SABOURAUD AGAR: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

A Sabouraud agar, más néven Sabouraud dextrose agar, szilárd táptalaj, különösen gazdag a gombák, például élesztők, penészgombák és dermatofiták izolálására és fejlődésére.

Ezért ennek a táptalajnak nem lehet hiánya egy olyan mikrobiológiai laboratóriumban, amely klinikai vagy nem klinikai mintákból kórokozó vagy opportunista gombák jelenlétének vizsgálatára szolgál. Hasonlóképpen, ideális a rostos baktériumok, például a Streptomyces és a Nocardias szaporodására is. Használata nagyon széles, mivel felhasználható emberi, állati, növényi és ipari mikológiában.

A. Nem szükséges Sabouraud agar. B. Sabouraud agar, élesztővel oltva. Forrás: Fotók a szerző MSc-ről. Marielsa gil

Ezt a tápközeget 1896-ban Raimond Sabouraud, a neves dermatológus hozta létre, aki világhírű szakember lett a fejbőr rendellenességeiben, főként dermatofiták által.

Létrehozása annyira fontos volt, hogy azóta használják, és ma is megmarad, bár néhány módosítással.

Annak ellenére, hogy a gombákra különösek, a baktériumok ezen a közegben szaporodhatnak, ezért a vegyes flórával rendelkező mintákhoz az esetleges baktériumflóra növekedésének megakadályozásához az antibiotikumokat be kell vonni az előállításukba.

Az antibiotikumot óvatosan kell megválasztani, figyelembe véve a visszanyerendő gomba típusát, mivel egyes anyagok bizonyos anyagok jelenlétében gátolhatók.

bázis

A Sabouraud dextróz agar olyan táptalaj, amely eredeti összetételében gyengén szelektív, savas pH-ja (5,6 ± 0,2) miatt, azonban baktériumok továbbra is kialakulhatnak, főleg hosszabb ideig tartó inkubációk során.

A tápközeg kazein-peptont és az állati szövetek hasnyálmirigy-emésztését tartalmazza, amelyek a szén és a nitrogén forrását biztosítják a mikroorganizmusok szaporodásához.

Magas koncentrációban tartalmaz glükózt, amely energiaforrásként szolgál, elősegítve a gombák baktériumokkal szembeni növekedését. Mindezt agar-agarral keverve, egy olyan összetevővel, amely biztosítja a megfelelő állandóságot.

Másrészt a Sabouraud dextróz agar szelektív lehet, ha antibiotikumokat adnak hozzá.

Antibiotikumokkal különösen akkor hasznos, ha sebekből, nyílt fekélyekből vagy olyan mintákból készülnek, amelyekben nagy a baktériumszennyezés gyanúja.

A Sabouraud dextróz agar és antibiotikumok leggyakrabban használt kombinációi

-Saburaud agar klóramfenikollal: ideális élesztők és fonalas gombák helyreállításához.

- Sabouraud agar gentamicinnel és kloramfenikollal: szinte az összes fonalas gombák és élesztő növekszik ebben a közegben, és számos baktériumot gátolja, beleértve az Enterobacteriaceae, Pseudomonas és Staphylococcusokat.

- Sabouraud agar cikloheximiddel: Különösen hasznos a bőrből vagy a légzőrendszerből származó minták esetében, feltéve, hogy a gyanú dimorf gombák.

A cikloheximidet óvatosan kell alkalmazni; Annak ellenére, hogy gátolja a mintában szennyezőanyagként jelen lévő nem patogén vagy környezeti gombák és élesztők növekedését, néhány gomba, például a Cryptococcus neoformans, az Aspergillus fumigatus, az Allescheria boydii, a Penicillium sp és más opportunista gombák növekedését is gátolja.

- Sabouraud agar kloramfenikollal és cikloheximiddel: elsősorban dermatofiták és dimorf gombák izolálására használják. Ennek hátránya, hogy gátolja az opportunista gombák egyes fajait, például a Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes vagy C. neoformans.

