A TCBS agar a nagyon szelektív és differenciált szilárd tenyészet eszköze, amelyet a Vibrio nemzetségbe tartozó baktériumok, különösen a Vibrio cholerae, a V. parahaemolyticus és a V. vulnificus baktériumok, mint ilyen jellegű fő kórokozók izolálására és tenyésztésére használnak.
A TCBS rövidítés a tioszulfát-citrát-epe-szacharóz kifejezést jelenti. Ez az agar a Vibrios szelektív táptalajának is ismert. Az eredeti képletet Nakanishi készítette, később Kobayashi módosította.
Kereskedelmi TCBS táptalaj és TCBS agarlemez Vibrio cholerae-vel oltva. Forrás: 1. fotó: a szerző készítette MSc. Marielsa Gil / 2. fotó: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India
Élesztő-kivonatból, hús-peptonból, tripteinből, nátrium-citrátból, nátrium-tioszulfátból, oxibén, szacharózból, nátrium-kloridból, vas-citrátból, brómtimolkékből, timolkékből és agarból áll.
Ez a kompozíció lehetővé teszi a Vibrio fajok megfelelő fejlődését víz-, élelmiszer- és székletmintákból; a Vibrio hollisae kivételével, amely ezen a közegen nem nő. Ezenkívül a TCBS táptalaj képes gátolni más kísérő baktériumok, különösen a koliformák szaporodását.
A Vibrio nemzetség egyes fajai által előidézett súlyos gastrointestinalis és extraintestinalis problémák miatt diagnosztizálása nagyon fontos. Az embereket elsősorban a tengerből vagy a szennyezett vizekből nyers vagy nem főtt ételek fogyasztása, hanem sebfertőzés is okozza.
Emiatt a klinikai laboratóriumoknak be kell vonniuk a TCBS agart a folyékony székletminták székletkultúrájának vizsgálatába, különös tekintettel a rizsvíz megjelenésére. Különösen akkor, ha a beteg arról számol be, hogy tengeri vízzel érintkezett, vagy kagylót vagy halat evett.
bázis
Élesztőkivonat, húspeptonok és triptein képezik e táptalaj táplálékforrását. A TCBS agar azonban a legtöbb baktérium számára nem alkalmazható táptalaj.
Magas szelektivitását a nátrium-citrát és az oxe hozzáadása adja; mindkettő gátlószer, amely szintén lúgos pH-t biztosít a közeghez, korlátozza a kísérő növényzet növekedését és elősegíti a többi faj mellett a V. cholerae növekedését. Meg kell jegyezni, hogy a Vibrio cholerae nagyon érzékeny a savasságra.
A nátrium-klorid a maga részéről ozmotikusan kiegyensúlyozza a tápközeget. Továbbá, mivel magas a koncentrációja, gátlószerként is szolgál, elősegítve a halogén baktériumok növekedését.
A szacharóz az erjeszthető cukor, amely a brómtimol-kék és a timol-kék pH-mutatókkal együtt adja a közegnek a differenciális jellegét. Ezért ezen a közeggel meg lehet különböztetni a szacharózos erjesztő törzseket a nem erjesztõktõl.
A szacharóz-erjesztő törzsek kolóniái sárga színűvé válnak, és a savtermelés következtében a táptalaj zöldről sárgare változik. A nem fermentorok áttetszővé válnak, és a közeg az eredeti színű (zöld) marad.
Hasonlóképpen, ez a közeg kénforrásként nátrium-tioszulfátot, fejlődő anyagként vas-citrátot tartalmaz. Mindkettő baktériumokat mutat, amelyek képesek hidrogén-szulfid (színtelen gáz) előállítására. H 2 S képződik tioszulfát, és ezt követően történő reagáltatással ferri-citrát egy látható fekete csapadék képződik.
Végül az agar biztosítja a közeg szilárd állagát.
Készítmény
Mérjünk be 89 g dehidratált közeget és oldjuk fel egy liter desztillált vízben. Segítsen feloldódni melegítés és gyakori keverés közben. Az elegyet legfeljebb 2 percig felforralhatjuk.
