- bázis
- Készítmény
- Alkalmazások
- A kolóniák jellemzői
- Tejsavbaktériumok izolálása
- Tejsavbaktériumok számítanak
- Kutatási szint
- QA
- Irodalom
Az MRS agar szelektív szilárd táptalajtenyészet, amelyet tejsavbaktériumok, különösen a Lactobacillus nemzetség izolálására és felsorolására használnak. Ezt az agart 1960-ban Man, Rogosa és Sharpe készítette, azonos névvel, de bonyolultsága miatt gyakran használják az MRS rövidítést.
Ez proteóz-peptonból, húskivonatból, élesztő-kivonatból, glükózból, szorbitán-monoleátból, dikálium-foszfátból, nátrium-acetátból, ammónium-citrátból, magnézium-szulfátból, mangánszulfátból és agarból áll.

Man Rogosa és Sharpe Agar (MRS) a Lactobacillus sp. Forrás: A cikkhez adományozott fotó: a szerzők: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. A vizsgálat során készített fénykép: Tejsavbaktériumok és probiotikus potenciállal bifidobaktériumok értékelése az anyatejben és a csecsemő székletében.
Ez a kompozíció lehetővé teszi a tejsavbaktériumok megfelelő fejlődését klinikai mintákból, például székletből, hüvelyi ürítésből, orális mintákból és anyatejből, valamint tej- és húsételekből.
Klinikai laboratóriumokban nem használják rutinszerűen, mivel a tejsavbaktériumok ritkán vesznek részt a betegségben. Az élelmiszer-mikrobiológia területén azonban az MRS agar gyakoribb.
Másrészt ezt a tápközeget olyan kutatóközpontok használják, amelyek célja a tejsavbaktériumok tanulmányozása.
bázis
Az ember, a Rogosa és a Sharpe agar meglehetősen összetett összetételű. Az egyes alkotóelemek funkcióinak lebontásával magyarázható az alapja.
A proteózpepton, a húskivonat, az élesztõkivonat és a glükóz tápanyagok, amelyek biztosítják a baktériumok növekedéséhez szükséges szén, nitrogén, vitaminok és ásványi anyagok forrását. Ezenkívül a glükóz az egyetemes energiaforrás, amelyet a legtöbb táptalajban használnak.
Másrészt a tejsavbaktériumok szaporodásának elősegítése érdekében szükséges a Lactobacillus és a rokon baktériumok metabolizmusában alapvető kofaktorok (kationok) jelenléte; Ezek a vegyületek a nátrium-, magnézium- és mangán-sók.
Hasonlóképpen, a szorbitán-monoleát vagy a poliszorbát 80 fontos zsírsavforrás, mivel tápanyagként felszívódnak.
Ezenkívül a szorbitán-monoleát és az ammónium-citrát úgy hat, hogy gátolja a kísérő növény, különösen a Gram-negatív baktériumok fejlődését, biztosítva ennek az agarnak a szelektív jellegét.
Végül az agar-agar biztosítja a közeg szilárd állagát.
A Man Rogosa Sharpe agarnak más változatai is vannak; az egyiket cisztein (MRSc) egészíti ki, amely nagyon hasznos a bifidobaktériumok izolálására, többek között a mikroorganizmusok között. Másrészt létezik az MRS táptalaj, kiegészítve neomicinnel, paromomicinnel, nalidixinsavval és lítium-kloriddal, amelyek speciálisak a bifidobaktériumok szelektív számlálására a tejtermékekben.
Készítmény
Mérjünk ki 68,25 gramm dehidrált közeget és oldjuk fel egy liter desztillált vízben. Hagyja állni 5 percig. A teljes feloldódáshoz forraljon hőforrást, gyakran keverve, és forralja 1-2 percig. Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig.
Az autokláv elhagyása után hagyja állni néhány percig, és forró formában eloszlatva steril Petri-csészékben.
Hagyja megszilárdulni és fordítsa meg a lemezeket, rendelje meg a lemeztálcákban és hűtse le felhasználásig. Használat előtt hagyja a lemezeket szobahőmérsékletre melegedni.
A tápközeg pH-jának 6,4 ± 0,2 kell lennie. Egyes kereskedelmi házak pH-ja 5,5 és 5,9 között van.
A dehidratált közeg bézs színű, sötét borostyánszínű.
Mind a dehidrált közeget, mind az elkészített lemezeket 2-8 ° C-on kell tárolni.
Alkalmazások
Az MRS agarlemezek felülettel is vethetők (kimerültség vagy Drigalski spatula). Mélységben is vethető. A lemezeket 37 ° C-on, mikroaerofilitásban (4% O 2 és 5-10% CO 2) kell inkubálni 24–72 órán keresztül.
A vetési módszert a kitűzött cél (szigetelés vagy számolás) szerint választják meg.
A kolóniák jellemzői
A Lactobacillus feltételezett kolóniái fehéres színűek, és nyálkahártyás vagy krémes megjelenésűek ezen a agaron. Ezt később azonosítani kell.
Tejsavbaktériumok izolálása
Ehhez felszíni vetést használnak. A vethető minták előző eljárást igényelnek.
