A Rose Bengal laboratóriumi vizsgálat antigén-antitest reakción alapul brucellózis diagnosztizálására. Ez a módszer lehetővé teszi a Brucella abortus baktérium elleni specifikus ellenanyagok kimutatását az emberi szérum mintákban. Az eredmény kvalitatív vagy félkvantitatív módon jelenik meg.
A kvalitatív forma kifejezi, hogy a beteg pozitív vagy negatív-e a teszt szempontjából, azaz hogy vannak-e antitestek vagy sem. Eközben a félkvantitatív jelentést NE / ml-ben adják meg, és megmutatják a jelenlévő antitestek hozzávetőleges mennyiségét. Meg kell jegyezni, hogy antitestek csak akkor állnak elő, ha a beteg kapcsolatba került a mikroorganizmussal.
Bengáli rózsa reakció agglutinációs lemezen. Forrás: a videóról vett felvétel
Nagyszerűségének, nagy érzékenységének és specifikusságának köszönhetően ez az egyik olyan szerológiai agglutinációs technika, amelyet a gyógyászatban leggyakrabban használnak e betegség diagnosztizálásának kezdeti tesztjeként.
Egyes kutatók összehasonlították a bengáli rózsa teszt hatékonyságát más technikákkal, mint például a seroaglutáció (lázas antigének), és megfigyelték, hogy jó korreláció ellenére is láttak olyan eseteket, amikor a lázas antigén teszt negatív volt, és Rose de Pozitív fáklya.
A kapott különbség annak volt köszönhető, hogy ezeknek a betegeknek a Brucella abortus elleni IgG antitestek alosztálya volt jobb kötőképességgel savas pH-nál, így képesek voltak reagálni a Rózsa-Bengál reagenssel, de a lázas antigénekkel nem.
Ebben az értelemben azt javasolták, hogy a lázas antigén technika reagenseit savas pH-ra módosítsák, hogy az ilyen típusú esetek kimutathatók legyenek.
bázis
A bengáli rózsa reagens antigén szuszpenzióból áll. A Brucella abortus S99 törzséből áll, amelyet savas laktát pufferben (pH = 3,6) hígítanak, valamint fenolt és a rózsa-bengáli festéket tartalmaz.
Ezért a mintában a Brucella elleni antitestek keresendők, ha vannak ilyenek, reagálnak a reagens antigénnel, és egy makroszkopikusan látható agglutinációs reakciót lehet megfigyelni. A teszt vagy IgM antitesteket, vagy IgG antitesteket detektál.
Ez azt jelenti, hogy képes kimutatni a betegséget mind akut stádiumában, ahol az IgM ellenanyagok dominálnak, mind krónikus stádiumában, ahol az IgG antitestek dominálnak.
Ez előnyt jelent, mivel növeli a teszt érzékenységét, ugyanakkor hátrányt jelent, mivel nem tesz különbséget az egyik és a másik szakasz között, mivel az IgM és IgG ellenanyagokkal végzett reakció azonos.
A tesztet mindig negatív és pozitív kontrollokkal együtt kell elvégezni. A negatív kontroll állati szérumot tartalmaz ellenanyagok nélkül, a pozitív kontroll állati eredetű szérumot tartalmaz 50 NE / ml anti-Brucella ellenanyagokkal.
Használat
A brucellózis súlyos betegség, amely általában krónikus és veszélyes, ezért nagyon fontos, hogy korán diagnosztizálják. Ez egy zoonózis, és az emberek megfertőződhetnek a szennyezett anyaggal való közvetlen érintkezés révén, a legkiszolgáltatottabbak az állatorvosok és az állatok gondozói.
A fertőzés fertőzött nyers hús evésével is előfordulhat, ideértve a fertőzés egyéb formáit is.
Ez a betegség lokálisan vagy szisztémásan támad. A szisztémás forma a legsúlyosabb, mivel számos szerv befolyásolhatja, beleértve a retikulum endothel rendszerét (máj, lép, csontvelő), a bőrt (cellulitis és lymphadenopathia), légzőrendszert (pneumonia), izom-csontrendszert (arthritis, sacroiliitis és spondylitis).
A Rose Bengal teszt egy nagyon hasznos módszer a kezdeti szűrés elvégzéséhez, mivel nagyon olcsó, könnyen használható, nagy specifitással és érzékenységgel rendelkezik.
A hamis negatív és a hamis pozitív esetek nagyon ritkák, és előfordulhatnak olyan embereknél, akiknek antitest titere nagyon alacsony (<25 NE / ml) vagy rendkívül magas (> 1000 NE / ml).
Folyamat
anyagok
-Róz Bengáli készlet
-Aglutinációs lemez fehér háttér
-50 µl pipetta
-Rotátor (opcionális)
-Örvény
Technika (kvalitatív módszer)
A kereskedelmi forgalomban kapható Rose Bengal készletek felhasználásra kész reagensekkel készülnek.
-Működtesse a reagenseket a munka megkezdése előtt.
- Az agglutinációs lemezeken körök vannak húzva, mindegyik eltérő mintához. Használjon 3 kört, az első a negatív kontrollhoz, a második a mintahoz és a harmadik a pozitív kontrollhoz.
- Helyezzen egy csepp vagy 50 µl kontrollokat és a mintát a megfelelő körbe.
- Vortex segítségével keverje össze a rózsa-bengáli reagenst. Helyezzen egy csepp a korábban elhelyezett.
- Keverje össze fa fogpiszkálóval (mindegyik mintához vagy kontrollhoz használjon egyet). Készítsen kör alakú mozdulatokat, és terjessze úgy, hogy az egész kört lefedi.
Forrás: a videóból készített képek: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Szerkesztett kép elrendezése.
- Helyezze a lemezt egy automatikus forgatókészülékre 80–100 ford / perc sebességgel, vagy forgassa kézzel 4 percig. Olvassa el a bizonyítékot az idő végén.
- Ellenőrizze, hogy a kontrollok a várt módon adtak-e. Hasonlítsuk össze a tesztminta reakcióját a kontrollokkal. A jelentést pozitívnak kell tekinteni, ha agglutinációt észlelnek, és negatívnak, ha nincs agglutináció.
A pozitív teszt azt jelzi, hogy a beteg 25 NE / ml-es vagy annál nagyobb mennyiségű anti-Brucella antitestet tartalmaz.
Pozitív (agglutinációval) és negatív (agglutináció nélkül) reakció értelmezése. