AGAR ÚR: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

Az MRS agar szelektív szilárd táptalajtenyészet, amelyet tejsavbaktériumok, különösen a Lactobacillus nemzetség izolálására és felsorolására használnak. Ezt az agart 1960-ban Man, Rogosa és Sharpe készítette, azonos névvel, de bonyolultsága miatt gyakran használják az MRS rövidítést.

Ez proteóz-peptonból, húskivonatból, élesztő-kivonatból, glükózból, szorbitán-monoleátból, dikálium-foszfátból, nátrium-acetátból, ammónium-citrátból, magnézium-szulfátból, mangánszulfátból és agarból áll.

Man Rogosa és Sharpe Agar (MRS) a Lactobacillus sp. Forrás: A cikkhez adományozott fotó: a szerzők: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. A vizsgálat során készített fénykép: Tejsavbaktériumok és probiotikus potenciállal bifidobaktériumok értékelése az anyatejben és a csecsemő székletében.

Ez a kompozíció lehetővé teszi a tejsavbaktériumok megfelelő fejlődését klinikai mintákból, például székletből, hüvelyi ürítésből, orális mintákból és anyatejből, valamint tej- és húsételekből.

Klinikai laboratóriumokban nem használják rutinszerűen, mivel a tejsavbaktériumok ritkán vesznek részt a betegségben. Az élelmiszer-mikrobiológia területén azonban az MRS agar gyakoribb.

Másrészt ezt a tápközeget olyan kutatóközpontok használják, amelyek célja a tejsavbaktériumok tanulmányozása.

bázis

Az ember, a Rogosa és a Sharpe agar meglehetősen összetett összetételű. Az egyes alkotóelemek funkcióinak lebontásával magyarázható az alapja.

A proteózpepton, a húskivonat, az élesztõkivonat és a glükóz tápanyagok, amelyek biztosítják a baktériumok növekedéséhez szükséges szén, nitrogén, vitaminok és ásványi anyagok forrását. Ezenkívül a glükóz az egyetemes energiaforrás, amelyet a legtöbb táptalajban használnak.

Másrészt a tejsavbaktériumok szaporodásának elősegítése érdekében szükséges a Lactobacillus és a rokon baktériumok metabolizmusában alapvető kofaktorok (kationok) jelenléte; Ezek a vegyületek a nátrium-, magnézium- és mangán-sók.

Hasonlóképpen, a szorbitán-monoleát vagy a poliszorbát 80 fontos zsírsavforrás, mivel tápanyagként felszívódnak.

Ezenkívül a szorbitán-monoleát és az ammónium-citrát úgy hat, hogy gátolja a kísérő növény, különösen a Gram-negatív baktériumok fejlődését, biztosítva ennek az agarnak a szelektív jellegét.

Végül az agar-agar biztosítja a közeg szilárd állagát.

A Man Rogosa Sharpe agarnak más változatai is vannak; az egyiket cisztein (MRSc) egészíti ki, amely nagyon hasznos a bifidobaktériumok izolálására, többek között a mikroorganizmusok között. Másrészt létezik az MRS táptalaj, kiegészítve neomicinnel, paromomicinnel, nalidixinsavval és lítium-kloriddal, amelyek speciálisak a bifidobaktériumok szelektív számlálására a tejtermékekben.

Készítmény

Mérjünk ki 68,25 gramm dehidrált közeget és oldjuk fel egy liter desztillált vízben. Hagyja állni 5 percig. A teljes feloldódáshoz forraljon hőforrást, gyakran keverve, és forralja 1-2 percig. Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig.

Az autokláv elhagyása után hagyja állni néhány percig, és forró formában eloszlatva steril Petri-csészékben.

Hagyja megszilárdulni és fordítsa meg a lemezeket, rendelje meg a lemeztálcákban és hűtse le felhasználásig. Használat előtt hagyja a lemezeket szobahőmérsékletre melegedni.

A tápközeg pH-jának 6,4 ± 0,2 kell lennie. Egyes kereskedelmi házak pH-ja 5,5 és 5,9 között van.

A dehidratált közeg bézs színű, sötét borostyánszínű.

Mind a dehidrált közeget, mind az elkészített lemezeket 2-8 ° C-on kell tárolni.

Alkalmazások

Az MRS agarlemezek felülettel is vethetők (kimerültség vagy Drigalski spatula). Mélységben is vethető. A lemezeket 37 ° C-on, mikroaerofilitásban (4% O ₂ és 5-10% CO ₂) kell inkubálni 24–72 órán keresztül.

A vetési módszert a kitűzött cél (szigetelés vagy számolás) szerint választják meg.

A kolóniák jellemzői

A Lactobacillus feltételezett kolóniái fehéres színűek, és nyálkahártyás vagy krémes megjelenésűek ezen a agaron. Ezt később azonosítani kell.

Tejsavbaktériumok izolálása

Ehhez felszíni vetést használnak. A vethető minták előző eljárást igényelnek.