- Sabouraud agar klóramfenikollal, streptomicinnel, penicillin G-vel és cikloheximiddel: ideális baktériumokkal és szaprofit gombákkal szennyezett mintákhoz, azonban annak hátránya, hogy a fentebb említett opportunista gombák mellett gátolja az Actinomyces és a Nocardias növekedését is.

Készítmény

Ha külön van az összetevők, akkor az alábbiak szerint elkészíthető:

Sabouraud dextróz agar

Mérni:

- 40 gr dextróz

- 10 g pepton

- 15 gr agar-agar

- Mérjünk be 1000 ml desztillált vizet

Az összes összetevőt összekeverjük, a pH-t 5,6-ra állítjuk. Az oldott anyagot forrásban oldjuk, 20 ml tápközeget elosztunk 25 x 150 mm-es csövekben, perem nélkül, lehetőleg pamutkupakkal.

Csövek pamut kupakkal. Forrás: A fotó készítette MSc. Marielsa gil

Más csőméretek is használhatók, a rendelkezésre állástól függően.

Az autoklávokat 10 percig nyomás alatt (121 ° C) végezzük. Az autoklávozási időt nem szabad túllépni. Az autokláv elhagyásakor a csöveket egy tartó segítségével döntjük meg, amíg szilárdulnak egy fuvolán.

Egy másik módszer az összetevők feloldása melegítés közben, amíg felforr. Autoklávozzon 10 percig ugyanabban az üvegben, majd ossza el 20 ml-t Petri-csészékbe.

Ha van egy Sabouraud dextrose agar tápközeg, amely már tartalmazza az összes összetevőt, akkor mérje meg a kereskedelmi társaság által megadott mennyiséget egy liter vízre. A többi lépés megegyezik a fentiekkel.

Sabouraud dextrose agar (Emmon módosítása)

Mérni:

- 20 gr dextróz

- 10 g pepton

- 17 gr agar-agar

- Mérjünk be 1000 ml desztillált vizet

Az összes összetevőt összekeverjük, a pH-t 6,9-re állítjuk. Az előző esethez hasonlóan járjon el.

Vannak olyan kereskedelmi házak, amelyek a közeget minden összetevővel kínálják. Ebben az esetben mérjük meg és készítsük el az adagolón leírtak szerint.

Sabouraud dextróz agar (Emmon módosítása) klóramfenikollal

Kloramfenikol törzsoldat

- Mérjünk be 500 mg klóramfenikolbázist

- Mérjünk be 100 ml 95% -os etanolt

- Keverd össze

Sabouraud dextróz agar tápközeget (Emmons) készítünk az előzőekben leírtak szerint, és az autoklávozás előtt minden tápközeg literére adjunk hozzá 10 ml klóramfenikol törzsoldatot.

Sabouraud Emmons Dextrose Agar cikloheximiddel

Cikloheximid törzsoldat

- Mérjünk be 5 gr cikloheximidot

- Mérjünk be 100 ml acetont

- Keverd össze

Sabouraud dextróz agar tápközeget (Emmons) készítünk a már leírtak szerint, és az autoklávozás előtt minden tápközeg literére adjunk hozzá 10 ml cikloheximid törzsoldatot.

Sabouraud dextróz agar (Emmon) klóramfenikollal és cikloheximiddel

Sabouraud dextróz agar tápközeget (Emmons) készítünk a már leírtak szerint, és az autoklávozás előtt minden tápközeg literére adjunk hozzá 10 ml kloramfenikol törzsoldatot és 10 ml cikloheximid törzs oldatot.

Egyéb hozzáadható antibiotikumok

Liter közegben 20 000–60 000 egység penicillin.

30 mg sztreptomicin liter közegben.

Mindkét oldatot be kell építeni a táptalaj autoklávozása és enyhén lehűtött (50-55 ° C) hőmérséklete után.

0,04 g neomicin liter közegben.

0,04 g gentamicin liter közegben.

Különleges megfontolások

A biztonság kedvéért inkább a Sabouraud dextróz agart ék alakú csövekbe (fuvolán csőrrel ferde), mint Petri-csészékbe vetjük, hogy elkerüljük a spórák szétszóródását és belélegzését.

