A mannitol-agar vagy manitósó szilárd tápközeg, szelektív és differenciáltenyészet. Chapman készítette a patogén grampozitív coccik, különösen a Staphylococcus aureus izolálására.
Ugyanakkor hasznos a Staphylococus epidermidis, amely esetenként opportunista patogénként is jelen lehet, és a Staphylococcus saprophyticus, elismert húgyúti patogén, más fajok között.
A. Fiola készített sós mannit agar tápközeggel. B. Sós mannit-agarlemezek, erjesztõ és nem erjesztõ mannit-baktérium törzsekkel oltva. Forrás: A és B: A fotókat a szerző készítette MSc. Marielsa Gil.
Néhány Enterococcus képes növekedni ezen a táptalajon, valamint bizonyos grampozitív spóraképző rudak.
Ez a közeg nagyon hasznos a klinikai minták elemzésében, de felhasználható az élelmiszerek mikrobiológiai vizsgálatában és az ipari termékek, például kozmetikumok, gyógyszerek, minőség-ellenőrzésében is.
A sós mannitol-agar marhahús, triptein, mannit, nátrium-klorid, fenolvörös és agar kivonatokból és peptonokból áll.
bázis
A mannit-agar szelektív, magas sókoncentrációjának köszönhetően. A só gátló anyagként működik, és megakadályozza a gram-negatív baktériumok szaporodását.
Ez szintén differenciált a szénhidrát mannit és a fenolvörös pH-mutató jelenléte miatt. Ebből a mannit fermentálására képes baktériumok savakat termelnek, megsavanyítva a tápközeget, a kolóniákat és a közeget sárgássá változtatva.
Másfelől azok a kolóniák, amelyek nem fermentálják a mannitot, növekednek a tápközegben, figyelembe véve a hús és triptein kivonatok és peptonok által biztosított tápanyagokat. Innen a baktériumok kivonják a növekedésükhöz szükséges szént, nitrogént, vitaminokat és ásványi anyagokat.
A telepek ebben az esetben lehetnek gyenge vagy erős rózsaszínűek, és a táptalaj változatlan színű, vagy fuksziává változik.
Az agar az az anyag, amely biztosítja a közeg állandóságát.
Készítmény
Egy liter sós mannit-agar előállításához 111 g előnyös kereskedelmi társaság dehidratált tápközegét lemérjük és 1000 ml desztillált vízben oldjuk egy lombik segítségével.
Melegítjük a tápközeg gyakori keverésével az oldódási folyamat javítása érdekében. Forraljuk egy percig.
A lombikot autoklávba helyezzük 121 ° C-on 15 percre.
Az idő végén vegye ki az injekciós üveget az autoklávból, hagyja pihenni, és 15-20 ml között szolgáljon fel steril Petri-csészékben, amikor a hőmérséklet körülbelül 50-55 ° C.
Megengedhető, hogy megszilárduljon, fordított módon elrendezve a plakkókban, és felhasználásig hűtőszekrényben tartva. A minta vetése előtt várja meg, amíg a lemez szobahőmérsékletű lesz.
A tányérokat szétszórással vagy felülettel vetjük be drigalski spatulával. Az elkészített közeg végső pH-jának 7,4 ± 0,2-nek kell lennie
A dehidrált táptalaj színe világos bézs, az elkészített táptalaj narancsvörös.
Alkalmazások
Magas szelektivitása miatt ez a táptalaj ideális vegyes növényi minták vetésére, amelyekben a Staphylococus aureus, mint e nemzetség fő kórokozójának jelenlétét kívánják megtenni.
Ebben az értelemben az egyik leggyakoribb felhasználása a garat váladékának és az orrkibocsátás mintáinak mikrobiológiai elemzése, különösen az aszimptomatikus S. aureus hordozók kimutatására.
Néhány ország ezt az elemzést kötelező követelményként hajtotta végre azok számára, akik élelmiszer-értékesítőként kívánnak dolgozni.
