonella nemzetség enteropatogén baktériumait színtelen vagy enyhén borostyánszínű kolóniájuk különbözteti meg.
Más nem laktózt fermentáló baktériumok, például az Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter is nőnek.
Hasonlóképpen, ez a táptalaj nagyon hasznos az élelmiszerek és a víz mikrobiológiai elemzésében, mivel ideális a koliformák meghatározásának teljes megerősítő fázisához, azaz hogy megerősítsék az E. coli jelenlétét zavaros EC táptalajon a legvalószínűbb szám technika (MPN).
QA
Annak ellenőrzése érdekében, hogy a frissen készített táptalaj megfelelően működik-e, a kontroll törzseket ültethetjük a kolóniák jellemzőinek megfigyelésére és annak ellenőrzésére, hogy a várt módon adnak-e.
Ehhez ATCC törzsek vagy jól azonosított E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa és néhány Gram-pozitív baktériumok, például S. aureus törzsek használhatók.
Az E. coliból várhatóan jól fejlett kék-fekete telepek alakulnak ki, zöld fém csillogással. Mivel az Enterobacter aerogenesnek és a Klebsiella sp-nek jól fejlett kékes-fekete nyálkahártyákat kell létrehozniuk.
A Salmonella typhimuriumnak és a Shigella flexnerinek viszont nagy kolóniáknak kell fejlődniük, színtelen vagy enyhe borostyánszínűek.
Végül a Pseudomonas aeruginosa nemzetség szabálytalan méretű színtelen kolóniákként növekszik, míg a gram-pozitív baktériumokat teljesen gátolni kell, vagy nagyon kis telepekkel ritkán kell növekedni.
Végső gondolatok
A sterilizálás néha csökkenti a metilénkék színét, közepesen narancssárga színű. Annak érdekében, hogy a metilénkék oxidálódjon és visszaszerezze a lila színét, azt óvatosan kell keverni, amíg a szín helyre nem áll.
Sterilizálás után a festék kicsapódhat, ezért a Petri-csészék kiszolgálása előtt alaposan össze kell keverni.
Irodalom
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B és Velázquez O. 2009. Az élelmiszerek mikrobiológiai elemzésének technikái. 2nd ed. UNAM Kémiai Kar. Mexikó.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. A perui baromfifarmok brojlercsirkékből izolált, potenciálisan kórokozó Escherichia coli törzsek jellemzése és eloszlása. Rev. állatorvos. Peru 2012 23 (2): 209–219. Elérhető a scielo.org oldalon.
- Laboratorios Conda SA eozin és metilénkék agar. 2010. elérhető: condalab.com
- Britannia Laboratories. Levine EMB (eozinnal és metilénkékkel) 2011. Elérhető a következő címen: britanialab.com
- BD Laboratories. BD EMB agar (eozin-metilén-kék agar), módosítva. 2013. Elérhető a következő oldalon: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztõ Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiológiai diagnosztika. 12 ed. Argentína. Szerkesztő Panamericana SA