VÉR AGAR: INDOKLÁS, FELHASZNÁLÁS ÉS ELŐKÉSZÍTÉS - BIOLÓGIA - 2026

A vér-agar szilárd táptalaj dúsított differenciálmű, de nem szelektív. Klinikai mintákból vagy szubkultúrákból származó különféle mikroorganizmusok regenerálására és szaporodására használják.

A laboratóriumban kapott klinikai minták legtöbb vetésére be kell vonni a klasszikus vér agart; kivéve a székletmintákat, ahol ez nem hasznos, kivéve ha bizonyos módosítással készültek.

Vér agar lemez

Ez a tápközeg alapvetően dúsított alapanyagból és 5% vérből áll. Az agarbázis az igények szerint változhat, de főleg peptonokból, aminosavakból, vitaminokból, húskivonatból, nátrium-kloridból, agarból áll.

Ami a vért illeti, általában szükség van a viváriummal való érintkezésre, hogy vért nyerjen az állatokból, például juhokból, nyulakból vagy lovakból. Ez azonban nem mindig lehetséges, és néha emberi vért is használnak.

A vér-agar tápközeget elkészíthetjük a laboratóriumban, vagy külön megrendelésre kész társaságokból is. Ennek a tápközegnek az elkészítése az egyik legfinomabb, az előkészítés bármilyen gondatlansága szennyezett tételt eredményez.

Ezért kell megtenni az összes lehetséges óvintézkedést, és végül a minőség-ellenőrzést úgy kell elvégezni, hogy 37 ° C-on inkubáljuk 1 lemezt minden elkészített 100-ra.

bázis

A Staphylococcus aureus vér agarján tenyésztették. Nathan Reading a Flickrről Nathan R. a Twitteren, a Wikimedia Commons-n keresztül. Már említésre került, hogy a vér-agar jellegzetessége, hogy dúsított, differenciált és nem szelektív táptalaj. Ezen tulajdonságok alapját az alábbiakban ismertetjük.

A vér-agar dúsított táptalaj, mivel 5-10% vért tartalmaz az agar alapon, mint fő adalékanyagot. Mindkét vegyület sok tápanyagot tartalmaz, és ez a tulajdonság lehetővé teszi a legtöbb termeszthető baktérium növekedését benne.

Ez a növekedés korlátozás nélkül következik be; ezért nem szelektív. Ha azonban ehhez a tápközeghez olyan vegyületeket adunk, amelyek megakadályozzák egyes mikroorganizmusok szaporodását, és mások számára előnyösek, akkor szelektívvá válik. Ez a helyzet abban az esetben, ha bizonyos típusú antibiotikumokat vagy gombaölőket adnak hozzá.

Hasonlóképpen, a vér-agar egy differenciálközeg, mivel lehetővé teszi a baktériumok 3 típusának megkülönböztetését: béta-hemolitikus, alfa-hemolitikus és gamma-hemolitikus.

A béta-hemolitikumok képesek a vörösvértestek teljes lizálására vagy megbontására, tiszta halogéneket képezve a kolóniák körül, ezért ß vagy ß-hidrolízist termelnek, és a mikroorganizmusokat ß-hemolitikusnak nevezik.

A ß-hemolitikus baktériumok példái a Streptococcus pyogenes és a Streptococcus agalactiae.

Az alfa-hemolitikumok azok, amelyek részleges hemolízist végeznek, ahol a hemoglobin methemoglobinná oxidálódik, zöldes színű színt képezve a kolóniák körül. Ezt a jelenséget α vagy α-hemolízisnek nevezik, és a baktériumokat α-hemolitikusnak tekintik.

Az α-hemolitikus baktériumok példái a Streptococcus pneumoniae és a viridans csoport Streptococcus.

Végül vannak az úgynevezett gamma-hemolitikus vagy nem hemolitikus baktériumok. Ezek növekednek az agaron anélkül, hogy rajta változásokat idéznének elő, ezt a hatást γ -hemolízisnek nevezik, és a mikroorganizmusok γ -hemolitikusak.

Példa γ-hemolitikus baktériumokra: a D csoport Streptococcus egyes törzsei (Streptococcus bovis és Enterococcus faecalis).

Alkalmazások

A vér-agar táptalaj az egyik leggyakrabban használt mikrobiológiai laboratórium.

A vér-agar közegben növekedni képes mikroorganizmusok a következők: szigorú aerob, fakultatív, mikroaerofil, anaerob, grampozitív vagy gramnegatív baktériumok, gyorsan növekvő vagy lassan növekvő baktériumok.

Néhány táplálékigényes vagy igényes baktérium, valamint gombák és élesztők is növekednek. Ugyanígy hasznos az anyagcsere szempontjából nagyon gyenge törzsek altenyésztése vagy újraaktiválása.