Fontos, hogy a Sabouraud agarcsöveket gyapottal, és nem csavaros kupakkal fedjük le, mivel a fél-anaerob körülményekről kimutatták, hogy gátolják a spóraképződést egyes törzsekben, például a Coccidioides immitis esetében. Ezenkívül a legtöbb gomba aerob.

Csavaros kupak használata esetén ne zárja le légmentesen.

QA

Az elkészített adathordozót minőség-ellenőrzésnek kell alávetni annak megfelelő működésének ellenőrzése céljából. Ehhez bizonyos kontroll törzseket vetnek be.

Kloramfenikollal végzett Sabouraud dextróz-agar készítéséhez Candida albicans ATCC törzseit lehet használni, amelyeknek kiváló növekedéssel kell rendelkezniük. Egy másik lemezt Escherichia coli törzsekkel oltunk be, amelyeket teljes mértékben gátolni kell.

Egy nem inokulált lemezt inkubálnak, amelyben semmilyen mikroorganizmus nem szaporodhat.

A Trichophyton mentagrophytes törzsek felhasználhatók Sabouraud dextrose agarhoz kloramfenikollal és cikloheximiddel, és jól fejlődniük kell. Egy másik lemezt oltunk egy Aspergillus flavus törzsrel, amelyben csak csekély növekedésnek kell lennie. Ezenkívül egy nem inokulált lemezt inkubálunk annak sterilitásának igazolására.

A cikloheximiddel végzett Sabouraud dextróz agarhoz Candida albicans, Trichophyton rubrum vagy Microsporum canis törzseket használnak, amelyeknek jó növekedést kell mutatniuk.

Hasonlóképpen, egy Aspergillus flavus törzs van benne, amely csak csekély növekedést mutat vagy nem mutat növekedést. Végül inkubáljon egy nem oltott lemezt a sterilitás ellenőrzése érdekében.

Alkalmazások

Elsődleges kultúra

A klasszikus Sabouraud dextróz-agar 4 gramm dextrózt tartalmaz, és kiváló elsődleges izoláló közegként, mivel megmutatja az egyes gombák jellegzetes morfológiáját.

Kiválóan alkalmas a pigmenttermelés demonstrálására. Ez azonban nem a legjobb módszer a spórulás megfigyelésére.

Ezenkívül nem javasolt a Blastomyces dermatitidis tenyésztése, amelyet a jelenlévő magas glükózkoncentráció gátol.

Másrészt a termesztés során bizonyos szempontokat figyelembe kell venni.

Egyes gombák - például a penészgombák - szobahőmérsékleten növekednek a legjobban, mások - például egyes élesztők - 37 ° C-on sikeresen növekednek, mások pedig mindkét hőmérsékleten növekedhetnek (dimorf gombák).

Ezért néha ugyanahhoz a mintához több Sabouraud agarlemezt kell használni, mivel gyakran duplikált vetést végeznek az egyik lemez szobahőmérsékleten, a másik 37 ° C-on történő inkubálására.

A Sporothrix schenckii például két tányérra van vetve; az egyiket szobahőmérsékleten inkubáljuk, hogy megkapjuk a penészfázist, a másikot 37 ° C-on inkubáljuk, hogy megkapjuk az élesztőfázist, de az utóbbiban a vér 5% -át kell hozzáadni a tápközeghez.

Más esetekben, mint például a mycetoma minták, két Sabouraud agarlemezt vetünk be, az egyiket kloramfenikollal, a másikat cikloheximiddel végezzük. Az első lehetővé teszi a gombás eredetű mycetoma kórokozók (Eumycetoma), a második bakteriális eredetű mycetoma, például aktinomycetómák szaporodását.

sporulázást

Az Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agar 2 gramm dextrózt tartalmaz, és nemcsak izolálásra, hanem gombák sporulációjára és tartósítására is felhasználják.

Ebben a táptalajban a Blastomyces dermatitidis törzsek kinyerhetők.