Ezt a közeget nem autoklávozzuk. Feloldódás után közvetlenül steril lemezeken tálaljuk. Amikor megszilárdulnak, fordított módon elrendezik a vérlemezkékre, és felhasználásig hűtőszekrényben (2-8 ° C) tárolják.
Az előkészítés után a tápközeg pH-ja 8,6 ± 0,2.
A dehidrált közeg színe világos bézs vagy zöldes-bézs, a közeg színe erdőzöld vagy kékeszöld.
Fontos, hogy a lemezek melegedjenek a minták vetése előtt.
Használat
A Vibrios izolálására a leggyakoribb minta a hasmenés széklet.
A székletmintákat, ha azokat nem lehet közvetlenül a szelektív táptalajra bevetni, a Cary Blair táptalajon kell szállítani.
A tenyészet érzékenységének növelése érdekében a széklet legfeljebb 8 órán keresztül dúsító közegként 8,4-es pH-n keresztül peptonvízen vezethető át, ahonnan szubkultúrázásra kerül a TCBS táptalajra.
Figyelembe kell venni azt is, hogy a Vibrios egyes törzsei immunszuppresszált betegekben szeptikátist okozhatnak, ezért izolálhatók vértenyészetekből. Hasonlóképpen, a tengerből származó víz- és élelmezési minták elemezhetők a kolerabetegség járványkitörései esetén is.
elvetett
A vizsgálati minta oltóanyagának jól láthatónak kell lennie, a vetést kimosás útján sávos módszerrel hajtják végre. A lemezeket 37 ° C hőmérsékleten inkubáljuk 24 órán át aerobiosis alatt.
A Vibrio cholerae feltételezhető kolóniái közepes méretűek, simaak, átlátszatlanok, vékony szegélyekkel és sárga színűek a szacharóz fermentációja miatt.
A V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii és néhány V. vulnificus fajai hasonló módon nőnek. Más klinikai szempontból fontos Vibrios-fajok, mint például a V. parahaemolyticus, nem erjesztik a szacharózt, olajzöld kolóniákként fejlődnek ki.
A TCBS agarlemez Vibrio parahaemolyticus-mal oltva. Forrás: isis325 Flickr
Másrészt nem szabad megfeledkezni arról, hogy az Aeromonas és a Plesiomonas bizonyos oxidáz (+) törzsei növekedhetnek ebben a tápközegben, olyan sárga kolóniákat fejlesztve, amelyek megzavarhatják az orvosot. Míg a Pseudomonas egyes törzsei szintén oxidázzal (+) növekednek, mint zöld kolóniák, mint például a V. parahaemolyticus.
Korlátozás
A Vibrio nemzetségre pozitív oxidáztesztet soha nem szabad a TCBS agarból nyert kolóniákból elvégezni, mivel a kapott eredmény hamis negatív lesz. A középső vegyületek erősen zavarják ezt a tesztet. Ezért a vér agaron lévő szubkultúrákból kell készíteni.
QA
Annak igazolására, hogy a táptalaj jó állapotban van, tanácsos ismert vagy tanúsított kontroll törzseket vetni és megfigyelni, hogy a növekedés megfelel-e a várt tulajdonságoknak.
Ehhez felhasználhatja a következő törzseket:
-Vibrio cholerae - kielégítő növekedés (sárga kolóniák, áttetsző szegély).
-Vibrio parahaemolyticus - kielégítő növekedés (kolónia zöld központtal és áttetsző szegéllyel).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - kielégítő növekedés (sárga kolóniák, azonos színű halókkal a kolónia körül).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - teljes vagy részleges gátlás (kis sárga vagy áttetsző kolóniák).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - részleges vagy teljes gátlás (kék kolóniák).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Teljesen gátolt.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Teljes vagy részleges gátlás. (Kis kolóniák zöld közepe átlátszó határ).
Az inokulált tápközeg inkubációjának változatlannak kell lennie.
Irodalom
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009.Támogatható: f-soria.es
- BD laboratórium. BD. TCBS Agar 2003. Elérhető a következő oldalon: bd.com
- Britannia Laboratories. TCBS közepes. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
- Acumedia Laboratories. TCBS Agar. 2016.Attól elérhető: foodsafety.neogen.com
- Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.