TSI AGAR: INDOKLÁS, ELŐÁLLÍTÁS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

A TSI agar vagy hármas cukor-vas agar szilárd táptalaj, amely biokémiai tesztként szolgál a Gram-negatív baktériumok kezdeti azonosításához. Ennek alapja a jelen lévő cukrok erjedése, valamint a hidrogén-szulfid és gáz előállítása.

Összetétele és alapja nagyon hasonlít a Kligler vasteszthez, azzal a különbséggel, hogy az utóbbi csak glükózt és laktózt tartalmaz. Ehelyett - amint a neve azt sugallja - a hármas cukor-vas agar három fermentálható szénhidrátot tartalmaz: glükózt, laktózt és szacharózt.

Az ÁME-teszt képei különböző mikroorganizmusokkal A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Forrás: Witmadrid, a Wikimedia Commonsból

Ezenkívül a TSI táptalajnak négy fehérje-származéka van, amelyek nagyon tápláló agarmá teszik: élesztő-kivonat, húskivonat, pepton és proteóz-pepton. Ezenkívül vas-ammónium-szulfátot, nátrium-tioszulfátot, nátrium-kloridot, fenolvöröset és agart tartalmaz.

Az, hogy egy mikroorganizmus nem képes fermentálni a tápközegben található glükózt, azonnal kizárja azt az Enterobacteriaceae családba való tartozásból. Ezért ez a vizsgálat elengedhetetlen annak meghatározásakor, hogy mely azonosítási módot kell alkalmazni a nemzetség és a faj meghatározásához.

Minden laboratórium eldönti, hogy dolgozzon-e TSI agarral vagy Kligler vas agarral.

bázis

A vegyületek mindegyike egy funkciót tölt be a közegben.

Nátrium-klorid és agar

Nátrium-klorid szükséges a táptalaj ozmotikus egyensúlyának fenntartásához. Amíg az agar szilárd állagot biztosít.

PH mutató (fenolvörös)

Az elkészített táptalaj pH-ját 7,3-ra kiegyensúlyozzuk, és a pH-indikátor (fenolvörös) sárgára vált 6,8 alá. Ez azt jelenti, hogy a cukrok erjedésével előállított kis mennyiségű savak a közeget vörös-narancsról sárgára változtatják.

Ha nem történik erjedés, akkor a közeg lúgosítása peptonok felhasználásával vörös-narancssárgáról erõsen vörösre változik.

Fehérjeszármazékok (élesztőkivonat, húskivonat, pepton és proteózpepton)

Amikor a baktériumok metabolizálják a TSI agarban levő fehérjéket, aminokat képeznek, amelyek a közeget lúgosítják (főleg ferde szinten), mivel a reakció oxigént igényel. Az aminok az előlapot fényespirossá változtatják.

De ez attól függ, hogy a baktériumok képesek-e fermentálni a szénhidrátokat, vagy sem.

A szénhidrátok (glükóz, laktóz és szacharóz) erjedése

A cukrok erjedésének vizsgálata számos képet adhat, és mindegyiket különféleképpen értelmezik. A teszt értelmezése a mikroorganizmusokat 3 kategóriába sorolja: glükóz nem-fermentorok, laktóz nem-fermentorok és laktóz / szacharóz fermentorok.

Meg kell jegyezni, hogy a tápközegben a glükóz mennyisége korlátozott, míg a laktóz és a szacharóz koncentrációja tízszeres.

Az Enterobacteriaceae család baktériumai és más glükóztartalmú mikroorganizmusok elkezdenek erjesztni ezt a cukrot, mivel ez az energia legegyszerűbb szénhidrátja.

Másrészt a laktóz és a szacharóz komplex szénhidrátok, amelyeket le kell bontani és glükózzá kell alakítani annak érdekében, hogy belépjenek az Embden-Meyerhof ciklusba.

-Mikroorganizmusok, amelyek nem fermentálják a glükózt

Ha a beoltott mikroorganizmus nem képes fermentálni a glükózt, sokkal kevesebb lesz képes más szénhidrátok fermentálására. Ezért itt savak nem alakulnak ki, de a peptonok felhasználásával aminok képződnek a ferdén.

Ebben az esetben az előlap erősebb vörösre vált, és a cső alja változatlan maradhat, vagy lúgos is lehet, az egész cső pedig vörös marad.

