BURGONYA-DEXTRÓZ AGAR: INDOKLÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁS - BIOLÓGIA - 2026

A burgonya-dextróz agar közepes, szilárd, nem szelektív tápanyagtenyészet. Bakteriális és gombás fajok nőhetnek benne, de felhasználása különösen a rostos gombák és élesztők izolálására javasolt. PDA táptalajként is ismert, a Potato Dextrose Agar angol kifejezésnél.

Különösen hasznos a fitopatogén gombák, azaz a növényeket érintő gombák izolálására. A fertőzött zöldségekből származó minták vetésére más módszereket is alkalmazhatunk, például Sabouraud agart vagy málta-agart, azonban rutinszerű alkalmazás esetén a burgonya-dextróz agar előnyösebb a nagyobb sporuláció elérése érdekében.

Aspergillus niger és Sinemas burgonya-dextróz agaron. Forrás: Alextrevelian 006 az angol Wikipedia-ban / Joselrojas

A gombás kolóniák számlálására használják kozmetikumok, gyógyszeripari termékek és egyes tejtermékek mintáin is. Hasonlóképpen alkalmas bőrplasztika mintáinak vetésére dermatofiták keresése céljából, amelyek ebben a közegben nagyon jól növekednek, és kifejlesztik jellegzetes pigmentjeiket.

A burgonya-dextróz táptalaj nagyon egyszerű és könnyű táptalaj a laboratóriumban. Mint a neve is mutatja, burgonya, dextróz és agar-agar infúziót tartalmaz. Ezenkívül gátló anyagokat is adhatunk a baktériumok szaporodásának megakadályozására és a gombás fajok szelektivitásának fokozására.

bázis

A burgonya-dextróz-agar olyan táptalaj, amely biztosítja a rostos gombák és élesztők fejlődéséhez szükséges tápanyagokat.

A burgonya és a glükóz infúzió kombinációja biztosítja a tökéletes energiaforrást a gombák kielégítő növekedéséhez. Míg az agar biztosítja a közeg konzisztenciáját.

A táptalaj önmagában nem gátolja a baktériumok növekedését, ezért nem szelektív táptalaj. A szelektívvá tételéhez gátló anyagok, például borkősav vagy antibiotikumok hozzáadásához van szükség.

Készítmény

-Burgonya dextróz agar házi készítése (nem kereskedelmi)

Petri csészék

A következőképpen készül:

Mindenekelőtt a burgonyát nagyon jól mossuk, eltávolítva a rendelkezésükre álló talajt. Mindent és a héjat vékony szeletekre vágják. 200 g burgonyát lemérünk és liter desztillált vízben fél órán át forralunk.

Az idő végén szűrje le vagy szűrje le az egész készítményt egy sajtkendőn keresztül.

A kapott folyadékot desztillált vízzel kiegészítjük egy literig. 20 g agar-agart és 20 g dextrózt adunk az infúzióhoz, alaposan összekeverjük és autoklávozzuk 121 ° C-on, 15 kiló nyomáson 15 percig.

Hagyjuk lehűlni 50 ° C-ra, és tálaljuk steril Petri-csészékben. Az elkészített lemezeket hűtőszekrényben tárolják.

ékek

Burgonya-dextróz agar ékek is elkészíthetők.

Ebben az esetben az autoklávban történő sterilizálás elõtt 12–15 ml tápközeget csövekbe helyezzük, késõbb autoklávozzuk és hagyjuk speciális támaszokon fekve, amíg megszilárdul. Hűtőszekrényben tárolandó.

A tápközeg pH-ja 5,6 ± 0,2 marad, azonban egyes laboratóriumok 10% borkősavat adnak hozzá, hogy a pH-t 3,1 ± 0,1 értékre csökkentsék a baktériumok szaporodásának gátlására.

Ugyanebben az értelemben más laboratóriumok inkább antibiotikumokat adnak hozzá, hogy szelektívvá tegyék a gombák tenyésztését és megakadályozzák a baktériumok szaporodását.

-Burgonya dextróz agar kereskedelmi forgalomba hozatali előkészítése

Mérjünk be 39 g a kereskedelemben kapható dehidratált közeget és oldjuk fel egy liter desztillált vízben. Hagyja pihenni 5 percig.

Az elegyet gyakran keverés közben melegítjük, amíg teljesen fel nem oldódik. Ezt követően autoklávban 121 ° C-on 15 percig sterilizálják.

Lemezek vagy ékek készíthetők. A fentiek szerint járjon el.

A pH értéke 5,6 ± 0,2. Ha 3,1 pH-érték kívánatos, 14 ml steril 20% -os borkősavat kell hozzáadni, mielőtt a tányérokra tálalnák.

A nyers táptalaj bézs, az elkészített táptalaj világos sárga, enyhén zavaros vagy opálos megjelenésű.

Alkalmazások

Növényminták vetési eljárása burgonya-dextróz agaron

-Festett levelekhez

A leveleket darabokra vágják.

Helyezzen egy 50 cm3-es 50% -os alkoholtartalmú pohárba a levelek darabjait (festett és egészséges darabok), hogy a felületet 20–30 másodpercig fertőtlenítsék. Dobja el az alkoholt, és adjon hozzá 20% nátrium-hipokloritot 40-50 másodpercre, ha vékony levelek, és növelje az időt 80 másodpercre, ha kéreg és rönk.

Dobja el a nátrium-hipokloritot, vegye le a fertőtlenített darabokat steril csipesszel és helyezze a közeg felületére (legfeljebb 10 darab). Állítsa be a dátumot és inkubálja 20-30 ° C-on.