A vércsoport és az alapanyag megválasztása azonban attól függ, hogy milyen valószínűsíthető mikroorganizmusokat regenerál felépüléstől, és attól, hogy melyik tányért kell használni (tenyészet vagy antiagramm).

Vércsoport kiválasztása

A vér lehet bárány, nyúl, ló vagy ember.

Néhány kivétellel a legelőnyösebb a bárányvér. Például Haemophilus fajok izolálására, ahol az ajánlott vér ló- vagy nyúlvér, mivel a bárányvér olyan enzimekkel rendelkezik, amelyek gátolják az V. faktort.

A legkevésbé ajánlott az ember, azonban a leggyakrabban használt, talán azért, mert a legkönnyebb beszerezni.

A vért defibrillálni kell, bármilyen adalékanyag nélkül és egészséges állatoktól kell beszerezni. Az emberi vér felhasználásához több tényezőt kell figyelembe venni:

Ha a vér olyan személyektől származik, akik bakteriális fertőzésben szenvedtek, akkor specifikus ellenanyagok lesznek. Ilyen körülmények között egyes baktériumok növekedése valószínűleg gátolt.

Ha a vérbankból nyerik, akkor citrátot tartalmaz, és bizonyos baktériumok nem jelenhetnek meg jelenlétében. Másrészt, ha a vér olyan betegektől származik, akik antibiotikumokat szednek, az érzékeny baktériumok növekedése gátolható.

És ha a vér cukorbetegektől származik, akkor a felesleges glükóz akadályozza a hemolízis minták megfelelő fejlődését.

Az alap agar típus választása

A vér-agar elõállításához használt alapanyag nagyon széles lehet. Közülük: tápanyag agar, agyszív infúziós agar, tripta-záz szója agar, Müeller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, Brucella agar, Campylobacter agar stb.

A vér agar felhasználása az előállításához használt alaptáp szerint

Tápanyag agar

Ezt az alapot használják a legkevésbé, mivel elsősorban nem igényes baktériumokat termeszt, így például bélben oldódó baktériumokat, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp. A Streptococcus izolálása nem ajánlott.

Agyszív infúziós agar (BHI)

Ez az egyik leggyakrabban használt vér-agar alapja, mivel rendelkezik a legtöbb tápanyaggal a legtöbb baktérium növekedéséhez, beleértve a Streptococcus sp-t és más igényes baktériumokat. Noha nem helyénvaló megfigyelni a hemolízis mintáit.

A bárány vérét általában ezzel az alappal használják.

Vér-agar variánsok is elkészíthetők, ahol más vegyületeket adnak hozzá bizonyos mikroorganizmusok izolálására. Például az agyszív infúziós agar nyúl vérrel, cisztingel és glükózzal kiegészítve felhasználható a Francisella tularensis izolálására.

Míg a cisztin-tellurit esetén hasznos a Corynebacterium diphteriae izolálására. Emberi vagy bárányvér használható.

Az első béta-hemolízist szűk halogénnek tekintik, míg a másodiknál ​​a halogén sokkal szélesebb lesz.

Hasonlóképpen, ezt az alapot, a bacitracinnal, kukoricakeményítővel, lóvérrel és más dúsító kiegészítőkkel (IsoVitaleX) együtt a Haemophilus sp nemzetség izolálására használják a légzőmintákból.

Továbbá, ha a klóramfenikol - gentamicin vagy penicillin - streptomycin és ló vérének kombinációját adjuk hozzá, akkor ez ideális a igényes patogén gombák izolálására, még akkor is, ha nagyobb hozamuk van, mint a Sabouraud glükóz agarnál. Különösen hasznos a Histoplasma capsulatum izolálásában.

Trypticase szója agar

Ez az alap a legelőnyösebben a hemolízis mintájának jobb megfigyelésére és olyan diagnosztikai vizsgálatok elvégzésére, mint például optokin taxonok és bacitracin. A klasszikus vér agart használják rutinszerűen.

Ezen bázissal elkészítheti a Corynebacterium diphteriae speciális vér-agarját, cisztin-tellurittal és bárányvérrel .

Hasonlóképpen, ezen agar és bárányvére, valamint a kanamicin-vankomicin kombinációja ideális az anaerobok, különösen a Bacteroides sp.

Müeller Hinton agar

Ezt a vérrel kiegészített bázist az igényes mikroorganizmusok, például a Streptococcus sp.

Használható baktériumok, például Legionella pneumophila izolálására is.

Thayer Martin Agar

Ez a táptalaj ideális vér-agar alapjául a Neisseria nemzetség, különösen a Neisseria meningitidis gyanúja esetén, mivel az N. gonorrhoeae nem nő a vér agaron.