Értelmezés: K / K jelentése lúgos ferde / lúgos vagy semleges fenék

A cikk elején található képen lásd a D cső képét.

Ez az eredmény azt jelzi, hogy a mikroorganizmus nem tartozik az Enterobacteriaceae családba.

-Mikroorganizmusok, amelyek nem fermentálják a laktózt / szacharózt

Ha a baktériumok képesek fermentálni a glükózt, de nem laktózt vagy szacharózt, akkor a következők történnek:

Körülbelül 6-8 óra elteltével a baktériumok elhasználják az összes jelenlévő glükózt, és képesek lesznek megsavanyítani mind a ferde, mind a blokkot; azaz az agar teljesen sárgává válik. De amikor a glükóz kimerül, és a laktóz és a szacharóz nem használható fel, a baktériumok megkezdik a fehérjék metabolizmusát.

Ehhez a reakcióhoz oxigénre van szükség, ezért a peptonok lebomlása a felületen történik (ferde). A képződött aminok lúgosítják az előlapot sárgáról vörösre. Ez a reakció 18-24 órás inkubálás után bizonyítható.

Értelmezés: A K / A lúgos kúpot és savvagot jelent.

A cikk elején lévő képen lásd a B cső képét.

-Laktozt / szacharózt fermentáló mikroorganizmusok

A laktóz és szacharóz fermentálására képesek mikroorganizmusok nyilvánvalóan fermentálhatják a glükózt. Miután a közegben lévő minimális mennyiségű glükózt elhasználták, a képződött piruvát az aerob Krebs-cikluson keresztül metabolizálódni kezd és savakat képez, és 8–12 óra alatt az összes táptalaj sárgává válik.

Ha a baktériumok képesek lebontani a laktózt vagy a szacharózt, akkor a savak tovább képződnek, és 18–24 óra elteltével az egész cső - a ferde és a dugó - sárgává válik.

Meg kell jegyezni, hogy a glükóz felhasználását kétféle módon hajtják végre: az egyik aerob módon a cső ferde oldalán, a másik pedig anaerob módon a cső alján található.

Értelmezés: A / A azt jelenti, savas kúp / savas fenék. Lehet, hogy nincs gáz.

A cikk elején lévő képen lásd az A cső képét.

Gáztermelés

Egyes mikroorganizmusok képesek gázt előállítani a cukrok erjedése során. A gázt a csőben az agarban kifejtett nyomás tanúsítja. A nyomás buborékképződést vagy az agar elmozdulását okozza. A gázképződés néha megbonthatja a közeget.

Fontos, hogy az ÁME táptalajának vetésekor a szúrást tiszta módon végezzék az agar közepén, amíg az aljára nem kerül. Ha a szúrást a cső falai felé irányítják, akkor ez hamis pozitív hatást válthat ki a gáz előállítása során, mivel a helytelenül kialakított csatornán keresztül kiszabadul.

A gáztermeléshez, valamint az agar-kúpban zajló reakciókhoz oxigénre van szükség, ezért ajánlott, hogy a csövet gyapotdugóval fedjük le, és ha Bakelite kupakot használunk, akkor ne legyen teljesen szoros.

A gáztermelést pozitív (+) vagy negatív (-) értékkel kell kimutatni.

Gázképződés mintái. Forrás: Az MSc programja. Marielsa Gil. Képforrás: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, a Wikimedia Commonson keresztül

Nátrium-tioszulfát és vas-ammónium-szulfát

A hidrogén-szulfid (színtelen gáz) előállítására képes baktériumok felveszik a ként a közegben lévő nátrium-tioszulfátból. Miután H ₂ S képződik, ez reagál vas-ammónium-szulfát, termelő vas-szulfid (jól látható fekete csapadék).

H ₂ S termelés jelentett pozitív (+) vagy negatív (-).

A cikk elején lévő képen lásd a C cső képét.

Készítmény

Mérjünk be 62,5 g dehidratált hármas cukor-vas agar tápközeget (TSI) és oldjuk fel egy liter desztillált vízben.

Melegítsük, amíg az agar teljesen feloldódik. Egy percig forraljuk, gyakran keverve. Ossza el a 4 ml tápközeget 13/100 kémcsövekbe pamutkupakkal.

Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig. Vegye ki az autoklávból és hagyja, hogy szögben pihenjen. Ügyelni kell arra, hogy mind az alap, mind az előlap azonos távolságban legyen.

