A Hektoen vagy Hektoen bélben oldódó agar táptalaj szelektív és differenciált tenyészet. A Hektoen Intézetben King és Metzger hozták létre a Shigella és a Salmonella nemzetség enteropatogén baktériumainak izolálására.
A tápközeg proteóz-peptonból, élesztő-kivonatból, epesókból, laktózból, szacharózból, szalicinből, nátrium-tioszulfátból, nátrium-kloridból, vas-citrátból, ammónium-citrátból, brómtimol-kékből, savas fuksinból és agarból áll. Ez a készítmény lehetővé teszi a Shigella és a Salmonella nemzetségek megkülönböztetését az ezen táptalajban növekedni képes baktériumok többi részétől.
A. Virgin Hektoen agar B. Magot tartalmazó Hektoen agar. Forrás: Flickr.com/Az eredeti feltöltő Philippinjl volt a francia Wikipedia-ban.
Bár vannak más táptalajok is, amelyek ugyanolyan funkcióval bírnak, mint a Hektoen agar, ennek nagyobb előnye van a többi táptalajhoz képest, különösen akkor, ha a Shigella fajokat akarjuk visszanyerni.
Mindkét nem nemzetiségű fajai súlyos emésztőrendszeri problémákat okoznak az emberekben a szennyezett élelmiszerek fogyasztása miatt; ezért a transzmisszió széklettel - orálisan történik. Ezért indokolt a Hektoen agar használata a széklet és az élelmiszerminták mikrobiológiai elemzésében.
bázis
A Hektoen Agar peptoneket és élesztõkivonatot tartalmaz tápanyagforrásként, biztosítva a mikrobiális fejlõdés alapvetõ elemeit.
Azonban epessókkal is rendelkeznek, amelyek bizonyos baktériumok, különösen a gram-pozitív és a néhány negatív baktériumok növekedésének gátlására hatnak. Ez az oka annak, hogy szelektív közegnek tekintik.
Másrészt a Hektoen agar differenciálközeg. Ezt a tulajdonságot fermentálható szénhidrátok, például laktóz, szacharóz és szalicin jelenléte biztosítja, valamint a pH-indikátor rendszerrel, amelyet brómtimol-kék és savas fuksin képvisel.
Azon a táptalajon növekedni képes baktériumok, amelyek nem tartoznak a Salmonella és a Shigella nemhez, a Proteus nemzetség kivételével lazac- vagy narancstelepek alakulnak ki. Ennek oka a jelen lévő egy vagy több szénhidrát fermentációja, amely megsavanyítja a közeget, ami a pH-mutatót megfordítja.
A Shigella és a Salmonella nemzetségek viszont nem képesek a jelenlévő szénhidrátok egyikének erjesztésére, csak a peptoneket használják energiaforrásként, amely lúgosítja a közeget, és ezért kolóniáik kék-zöldek.
Ebben a közegben meg lehet különböztetni azokat a baktériumokat is, amelyek képesek hidrogén-szulfid képzésére (színtelen gáz). A nátrium-tioszulfát a kén forrása, míg a fejlesztő vas-citrát. Mindkét vegyület lehetővé teszi a vas-szulfid fekete csapadék képződését, amely a reakciót mutatja.
A kolónia közepén lévő fekete csapadék körül átlátszó halogénnel halszem megjelenést ad. Ez a tulajdonság a Salmonella nemzetség jelenlétére utal.
Végül a nátrium-klorid fenntartja az ozmotikus egyensúlyt, és az agar biztosítja a közeg szilárd állandóságát.
Készítmény
Mérjünk be 76 g dehidratált közeget és oldjuk fel liter desztillált vízben. Erősen rázzuk össze a keveréket, majd hagyjuk pihenni 10–15 percig. Melegíthető és forralható, forgómozgásokkal teljes feloldódásig. Ezt a közeget nem autoklávozzuk.
Amikor a tápközeg megközelíti a 45 ° C hőmérsékletet, 20 ml-es térfogatot közvetlenül a Petri-csészékbe öntünk.
Az agar hagyja megszilárdulni. Abban az időben használatra készek. Javasoljuk, hogy azonnal használja őket. Ha ez nem lehetséges, felhasználásig hűtőszekrényben tartják őket.
A lemezeket előre vetni kell a hűtőszekrényből a vetés előtt, hogy szobahőmérsékletre melegedjenek.
A tápközeg pH-jának 7,5 ± 0,2-nek kell lennie. A dehidrált táptalaj színe lila, az elkészített táptalaj barnás-zöld.
Használat
A Hektoen agar használata javasolt a Shigella és a Salmonella nemzetségbe tartozó baktériumok keresésére a székletben és az élelmiszermintákban.
E baktériumok izolálásának lehetősége jelentősen megnő, ha a mintát korábban speciális tápközegekben dúsítják, mint például szelenit leves, cisztin szelenit leves, tetrationát leves stb.
Az inokulumnak erősnek kell lennie, és a vetést csíkokkal kell elvégezni. A lemezeket 37 ° C-on inkubáljuk 24–48 órán keresztül aerobiosisban.
48 órás inkubálás ajánlott, mivel a telepek jellemzői egyértelműbbek értelmezésük és differenciálásuk szempontjából.
QA
Ezen a táptalajon a minőség-ellenőrzés elvégzéséhez tanúsított baktériumtörzseket használnak, mint például: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 és Shigella sonnei ATCC 25931.
A várt eredmények a következők: A Salmonella typhimurium és a Salmonella enteritidis kék-zöld telepeket kell kialakítani, fekete központtal vagy anélkül. Míg a Shigella fajok kék-zöld kolóniákként növekednek.
Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 és Staphylococcus aureus ATCC 25923 törzsei szintén belefoglalhatók.
Ezekben az esetekben a megfigyelt jellemzők a következők: Az E. coli és a K. pneumoniae lazac-narancssárga kolóniákat hoz létre ebben a közegben, azonos színű csapadékkal körülötte. Míg a Proteus kék-zöld telepeket fog kifejleszteni, fekete központtal vagy anélkül.
Míg a S. aureus és az E. faecalis gátolni kell, az E. faecalis időnként nagyon kicsi, sárga kolóniákként képesek növekedni.
Másrészt, mivel ez a táptalaj nem autoklávozott, fontos a táptalaj sterilitásának értékelése. Ezért minden előkészített tételből egy-két nem oltott lemezt inkubálni kell 37 ° C-on 24 órán át aerobiosis alatt.
Nyilvánvaló, hogy a tányéron semmiféle növekedés nem várható.
korlátozások
-A Proteus fajok fejlődhetnek ebben a közegben, és kolóniáik jellemzőit összekeverhetők a Salmonella vagy a Shigella fajokkal. Ezért minden gyanús kolóniát biokémiai vizsgálatokkal meg kell erősíteni.
-A táptalaj használatát más kevésbé szelektív agarokkal kell kísérni, mert ha a keresett mikroorganizmus alacsony koncentrációban található meg, akkor előfordulhat, hogy nem fejlődik ki ebben a közegben.
- Az előkészítés során ne melegítse túl, mivel a túlzott hő megváltoztatja a közeg összetételét.
- Általában előfordulhat, hogy a szalmonellát fermentáló laktóz kolóniák észrevétlenül maradnak.
Irodalom
- Wikipedia közreműködői. Hektoen bélben oldódó agar. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2019. március 13., 23:38 UTC. Elérhető a következő oldalon:.wikipedia.org / Hozzáférés 2019. március 16-án.
- BD Laboratories. BD Hektoen bélgátló agar (HE agar). 2013. Elérhető a következő oldalon: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoen bélben oldódó agar. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoen agar. Elérhető a következő címen: f-soria.es
- Difco & BBL kézikönyv, Hektoen bélben oldódó agar. 2. kiadás. Elérhető itt: bd.com/europe