THAYER MARTIN AGAR: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

A Thayer Martin agar nagyon tápláló és szilárd szelektív táptalaj a Neisseria meningitidis és a Neisseria gonorrhoeae izolálására; mindkettő kórokozó vagy klinikai szempontból fontos Neisserias.

A Thayer Martin Agar egyik legfontosabb különleges tulajdonsága a táplálékkiegészítők magas tartalma. Ez a tulajdonság alapvető fontosságú, mivel a Neisserias táplálkozási szempontból nagyon igényes mikroorganizmusok, és ezért nem növekednek a közönséges közegekben.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin üzleti közeg. 1. forráskép: a szerző készítette MSc. Marielsa Gil, 2. kép. A Pixinio.com baktériumolonizált, módosítva, Thayer, Martin, agar.

Másrészt, mivel ezeket a mikroorganizmusokat általában nem steril területeken találják meg, inhibitorok hozzáadására van szükség a kísérő növényvilág szaporodásának megakadályozására, anélkül hogy ez befolyásolná a Neisseria nemzetség fejlődését.

Ez az agar GC bázis agarból, hemoglobinból, további táplálékkiegészítőkből és gátló anyagok (antibiotikumok és gombaellenes szerek) komplexéből áll. A kereskedelmi házak a kiegészítőket külön-külön értékesítik.

Az ebben a táptalajban beveendő minta függ a keresett mikroorganizmustól. A Neisseria gonorrhoeae esetében az ideális minták a hüvelyi és húgycső ürülék. Míg a Neisseria meningitidis esetében a leggyakrabban használt mintákat a CSF, a garat és az orr-garat választja.

bázis

A neisserias mikroorganizmusokat bosszantóként osztályozzák, ezért nehéz elkülöníteni őket. Ezért a Thayer Martín összetett közeg, és minden alkotóelem az alábbiakban ismertetett funkciót látja el:

GC alap agar

A GC agar tartalmaz proteóz-peptont, kukoricakeményítőt, nátrium-kloridot, dikálium-foszfátot, monokálium-foszfátot és agar-agart. Komponensei biztosítják az alapvető tápanyagokat a mikrobiális fejlődéshez, semlegesítik a mérgező zsírsavakat, segítenek fenntartani az ozmotikus egyensúlyt, meghatározzák a pH-t, és szilárd állagot biztosítanak a táptalaj számára.

Hemoglobin

A hemoglobin biztosítja az V és X faktorokat (NAD nikotinamid adenin-dinukleotid és hemin). Ezért ebben a közegben a Haemophilus fajok is növekednek. A hemoglobint kereskedelemben dehidrált formában lehet beszerezni, vagy friss defibrillált szarvasmarha vért adhatunk a tápközeghez.

Dúsító kiegészítő

Másrészről, a Thayer-Martin táptalajhoz dúsító kiegészítést is hozzá kell adni, mivel az alapanyagban lévő tápanyagok nem elegendőek a Neisseria nemzetség követelményeinek kielégítéséhez.

A leggyakrabban használt dúsító kiegészítőt izovitalexnek hívják. Glutamint, adenint, NAD-t, kokarboxilázt, guanint, vas-nitrátot, p-amino-benzoesavat, B12-vitamint, tiamint és glükózt tartalmaz. Mindezek a vegyületek a patogén Neisserias megfelelő fejlődéséhez szükségesek.

inhibitorok

Mivel ez nagyon tápláló táptalaj, inhibitorokat kell használni, amelyek megakadályozzák a mikroorganizmusok szaporodását a terület szokásos növényzetéből, és így elősegítik a Neisseria nemzetség izolálását.

Az inhibitor komplex vankomicinből, kolistinből és nisztatinból áll. A vankomicin gátolja a Gram-pozitív baktériumok növekedését, a kolistin megakadályozza a Gram-negatív baktériumok, például Pseudomonas és néhány szaprofit Neisserias növekedését, és a nystatin hat az élesztőkre, például a Candida albicans.

Thayer Martin Agar azonban később módosult; a változások a trimetoprim hozzáadását, az agarmennyiség növelését és az extra glükóz hozzáadását tartalmazták. Ezek a változások jelentősen javították a Neisseria gonorrhoeae fajok helyreállítását.

Meg kell jegyezni, hogy a trimetoprim gátolja a Proteus nemzetség növekedését és az ennek következtében fellépő rajképződést. Ebben az értelemben az antibiotikumok biztosítják a szelektív jelleget a Thayer Martin táptalaj számára.

Készítmény

Eredeti Thayer Martin agar

-GC agar

Mérjünk ki 8,2 g dehidratált GC tápközeget és szuszpendáljuk 100 ml-ben. Keverjük össze és forraljuk 1 percig, állandó keverés közben, hogy teljesen feloldódjon. A keveréket sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig.

