Az endo- vagy endo- agar táptalaj szilárd tápközeg, differenciál és bizonyos fokú szelektivitási tenyészettel rendelkezik. Az eredeti receptot az Endo készítette 1904-ben, hogy megkülönböztesse a laktózos erjedést a nem erjedt baktériumoktól. Kezdetben a Salmonella typhi izolálására tervezték, de később a tápközeg célja a koliformák keresése.
Az Endo Agar alapelve megmaradt, de megfogalmazása számtalan változáson ment keresztül az évek során. Jelenleg a tápközeg állati szövetek peptikus emésztéséből, laktózból, dikálium-hidrogén-foszfátból, nátrium-szulfitból, bázikus fuksinból és agarból áll.
V: Szűz Endo-agar B: Magolt Endo-agar, az agar közepén észrevehető egy E. coli törzs fémes fénye. Forrás: A: Strolch1983 / B: LenkaM
A tápközeg fő felhasználását az Enterobacteriaceae családhoz és más közeli családokhoz tartozó gram-negatív baktériumok izolálásához és differenciálódásához kötik.
Régóta alkalmazták a koliformák kimutatására a víz-, tej- és élelmiszermintákban, de ma ezt a tápközeget más, hasonló funkcióval rendelkezők is helyettesítették. Néhány mikrobiológiai laboratórium azonban ezt az agart használja az Enterobacteriaceae izolálására a klinikai eredetű mintákból.
bázis
Az endo-agar olyan peptoneket tartalmaz, amelyek aminosavak, nitrogén, szén és energia forrásaként szolgálnak, és szükségesek a szükségtelen mikroorganizmusok szaporodásához.
Másrészt az agar enyhén szelektív jellegét nátrium-szulfit és bázikus fuksin hozzáadása biztosítja; mindkét komponens részben vagy teljesen gátolja a legtöbb gram-pozitív baktérium növekedését.
A különbséget a fermentálható szénhidrát jelenléte adja, amely ebben az esetben laktóz és bázikus fuksin, amely szintén pH-indikátorként szolgál.
A gramnegatív baktériumok, amelyek ezen az agaron nőnek fel és képesek fermentálni a laktózt, erős rózsaszínű kolóniákat alkotnak; mivel az Escherichia coli kórokozója sötétvörös telepek kialakulása irizáló, zöldes fém csillogással. Ennek oka a savak magas termelése a szénhidrátos erjedésből.
Meg kell jegyezni, hogy a tápközeg a kolóniák körül is erősen rózsaszínűvé válik. Míg a nem laktózos erjesztéssel járó grammnegatív rudak halvány rózsaszínű kolóniákat alkotnak, mint a közepes vagy színtelen.
A kálium-hidrogén-foszfát kiegyensúlyozza a közeg pH-ját, és az agar az az alkotóelem, amely biztosítja a szilárd állagot.
Készítmény
Endo agar
Mérjünk ki 41,5 g dehidrált közeget és oldjuk fel 1 liter desztillált vízben. Az elegyet melegítsük gyakran keverés közben, amíg a közeg teljesen fel nem oldódik. Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on, 15 lb nyomáson, 15 percig.
Az autoklávból történő eltávolítás után hagyja lehűlni körülbelül 45-50 ° C hőmérsékletre, és tálalás előtt rázza fel az elegyet, hogy homogenizálódjon. Öntsünk 20 ml-t steril Petri-csészékbe.
Hagyja a lemezeket megszilárdulni, fordítsa meg, és lerakóban tárolja, vagy sötét papírral borítsa le, mielőtt a hűtőszekrényben tárolja. Nagyon fontos az előkészített tápközeget megvédeni a közvetlen fénytől. A legjobb gyakorlat az, ha elkészíti a szükséges összeget.
Hűtőszekrényben tárolva a lemezeket használat előtt hagyja felmelegedni.
A tápközeg pH-jának 7,2-7,6 között kell lennie, és az elkészített táptalaj színe halvány rózsaszín.
M-Endo agar variáns
Az Endo agarnak (m-Endo) van egy másik változata, amely követi a McCarthy, Delaney és Grasso képletet, amely több vegyületet tartalmaz és készítmény formájában változik.