Ez az ellenőrzés megakadályozza a S. aureus hordozóinak szerződését, elkerülve ezzel a súlyos ételmérgezést a sztafilokokkusz enterotoxinnal szennyezett élelmiszerek fogyasztása miatt.
Beilleszthető többek között a sebfertőzések, a vértenyészetek, a CSF, a bronhoalveoláris mosás vetésébe.
A sózott mannit-agar hasznos a kolóniák izolálására a vizelettenyészetekből CLED agarból vagy vér-agarból, amelyeknek a grammja gramm pozitív cocci klasztereket mutatott ki.
Ez érvényes az élelmiszerek, az ivóvíz, a talajok mikrobiológiai elemzésére is, többek között az alkalmazásokra.
QA
Miután elkészítettük a sós mannit-agar agarlemezeket, tanácsos minőség-ellenőrzést végezni. A kontroll törzseket bevetettük, hogy megmutatjuk, van-e növekedés vagy sem.
Az ismert Staphylococcus aureus törzsek felhasználhatók pozitív kontrollként. Megfelelően növekednie kell, fejlődik a sárga kolóniák, és a táptalaj szintén azonos színű.
Hasonlóképpen, kényelmes a Staphylococcus epidermidis ismert törzsét beilleszteni. Megfelelően nőnek, fejlődő rózsaszínű kolóniák, és a táptalaj változatlan színű vagy erősebb rózsaszínűre sötétedik.
Negatív kontrollként olyan törzseket használunk, amelyek nem növekedhetnek ezen a táptalajon. Például ismert Escherichia coli vagy Klebsiella pneumoniae törzs tenyészthető. A várt eredmény a teljes gátlás, azaz nem növekedés.
Ezenkívül egy nem inokulált lemezt inkubálni kell. Ebben nem szabad növekedni vagy színváltozni.
Fontos, hogy a lemezt ne használják, ha többek között romlás jelei vannak, például szennyeződés, kiszáradás, elszíneződés.
Végső gondolatok
Sós mannit-agar táptalaj használatakor figyelembe kell venni néhány fontos szempontot:
- Sárga kolóniák növekedésének megszerzése nem jelenti azt, hogy Staphylococcus aureus lenne. Emlékeztetni kell arra, hogy az Enterococcus egyes törzsei képesek növekedni ebben a közegben, és erjesztik a mannitot, valamint bizonyos spórát alkotó grampozitív rudakat.
Ezért fontos, hogy elvégezzünk egy grammot a kolónián és egy kataláz tesztet.
- Másrészt azt kell figyelembe venni, hogy az aureus kivételével más Staphylococcus fajok is képesek a mannit fermentálására. Ezért fontos, hogy a kolóniát tenyésztő táptalajon szubkultúrázzuk, hogy onnan vehessük, és elvégezzük a koaguláz-tesztet.
Az emberre klinikai jelentőséggel bíró, a mannitot fermentáló Staphylococcus fajok között szerepelnek a következők: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum.
Mások változékony reakciót adhatnak, vagyis néha pozitív és néha negatív reakciót. Néhány közülük többek között a S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius.
-A koaguláz-teszt elvégzése céljából nem ajánlott a kolóniák közvetlenül a mannit-agarból történő kivitele, mivel a tápközegben a magas sókoncentráció zavarhatja az eredményt.
-Végül ajánlott a sós mannitollal oltott lemezeket 48 órán keresztül inkubálni, mivel az S. aureus egyes törzsei lassan erjeszthetik a mannitot, bár ez nem túl gyakori.
Irodalom
- Britannia Laboratories. Sós mannit agar. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
- "Sós mannit agar". Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. október 31., 19:08 UTC. 2019. január 17., 20:55, elérhető az es.wikipedia.org oldalon.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztõ Panamericana SA
- Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentína. Szerkesztő Panamericana SA
- BD Laboratories. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Elérhető a következő oldalon: bd.com.