Hűtőszekrényben tárolandó 2-8 ° C-on. A baktériumtörzs vetése előtt hagyja felmelegedni.

A dehidrált táptalaj színe világos bézs, az elkészített táptalaj vörös-narancs.

Az elkészített táptalaj végső pH-ja 7,3 ± 0,2.

Alkalmazások

Az ÁME tesztet széles körben használják mikrobiológiai laboratóriumi szinten. Ez a vizsgálat elengedhetetlen a nemzet és a faj azonosításához alkalmazandó vizsgálat típusának irányításához. Jó végrehajtása és értelmezése anyagokat és munkaerőt takaríthat meg.

Ha az eredmény egy TSI K / K, és a citokróm-oxidáz teszt pozitív, akkor ismert, hogy a nem nem erjesztő gramnegatív rudak - például Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia - azonosítására más nemzetek között teszteket kell használni. Ha oxidáz-negatív, akkor az Acinetobacter, Stenotrophomonas nemzetségek felé irányul.

Másrészt, ha TSI A / A vagy K / A értéket kapunk, és a citokróm-oxidáz teszt negatív, minél több nitrát redukálódik nitritekre, akkor biztosak lehetünk abban, hogy az Enterobacteriaceae családba tartozó mikroorganizmus. Ebben az esetben az azonosítási útvonalat a baktériumok ezen csoportjának specifikus tesztjeire kell összpontosítani.

Másrészről, ha K / A vagy A / A képet kapunk, és a citokróm-oxidáz teszt pozitív, a további összeállítandó tesztek célja az Enterobacteriaceae családba nem tartozó fermentációs törzsek azonosítása, például: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio és Pasteurella.

Az oxidáz-negatív hidrogén-szulfiddal kapcsolatos ÁME irányítja az Enterobacteriaceae család következő nemzetségeinek azonosítását: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella vagy Salmonella.

Egy TSI kevés vagy mérsékelt hidrogén-szulfid a lúgos kúpkerekes lúgos háttér, és egy pozitív oxidáz végigvezeti a használatát vizsgálatok azonosításához nem fermentáló H ₂ S- termelő Gram-negatív pálcák, például Shewanella putrefaciens.

Végül, a TSI felhasználható a hidrogén-szulfid-termelés vizsgálatára grampozitív baktériumokban, különösen, ha Erysipelothrix rhusiopathiae gyanúja merül fel.

elvetett

Az ÁME-tápközeget tiszta telepekkel kell beoltani, primer vagy szelektív tenyészetekben elkülönítve. Ha a kolóniát szelektív tápközegből veszik fel, amelyet vegyes növényi mintákkal oltottak be, akkor csak a felületről kell gondoskodni, mivel az ebben a tápközegben gátolt életképes törzsek a kolónia alsó részén lehetnek.

Ezért a hurkot soha nem szabad lehűteni szelektív táptalajon, majd a kolóniát felveszik és beoltják az ÁME táptalajjal.

A vetést egyenes hurokkal vagy tűvel kell elvégezni. A szúrást elvégezzük, ügyelve arra, hogy a közepén áthaladjon az alja eléréséig, majd a vetést befejezzük úgy, hogy a felületet cikcakk alakban beoltjuk. Ne végezzen két lyukasztást.

Inkubáljuk 37 ° C-on aerobiosisban 18-24 órán át. Tolmácsoljon ebben az időben, sem előtt, sem után.

korlátozások

Az ÁME-tesztet az inkubálástól számított 18–24 órán belül el kell olvasni. Az idő előtti leolvasás hamis pozitív eredményt adhat az A / A fermentációhoz. Mivel ezen idő elteltével a nem fermentor hamis negatív képet alkothat a közeget lúgosító peptonok fogyasztása miatt.

Irodalom

1. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok a klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztő Panamericana. Buenos Aires. Argentína.
2. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
4. "TSI agar." Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2018. július 10., 08:09 UTC. 2019. február 10., 03:33 Elérhető: es.wikipedia.org
5. Britannia Laboratories. ÁME agar (hármas cukor-vas agar). 2015.Attól elérhető: britanialab.com
6. BD Laboratories. Hármas cukor-vas agar (ÁME agar). 2003. Elérhető a következő oldalon: bd.com