Az anyatejminták esetében a zsírréteg eltávolítása érdekében ajánlott 1 ml mintát 14 000 fordulat / perc sebességgel 10 percig centrifugálni. 900 μl-t eldobunk, és a fennmaradó 100 μl-ben az üledéket szuszpendáljuk, és az MRS agar felületére öntjük, majd egyenletesen elosztjuk egy Drigalski-spatulával.
Székletminták esetén egy (1) gramm széklettel lemérjük és homogenizáljuk 9 ml 0,1% -os steril peptonvízben, ami 1/10 hígításnak felel meg. Ezután sorozatos hígításokat végzünk, amíg a végső hígítás 10–4.
Végül 100 μl 10–2, 10–3 és 10–4 hígításokat veszünk, és mindegyik hígítást MRS agarban oltjuk be, egyenletesen eloszlatva egy Drigalski spatulával.
Tejsavbaktériumok számítanak
Ebben az esetben a vetést mélységgel végezzük.
Az anyatejmintákhoz 1 ml-t veszünk, és egy steril kúpos műanyag csőbe helyezzük. Az MRS-agart hozzávetőlegesen 40 ° C hőmérsékleten adagoljuk 25 ml végtérfogatra, így homogén keveréket kapunk. Ezt követően steril Petri-csészékbe egyenletesen öntik és a polimerizációig állni hagyják.
A székletmintákhoz a korábban leírtak szerint hígításokat kell végezni. Vegyünk 1 ml-t minden hígításból és tegyük steril kúpos műanyag csövekbe. Az olvadt MRS agart hozzáadjuk 25 ml térfogathoz.
Az egyes hígítások keverékét egyenletesen öntsük steril Petri-csészékbe. Végül a polimerizációig nyugodni hagyjuk.

A kolóniák száma a Man Rogosa és a Sharpe (MRS) agaron történik. Forrás: A cikkhez adományozott fénykép. Szerzők: E Báez, González G, Hernández G, López E, Mega M. A kutatás során készített fénykép: Tejsavbaktériumok és probiotikus potenciállal rendelkező bifidobaktériumok értékelése az anyatejben és a csecsemő székletében.
Kutatási szint
A tejsavbaktériumok vizsgálata minden nap egyre nagyobb érdeklődést mutat; A kutatók különösen az új törzsekkel és azok potenciális potenciáljával kívánnak megismerkedni a tejtermékek gyártása során alkalmazott standardizálási kiindulási fermentek között, többek között a felhasználás terén.
Ebben az értelemben Alvarado et al. (2007) az MRS agart használta egy olyan vizsgálat elvégzéséhez, amelyben elkülönítették, azonosították és jellemezték a venezuelai andoki kézműves füstölt sajt tejsavbaktériumait.
A sajtban megtalálták a Lactococcus és Lactobacillus nemzetségbe tartozó baktériumok jelenlétét, és arra a következtetésre jutottak, hogy az izolált törzsek keverékei kezdő törzsekként alkalmasak pasztőrözött tejből származó sajtok előállítására.
Másrészt Sánchez et al. (2017) az MRS agar segítségével vizsgálta a tejsavbaktériumok jelenlétét a malacok emésztőrendszerében annak érdekében, hogy natív probiotikumokként használják őket, amelyek növelik az egészséges malacok termelékenységét.
Ezzel a táptalajjal sikerült négy fajt elkülöníteni: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae és Pediococcus pentosaceus.
Hasonlóképpen, Báez et al. (2019) az MRS agart használta a tejsavbaktériumok (LAB) és a probiotikus potenciállal bifidobaktériumok értékelésére az anyatejben és a csecsemő székletében.
Sikerült 11 BAL és 3 Bifidobacteria sp-t izolálni az anyatejben, 8 BAL és 2 Bifidobacteria sp-t. székletben. Mindegyik eleget tett bizonyos paramétereknek, amelyek bizonyítják őket probiotikus aktivitású baktériumként.
A szerzők arra a következtetésre jutottak, hogy mind az anyatej, mind a kizárólag szoptatott csecsemők ürülékei probiotikus baktériumok természetes forrásai.
QA
Az MRS agar minőségének értékelése céljából olyan kontroll törzsek, mint:
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli.
A várt eredmények kielégítő növekedést mutatnak az első 6 baktérium esetében, míg az E. colit és a Bacillus cereus-t teljesen gátolni kell.
Irodalom
- Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Venezuelai füstölt Andok kézműves sajt tejsavbaktériumainak izolálása, azonosítása és jellemzése. Használata kezdő kultúrának. Elegendő. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Elérhető a scielo.org oldalon.
- Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Tejsavbaktériumok izolálása a malac emésztőtraktusából. Rev. állatorvos. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Elérhető a scielo.org oldalon.
- Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Probiotikus potenciállal rendelkező tejsavbaktériumok és bifidobaktériumok értékelése az Acevedo település, Miranda anyatejében és csecsemők ürülékében, 2017 bioanalízishez. Carabobo Egyetem, Venezuela.
- Britannia laboratórium. MRS agar. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
- Wikipedia közreműködői. MRS agar. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. január 10., 19:44 UTC. Elérhető a következő helyen: wikipedia.org, elérve 2019. február 17-én.
- Roy D. Táptalajok a bifidobaktériumok izolálására és felsorolására. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.