Megőrzés

A gombatenyészet megőrzése érdekében hűtőszekrényben (2-8 ° C) tárolhatók. A tartósítási idő 2 és 8 hét között változhat. Ezen idő elteltével szubkultúrába kell őket helyezni, hogy megismételjék a folyamatot.

Egyes gombák szobahőmérsékleten tartják a legjobb hőmérsékletet, például az Epidermophyton foccosum, a Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum és a Microsporum audounii.

A törzs fenntartása meghosszabbítható a pleomorfizmus elkerülése érdekében, ha a dextrózt teljesen eltávolítják az agarból, és ha a táptalaj mennyiségét csökkentik a szárazság elkerülése érdekében.

mikrokultúrákhoz

Egyes fonalas gombák azonosításához Sabouraud agar vagy más speciális módszer alkalmazásával mikrokultúrákat kell végezni a szexuális és azszexuális szaporodás szerkezetének megfigyelésére.

Az emberi mikológiában

Elsősorban gombás betegségek diagnosztizálására használják, különösen azokat, amelyek befolyásolják a bőrt és annak kapcsolódásait (haj és köröm).

A minták lehetnek szekréciók, váladékok, bőr, haj, köröm, köpet, CSF vagy vizelet. Az általánosan elkülönített kórokozók a dermatofiták, gombák, amelyek szubkután és szisztémás mycosisokat okoznak.

Állati mikológia

Az állatokat gyakran gombás fertőzések sújtják, ezért a Sabouraud agar ugyanolyan hasznos az állatok mikológiájában, mint az emberek.

Például a dermatofiták gyakran befolyásolhatják az állatokat. Ilyen helyzet van a Microsporum canis var moonum esetében, amely gyakran fertőzi a kutyákat, macskákat, lókat, sertéseket és majmokat. Hasonlóképpen, a Microsporum gypseum kutyákat, macskákat és állatokat is megfertőz.

A madarakat, például a csirkéket, a kakasokat és a csirkéket a Microsporum gallinae befolyásolja.

Más gombák, például a Zymonema farciminosum, az állatok, elsősorban a lovak, öszvérek és szamarak betegségének okai is, és jelentős gyulladást okoznak a nyirokokban.

A Sporothrix schenkii és a Histoplasma capsulatum háziállatokat és embereket érint.

Környezeti mikológia

Számos kórokozó vagy opportunista gomba bármikor koncentrálhat egy adott környezetben, különösen a klinikák és kórházak műtőszobáiban és intenzív ellátó egységeiben. Ezért ellenőrizni kell őket.

Egyéb veszélyeztetett terek a könyvtárak és a régi épületek, amelyeket a környezeti gombák koncentrációja befolyásolhat.

A környezeti vizsgálatok során a Sabouraud dextrose agart használják a gombák izolálására.

Ipari mikológia

A Sabouraud dextróz-agar nem hiányozhat többek között a kozmetikumok, ételek, italok, bőr, textil előállítása során a szennyező gombák vizsgálatában.

Növényi mikológia

A növényeket gombák által okozott betegségek is szenvedik, amelyek a növény különféle részeit érintik, amelyek akár a betakarítást is befejezhetik, és a mezőgazdaságban nagy veszteségeket okozhatnak.

Irodalom

1. Cuenca M., I. Gadea, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). A mycosis mikrobiológiai diagnosztikája és gombaellenes érzékenységi vizsgálatok. A Spanyol Fertőző Betegségek és Klinikai Mikrobiológiai Társaság ajánlásai. Elérhető a következő címen: coesant-seimc.org
2. ValteK laboratórium. (2009). Sabouraud dextróz agar cikloheximiddel. Elérhető az andinamedica.com oldalon.
3. Navarro O. (2013). Állatorvosi mikológia. Nemzeti Agrári Egyetem. Nicaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiológiai diagnosztika. 12 ed. Argentína. Szerkesztő Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Általános mikológia. 1994. Venezuelai Központi Egyetem 2. kiadása, könyvtári kiadások. Venezuela Caracas.