Ez a változat tartalmazza: laktózt, triptózt, kazein enzimes emésztését, állati szövetek enzimatikus emésztését, nátrium-kloridot, kétbázisú kálium-foszfátot, nátrium-szulfitot, élesztõkivonatot, egybázisú kálium-foszfátot, bázikus fuksint, nátrium-dezoxikolátot, lauril-szulfátot nátrium és agar.
Ebben az esetben 51 g dehidratált közeget lemérünk és szuszpendálunk 1 liter desztillált vízben, amely 20 ml etanolt tartalmaz.
Keverés közben kissé melegítsük, amíg a közeg teljesen fel nem oldódik. Nem szabad túlmelegedni és autoklávozni. Amint a keverék homogén, tálaljuk steril Petri-csészékben és hagyjuk megszilárdulni.
Használat
Egyes országokban még mindig használják az összes és a székletben található kolibakteriális baktériumok számlálására az élelmiszer- és vízmintákban, különös tekintettel az Escherichia coli jelenlétére a széklet-szennyeződés fő mutatójaként.
Az M-Endo Agar-t az Amerikai Közegészségügyi Szövetség (APHA) ajánlja a fertőtlenítési és szennyvíztisztító programok ellenőrzésére és ellenőrzésére, valamint az ivóvíz minőségének értékelésére.
A legszélesebb körben alkalmazott módszer a membránszűrés, miután a mintát 2–4 órán át Lauril-szulfát-táptalajjal dúsítottuk.
Ezt fel lehet használni az EMB agar helyettesítésére az ételek és a víz mikrobiológiai elemzésében a legvalószínűbb szám technikával (MPN), különösen a teljes megerősítő szakaszban, hogy megerősítsék az E. coli jelenlétét zavaros EC táptalajokban.
QA
Az ismert vagy tanúsított kontroll törzseket bevetjük az elkészített Endo agar-tétel minőségének értékelése céljából.
Az erre a célra felhasználható törzsek a következők: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC1400 és EnterCiCo 1414, EnterCiCiCoCiCoCiCoCoClCoClClClM és Proteus miCiCoCiCoCoCoClCoClClClC1C4..
A törzseket kimerültséggel oltják be és 24 órán át 37 ° C-on inkubálják aerobiosisban.
A várt eredmények:
- Escherichia coli esetében: erős vörös kolóniák, fémes csillogással.
- Az E. cloacae és a K. pneumoniae esetében a telepeknek rózsaszínű mucoidnak kell lenniük.
- Az S. typhimurium, S. flexneri és P. mirabilis esetében a telepek általában halvány rózsaszínűek vagy színtelenek.
- Végül az E. faecalis várhatóan részlegesen gátolja, ezért növekedése gyenge lehet nagyon kicsi, erős rózsaszínű kolóniákkal.
korlátozások
-Az Endo táptalaj alacsony szelektív képességgel rendelkezik, ezért előfordulhat, hogy néhány gram-pozitív mikroorganizmus, például Staphylococcus, Enterococcus és még élesztők is növekedhetnek.
- Más táptalajok, amelyek nem tartoznak az Enterobacteriaceae családba, fejlődhetnek ezen a táptalajon, például Pseudomonas sp és Aeromonas sp. Ezen törzsek jellemzői színtelen, szabálytalan telepek.
-Ez az előkészített közeg nagyon érzékeny a fényre, ezért hosszabb ideig tartó expozíciója rontja a jelzőrendszert, és a táptalaj visszafordíthatatlan károsodását okozza.
-A tápközeg alkotórészeit karcinogénnek tekintik, ezért kerülni kell a közvetlen érintkezést.
-A dehidratált közeg nagyon higroszkópos, és az eredeti tartályában szobahőmérsékleten, szorosan lezárva és száraz környezetben kell tartani.
Irodalom
- BD Laboratories. Endo Agar. 2013. Elérhető a következő oldalon: bd.com
- Neogen Laboratories. M Endo Agar. Elérhető a következő címen: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2017. szeptember 7., 08:27 UTC. 2019. február 28., 22:55. Elérhető: en.wikipedia.
- MercK laboratórium. Endo agar. 2019. Elérhető a következő címen: merckmillipore.com
- Műszaki adatlap laboratóriumok. M –Endo Agar LES. 2015.Attól elérhető: liofilchem.net