A Neisseria meningitidisre való érzékenység vizsgálatára is felhasználják.

Columbia agar

Ez az alap kiválóan alkalmas Helicobacter pylori gyomorbiopsziából származó minták vetésére.

A tápközeget úgy állítjuk elő, hogy 7% bárányvért adunk antibiotikumokkal (vankomicin, trimetoprim, amfotericin B és cefsulodin), defibrillálva, hogy megakadályozzuk a jelenlévő egyéb típusú baktériumok szaporodását.

Ugyanez a bázis, kiegészítve emberi vagy bárányvérrel, nalidixinsavval és kolistinnel, hasznos a Gardnerella vaginalis izolálására. Ideális ugyanabnak a mikroorganizmusnak az antibiotikumokkal szembeni antimikrobiális érzékenységének felmérésére.

Ezen felül vér-agar előállítására használják anaerobok tenyésztésére, aminoglikozidok és vankomicin hozzáadásával.

Ez az alap lehetővé teszi a hemolízis minták megfelelő megfigyelését.

Brucella agar

Ez a vér-agar alapjául szolgáló táptalaj és a K-vitamin hozzáadása ideális az anaerob baktériumok tenyésztéséhez. Ebben az esetben a bárány vére ajánlott.

Campylobacter agar

A Campylobacter agar 5% juhok vérével és 5 antibiotikummal (cefalotin, amfotericin B, trimetoprim, polymyxin B és vankomicin) kiegészítve szolgál a Campylobacter jejuni izolálására a székletmintákban.

Készítmény

Minden egyes kereskedelmi ház elkészíti az utasításokat egy liter táptalaj elkészítésére a tartály hátulján. Megfelelő számítások elvégezhetők a kívánt mennyiség előállításához, a kiválasztott alapanyag függvényében.

Mérjük meg és oldjuk fel

Az alapanyagot dehidráltuk (por), ezért fel kell oldani desztillált vízben, amelynek pH-ja 7,3.

A kiválasztott alapanyag által jelzett mennyiséget lemérjük és a megfelelő mennyiségű vízben feloldjuk egy lombikban, majd mérsékelt hőn melegítjük és forgómozgásokkal keverjük, amíg az összes por fel nem oldódik.

sterilizálás

Feloldódás után autoklávban 121 ° C-on 20 percig sterilizáljuk.

Vér aggregátum

Az autokláv elhagyásakor a lombikot hagyjuk lehűlni, amíg a hőmérséklet 40-50 ° C-ig nem változik; Ez az a hőmérséklet, amelyet az emberi bőr támogat, és ugyanakkor az agar még nem megszilárdult.

Ehhez az injekciós üveget kézzel megérinti, és ha a hő megengedhető, akkor az ideális hőmérséklet a megfelelő mennyiségű defibrillált vér hozzáadásához (50 ml minden liter agarra). Finoman keverjük össze, hogy homogenizálódjanak.

A vér aggregációjának áthaladása döntő fontosságú, mert ha nagyon meleg közegben történik, akkor a vörösvértestek lebontódnak, és a tápközeget nem használják hemolízis megfigyelésére.

Ha túl hidegen adjuk hozzá, összecsukódik, és a közeg felülete nem lesz sima, hogy lehetővé tegye a megfelelő pontozást.

Öntsük a Petri-csészébe

Tálaljuk steril Petri-csészékben közvetlenül a vér homogenizálása után. Körülbelül 20 ml-t öntünk minden Petri-csészébe. Ezt az eljárást lamináris áramlású burkolatban vagy az égő közelében hajtják végre.

A vér-agarnak a Petri-csészékben történő kiszolgálásakor nem szabad légbuborékok maradni a lemez felületén. Ha ez megtörténik, a Bunsen égő lángját gyorsan átjuttatják a lemezen, hogy kiküszöböljék azokat.

A lemezeket hagyjuk megszilárdulni, és hűtőszekrényben (2–8 ° C) tárolásig fordítva fordítva tároljuk. A vér-agarlemezek használata előtt azokat meg kell edzeni (hagyni melegedni szobahőmérsékletre), hogy be lehessen vetni.

Az előkészített lemezek körülbelül egy hétig tartanak.

Irodalom

1. Bayona M. A Helicobacter pylori tenyészetének mikrobiológiai feltételei. Gastroenterol rev. 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Gyakorlati klinikai mikrobiológia. Cadizi Egyetem, 2. kiadás. UCA Kiadványok Szolgálata.
3. "Vér agar." Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. december 10., 14:55 UTC. 2018. december 27., 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentína. Szerkesztő Panamericana SA
5. CEDIVET laboratóriumi állatorvosi diagnosztikai központ. Guatemala. Elérhető a: trensa.com oldalon.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztõ Panamericana SA