- 2% hemoglobin

Szuszpendáljuk 2 g dehidratált hemoglobint 2 vagy 3 ml forró desztillált vízben, amíg egységes keverék képződik. Adjunk hozzá apránként több vizet a 100 ml-es térfogat eléréséhez. A szuszpenziónak homogénnek kell lennie a sterilizálás előtt.

Sterilizáljuk autoklávban 15 percig.

-Dúsító kiegészítő

Oldja fel a kereskedelmi fiolát ugyanazon kereskedelmi társaság által kapott hígítóval. Jól összekeverni. A felhasznált hígítószer mennyiségét a készlet útmutatója határozza meg.

-VCN gátló kiegészítő (vankomicin, kolistin, nisztatin)

Oldja fel az injekciós üveget a kereskedelmi társaság által biztosított hígítóval. Jól összekeverni. A felhasznált hígítószer mennyiségét a készlet útmutatója határozza meg.

-Előkészített

Minden 100 ml GC agarra az alábbiak szerint járjon el:

Amikor a GC agar kijut az autoklávból, hagyja lehűlni körülbelül 50 ° C hőmérsékletre, és adjon hozzá 2 ml előkészített hemoglobin oldatot, 2 ml dúsító kiegészítőt (izobitalex vagy britalex) és 2 ml gátló kiegészítőt. Keverjük össze és tálaljuk steril Petri-csészékben.

Hagyja megszilárdulni, és felhasználásig tárolja a hűtőszekrényben.

Az elkészített közeg színe cseresznyevörös. A tápközeg végső pH-ja 7,2 ± 0,2

Módosított Thayer Martin agar

Mérjünk ki 8,2 g dehidratált GC tápközeget és szuszpendáljuk 100 ml-ben. Adjunk hozzá 1 g agar-agart és 0,3 g glükózt. Keverjük össze és forraljuk 1 percig, állandó keverés közben, hogy teljesen feloldódjon. A keveréket sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig.

Készítse el a hemoglobint és dúsító kiegészítőt az előzőekben leírtak szerint.

Az alkalmazott szuppressziós kiegészítő VCNT (vancomicin, kolistin, nisztatin, trimetoprim).

-Előkészített

Az eredeti Thayer Martin agar esetében leírtak szerint járjon el.

Használat

A Thayer Martin Agar-t hagyja melegedni, mielőtt a mintákat csíkozzák. Az általánosan használt minták a garat-tamponok, az orr-tamponok, a hüvelyi, húgycső és / vagy a végbél kiürülése és a CSF.

Használjon friss mintákat, és végezzen erős oltást az agaron. A mintákat közvetlenül anyagcsere útján oltják be, majd a kimerülést a felületre csíkozzák.

A lemezeket 35-37 ° C-on inkubáljuk 24-48 órán át mikroaerofil üvegedényben (5% CO ₂). Az inkubációs idő végén a lemezeket megvizsgáljuk kicsi, szürke és néha nyálkahártya kinézetű kolóniák szempontjából.

Gram és megerősítő biokémiai teszteket végezzen gyanús telepekkel.

QA

A következő mikrobiális törzsek felhasználhatók a Thayer Martin Agar minőségének ellenőrzésére.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 és Neisseria meningitidis ATCC 13090; mindkét törzsben kielégítő fejlődés várható.

A következő törzseket is bele kell foglalni: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 és Candida albicans ATCC 10231. Mindegyikben teljes vagy részleges gátlás várható ebben a tápközegben.

korlátozások

- Nem szabad megfeledkeznünk arról, hogy a használt inhibitorokkal szemben ellenálló baktériumok növekedhetnek a tápközegben.

- Vannak olyan Neisseria gonorrhoeae törzsek, amelyek érzékenyek lehetnek a használt vancomicin koncentrációjára. Ezért javasoljuk az izovalexnal kiegészített csokoládé agar alkalmazását, gátlók nélkül.

- Vannak olyan nisztatin-rezisztens élesztőtörzsek, amelyek növekedhetnek ebben a közegben és zavarhatják a patogén Neisserias, különösen a gonococcusok izolálását.

Irodalom

1. Valtek Diagnostic Laboratories. Thayer-Martin Agar, 2016. Elérhető a következő címen: com
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Közepes Módosítva. 2010. Elérhető a következő címen: britanialab.com
3. Wikipedia közreműködői. Thayer-Martin agar. Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2017. október 26, 16:33 UTC. Elérhető a következő oldalon: wikipedia.org 4. Belépés 2019. február 28-án.
4. Britannia Laboratories. GC agar. 2010. Elérhető a következő címen: britanialab.com.
5. Laboratories BBL ™ Közepes dúsítás igényes mikroorganizmusok számára. 1999. elérhető: bd.com
6. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.