- Gyümölcsök és gumók számára

Ha a gyümölcs húsos, nyissa ki a gomba által érintett gyümölcsöt, és vegye ki a darabokat steril szikével a beteg és az egészséges részből egyaránt, és helyezze az agar felületére.

Ha a gyümölcs citrusfélék, például citrom vagy narancs, akkor azt ki kell nyitni és magjait el kell vetni.

Ha a gyümölcs felületét befolyásolják és spórákat észlelnek, akkor az a legjobb, ha a tányéron reszeljük; Ez abból áll, hogy a spórákat megfertőzzük egy sterilizált és lehűtött “L” alakú spatulával, majd cikcakkot készítünk 2-3 alkalommal az agarra.

-Szemcsékre

A levelekben leírtak szerint fertőtlenítik, majd az agarra helyezik őket.

-Ágokra és szárakra

A kéreg lekaparódik, majd az egészséges és beteg részeket később vetik és közvetlenül az agarra vetik.

A beoltott lemezeket aerob módon inkubáljuk 20-30 ° C-on 72 órán át.

Eljárás bőr-, haj- vagy körömminták vetésére burgonya-dextróz agaron

A mintavételt a 11. számú szikével kell elvégezni, vagy az érintett haj, bőrhéj vagy köröm vágására dermatofiták keresése céljából. A minta vétele előtt a területet 70% alkohollal fertőtleníteni kell.

-Bőrminta

Héjas sérülések esetén a sérülés széleit le kell kaparni, mivel a gomba valószínűbb ott található.

Exudatív léziók esetén a mintát száraz vagy nedves tamponnal kell venni. Azonnal vegye be a burgonya-dextróz agarra vagy a Sabouraud agarra. Kerülje a szállítóeszközöket.

A mintavétel egy másik módszere Mariat és Adan Campos szőnyegszögletes technikája. Ebben az esetben az érintett területet ötször dörzsöljük egy darab steril gyapjúval a későbbi termesztéshez.

A mintát közvetlenül a tápközegbe lehet helyezni.

-Szőrminta

A patológiától függően az érintett rész levágható vagy gyökérzet felhagyható. Helyezze a mintát a tápközegbe.

-Körömminta

Az érintett köröm egy meghatározott része lekaparható vagy levágható. Ez a sérülés típusától függ.

A vetés előtt vágja le a mintát 1 mm-es darabokra, hogy növelje a gomba és a táptalaj érintkezésének valószínűségét.

Azonosítási eljárás

A tányéron kapott kolóniákat burgonya-dextróz agart tartalmazó csövekben izoláljuk, hogy elvégezzük a kolóniák makroszkopikus vizsgálatát (megjelenés, szín, állag, fejlettségi fok).

A mikroszkópos vizsgálat (a szerkezetek és formációik megfigyelése) mikrokultúrákkal vagy közvetlen megfigyeléssel végezhető a mikroszkóp alatt a tárgylemez és a tárgylemez között.

Telepek száma

Ez a táptalaj felhasználható a növényi, élelmezési, kozmetikai vagy gyógyszerminták gomba- és élesztőterhelésének meghatározására. Erre a célra antibiotikumokkal kiegészített burgonya-dextróz-agart használnak, mint például: (kloramfenikol, klór-tetraciklin vagy mindkettő).

Öntsünk 1 ml mintát - lehetőleg hígítva - egy steril és üres Petri-csészébe, majd öntjük meg a burgonya-dextróz agar-betétet, és hagyjuk lehűlni 45 ° C-ra. Öntsük a Petri-csészére és forgassuk el, amíg homogenizálódik. Hagyja pihenni, amíg megszilárdul.

Inkubáljuk aerob módon 20-25 ° C-on (penészgombák) vagy 30-32 ° C-on (élesztők) legalább 5-7 napig, a kívánt gomba típusától és a minta típusától függően. Két lemez használható az inkubáláshoz mindkét hőmérsékleti tartományban.

Gombatelepek számlálása egy élelmiszer-mintában. Burgonya-dextróz agar, antibiotikumokkal kiegészítve. Forrás: Pxhere.com fotó / 777267

Gomba törzsek fenntartása

A burgonya-dextróz-agar életképes gombás törzsek fenntartására használható évekig.

Ehhez a gomba burgonya-dextróz agar ékein termesztésre kerül, és miután a gomba megnőtt, ásványolajjal borítja. Az olajat autoklávban kell sterilizálni 45 percig, viszkozitása körülbelül 300-330 Saybolt. Az olajnak 1-2 cm-rel kell lennie a kúp csúcsa felett.

QA

Mindegyik előkészített tételből vegyen ki 1 vagy 2 lemezt, és inkubálja őket 48 órán keresztül 25 ° C-on vagy 96 órán át 20 ° C-on. A jó sterilitás-ellenőrzés az, amelyben a kolónia fejlődését nem figyelik meg.

Ismert vagy tanúsított kontroll törzsek is használhatók, mint például:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Minden esetben jó növekedés várható.

Irodalom

1. Britannia Laboratories. Glükóz agar burgonya. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
2. Neogen Laboratories. Burgonya-dextróz agar. Elérhető a következő címen: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab laboratórium. Burgonya dextróz agar. Elérhető a következő címen: insumolab.cl
4. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Általános mikológia. 1994. Venezuelai Központi Egyetem 2. kiadása, könyvtári kiadások. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. A szemhéjfesték mikrobiológiai minőségének értékelése, egy kompakt gyártmányú laboratóriumi kompakt por, a Pharmacopea Usp 2005. referencia módszer szerint. A tézis a gyógyszerész kémiai címet kapja. Guatemala San Carlos Egyetem.
7. Cuétara M. A felszíni minták feldolgozása. Iberoamerican Journal of Mycology. 2007-ben; pp. 1-12