Az anyatejminták esetében a zsírréteg eltávolítása érdekében ajánlott 1 ml mintát 14 000 fordulat / perc sebességgel 10 percig centrifugálni. 900 μl-t eldobunk, és a fennmaradó 100 μl-ben az üledéket szuszpendáljuk, és az MRS agar felületére öntjük, majd egyenletesen elosztjuk egy Drigalski-spatulával.

Székletminták esetén egy (1) gramm széklettel lemérjük és homogenizáljuk 9 ml 0,1% -os steril peptonvízben, ami 1/10 hígításnak felel meg. Ezután sorozatos hígításokat végzünk, amíg a végső hígítás ^10–4.

Végül 100 μl ^10–2, ^10–3 és ^10–4 hígításokat veszünk, és mindegyik hígítást MRS agarban oltjuk be, egyenletesen eloszlatva egy Drigalski spatulával.

Tejsavbaktériumok számítanak

Ebben az esetben a vetést mélységgel végezzük.

Az anyatejmintákhoz 1 ml-t veszünk, és egy steril kúpos műanyag csőbe helyezzük. Az MRS-agart hozzávetőlegesen 40 ° C hőmérsékleten adagoljuk 25 ml végtérfogatra, így homogén keveréket kapunk. Ezt követően steril Petri-csészékbe egyenletesen öntik és a polimerizációig állni hagyják.

A székletmintákhoz a korábban leírtak szerint hígításokat kell végezni. Vegyünk 1 ml-t minden hígításból és tegyük steril kúpos műanyag csövekbe. Az olvadt MRS agart hozzáadjuk 25 ml térfogathoz.

Az egyes hígítások keverékét egyenletesen öntsük steril Petri-csészékbe. Végül a polimerizációig nyugodni hagyjuk.

A kolóniák száma a Man Rogosa és a Sharpe (MRS) agaron történik. Forrás: A cikkhez adományozott fénykép. Szerzők: E Báez, González G, Hernández G, López E, Mega M. A kutatás során készített fénykép: Tejsavbaktériumok és probiotikus potenciállal rendelkező bifidobaktériumok értékelése az anyatejben és a csecsemő székletében.

Kutatási szint

A tejsavbaktériumok vizsgálata minden nap egyre nagyobb érdeklődést mutat; A kutatók különösen az új törzsekkel és azok potenciális potenciáljával kívánnak megismerkedni a tejtermékek gyártása során alkalmazott standardizálási kiindulási fermentek között, többek között a felhasználás terén.

Ebben az értelemben Alvarado et al. (2007) az MRS agart használta egy olyan vizsgálat elvégzéséhez, amelyben elkülönítették, azonosították és jellemezték a venezuelai andoki kézműves füstölt sajt tejsavbaktériumait.

A sajtban megtalálták a Lactococcus és Lactobacillus nemzetségbe tartozó baktériumok jelenlétét, és arra a következtetésre jutottak, hogy az izolált törzsek keverékei kezdő törzsekként alkalmasak pasztőrözött tejből származó sajtok előállítására.

Másrészt Sánchez et al. (2017) az MRS agar segítségével vizsgálta a tejsavbaktériumok jelenlétét a malacok emésztőrendszerében annak érdekében, hogy natív probiotikumokként használják őket, amelyek növelik az egészséges malacok termelékenységét.

Ezzel a táptalajjal sikerült négy fajt elkülöníteni: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae és Pediococcus pentosaceus.

Hasonlóképpen, Báez et al. (2019) az MRS agart használta a tejsavbaktériumok (LAB) és a probiotikus potenciállal bifidobaktériumok értékelésére az anyatejben és a csecsemő székletében.

Sikerült 11 BAL és 3 Bifidobacteria sp-t izolálni az anyatejben, 8 BAL és 2 Bifidobacteria sp-t. székletben. Mindegyik eleget tett bizonyos paramétereknek, amelyek bizonyítják őket probiotikus aktivitású baktériumként.

A szerzők arra a következtetésre jutottak, hogy mind az anyatej, mind a kizárólag szoptatott csecsemők ürülékei probiotikus baktériumok természetes forrásai.

QA

Az MRS agar minőségének értékelése céljából olyan kontroll törzsek, mint:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli.

A várt eredmények kielégítő növekedést mutatnak az első 6 baktérium esetében, míg az E. colit és a Bacillus cereus-t teljesen gátolni kell.

Irodalom

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Venezuelai füstölt Andok kézműves sajt tejsavbaktériumainak izolálása, azonosítása és jellemzése. Használata kezdő kultúrának. Elegendő. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Elérhető a scielo.org oldalon.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Tejsavbaktériumok izolálása a malac emésztőtraktusából. Rev. állatorvos. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Elérhető a scielo.org oldalon.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Probiotikus potenciállal rendelkező tejsavbaktériumok és bifidobaktériumok értékelése az Acevedo település, Miranda anyatejében és csecsemők ürülékében, 2017 bioanalízishez. Carabobo Egyetem, Venezuela.
4. Britannia laboratórium. MRS agar. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
5. Wikipedia közreműködői. MRS agar. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. január 10., 19:44 UTC. Elérhető a következő helyen: wikipedia.org, elérve 2019. február 17-én.
6. Roy D. Táptalajok a bifidobaktériumok izolálására és felsorolására. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.