PEPTONVÍZ: ALAPOZÁS, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁSOK - BIOLÓGIA - 2026

A peptonvíz folyékony dúsító közeg, nem szelektív, főleg hígító élelmiszerek mintájaként vagy más anyagként. Ez a közeg kémiai szempontból nagyon egyszerű, húspeptont, nátrium-kloridot és vizet tartalmaz.

Bizonyos tápértékkel rendelkezik, lehetővé téve a minta gazdagítását. Ha vannak visszaélésszerű baktériumok, ez a közeg megjavítja az életképességet. Különösen hasznos az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok helyreállításában.

Peptone víz palackokban. Forrás: MSc. Marielsa gil

A szalmonellák visszanyerése esetén pufferelt peptonvíz-változat használata ajánlott; Ez a minta elődúsító közegeként szolgál, ebben az esetben más elemeket tartalmaz, például dinátrium-foszfátot és dikálium-foszfátot.

Általában a peptonvizet semleges pH-val állítják elő, azonban vannak olyan variánsok is, amikor a pH-nak 8,5 ± 0,2 (lúgos) kell lennie, mivel az elkülönítendő baktérium alkalifil, például Vibrio cholerae.

Ezenkívül ez a táptalaj alapszintként használható a szénhidrát fermentációs vizsgálatokhoz.

bázis

A peptonok biztosítják a baktériumok növekedéséhez szükséges tápanyagokat, különösen a nitrogént és a rövid szénláncú aminosavakat, míg a nátrium-klorid fenntartja az ozmotikus egyensúlyt.

Ezenkívül a táptalaj lehetővé teszi az ipari folyamatok által károsított baktériumsejtek diszpergálását, homogenizálását és helyreállítását.

Hígítószerként ideális, hatékonyan helyettesíti a fiziológiai oldatot (SSF) vagy a foszfát puffer oldatot (PBS).

A baktériumok növekedése a zavarosság megfigyelésével nyilvánvaló.

Készítmény

Házi készítés (nem kereskedelmi)

Mérjünk be 1 g peptont és 8,5 g nátrium-kloridot, oldjuk fel 1 liter desztillált vízben. A pH-t 7,0-re kell állítani. Ehhez 1 N nátrium-klorid használható.

Előállítás kereskedelmi táptalajon

Mérjünk be 15 g dehidratált közeget és oldjuk fel liter desztillált vízben. Homogenizáljuk a keveréket. Ha szükséges, a keveréket 1 percig forraljuk, hogy elősegítsük a teljes oldódást. Tálaljuk 100 ml-es palackokban vagy 10 ml-es csövekben, ha szükséges. Autokláv 121 ° C-on 15 percig.

Hűtse le, használja vagy tárolja hűtőszekrényben. A tápközeg végső pH-ja 7,2 ± 0,2.

A dehidrált táptalaj színe világos bézs, az elkészített táptalaj pedig világosbarna színű.

Felkészülés az erjedési vizsgálatokra

Az előző készítményhez - a sterilizálás előtt - a szénhidrátot 1% végkoncentrációban kell hozzáadni, plusz az Andrade indikátor (savas fuksin) vagy a fenolvörös (0,018 g / L). A csöveket fel kell szerelni egy Durham haranggal, hogy megfigyeljék a gázképződést.

A peptonvíz egyéb változatai

Pufferolt vagy pufferolt peptonvíz

Kazein, nátrium-klorid, dihidrogén-kálium-foszfát és nátrium-hidrogén-foszfát-dodekahidrát enzimatikus hidrolizátumát tartalmazza. A végső pH-érték 7,0 ± 0,2.

Előkészítéséhez mérjünk 20 g dehidrált tápközeget és oldjuk fel 1 liter desztillált vízben. Hagyja kb. 5 percig pihenni. Melegítsük 1 percig, amíg teljesen fel nem oldódik.

Öntsön megfelelő üvegekbe, ha szükséges. Sterilizáljuk autokláv segítségével 121 ° C-on 15 percig.

-Alkalin peptonvíz

Mérjünk be 25 g dehidrált közeget és oldjuk fel 1 liter vízben. A fentiek szerint járjon el. A pH 8,3 és 8,7 között van.

Használat

Az oltást úgy végezzük, hogy a mintát közvetlenül behelyezzük.

A minták hígítására használják, különösen akkor, ha feltételezik, hogy sérült baktériumok lehetnek. A hígítások általában 1:10 és 1: 100.

Inkubáljuk 24 órán keresztül aerobiosis-ban 35-37 ° C-on.

Székletminták

A Salmonella székletmintáinál pufferolt vagy pufferolt víz használata javasolt elődúsító közegként.

Ehhez az alábbiak szerint járjon el:

Ha a széklet kialakult, vegyen 1 g mintát. Ha folyékonyak, vegyen be 1 ml ürüléket és szuszpendáljon egy csőbe 10 ml pufferolt peptonvízzel. Rektális tamponok esetén ürítsük ki a tamponban lévő anyagot a csőbe pufferolt peptonvízzel.

Minden esetben nagyon jól keverjük össze és homogenizáljuk a mintát.

Inkubáljuk 37 ° C-on 18–24 órán át. Ezt követően szubkultúrálást egy dúsító táptalajban, például szelénit-cisztin-táptalajban vagy tetrationát-táptalajban 37 ° C-on még 18-24 órán át. Végül szelektív tápközegben szaporítsuk a szalmonellát, például az SS agart, az XLD agart, a Hektoen agart.

Ételminták

A peptonvizet dúsító közegként vagy egyszerű hígítóként használják, de ha Salmonella fajokat keresnek, akkor elődúsító közegként használják őket, ahogy azt már leírtuk.

Az élelmiszerben az alábbiak szerint járjon el:

Szilárd ételek esetén mérjük meg a 25 g mintát, a folyékony ételekhez mérjük meg a 25 ml-t. Helyezzük az említett részt 225 ml pepton vizet tartalmazó lombikba. Keverjük össze és homogenizáljuk a mintát.

Ha feltételezhetően magas a mikrobiális terhelés, sorozat- vagy decimális hígítások végezhetők a kolóniát alkotó egységek (CFU) számolásának megkönnyítése érdekében.

A hígítások száma a minta típusától és az elemző tapasztalatától függ.

Ha éppen ellenkezőleg feltételezik, hogy a mikrobiális terhelés nagyon alacsony, akkor nem kell hígítást végezni. Ezt követően szubkultúra a szelektív médiumon.

A tengerből származó ételek, például kagylók, halak, többek között a Vibrio cholerae vagy más Vibrio faj keresésére, 8,5 pH-ra beállított peptonvizet (lúgos peptonvíz) kell használni.

QA

Mindegyik elkészített tételből egy-két csövet oltás nélkül inkubálunk 24 órán át, aerobiosisban, 37 ° C-on. Az idő végén zavarosságot vagy színváltozást nem szabad megfigyelni.

Az ismert kontroll törzsek felhasználhatók hatékonyságuk felmérésére:

Ehhez a következő baktériumtörzsek használhatók: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Minden esetben kielégítő mikrobiális fejlődés várható, amelyet a táptalaj zavarossága megfigyel.

korlátozások

-A dehidratált közeg nagyon higroszkópos, ezért a nedvességtől távol kell tartani.

-A közeget nem szabad használni, ha bármilyen típusú romlás figyelhető meg.

-A dehidratált tápközeget 10–35 ° C hőmérsékleten kell tárolni

- Az elkészített tápközeget hűtve kell tartani (2–8 ° C).

Irodalom

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B és Velázquez O. Az élelmiszerek mikrobiológiai elemzésének technikái. 2009, 2. kiadás UNAM Kémiai Kar. Mexikó. Az UNAM Kémiai Kar kézikönyveinek és dokumentumainak adminisztrátorainak verziója (AMyD). Elérhető a következő címen:
2. Britannia Laboratories. Pufferelt peptonvíz. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Peptone víz. Elérhető a következő címen: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Peptone víz. 2015.Attól elérhető: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Pufferolt peptonvíz. Elérhető a merckmillipore.com oldalon
6. Conda Pronadisa Laboratories. Lúgos peptonvíz. Elérhető a következő címen: condalab.com
7. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.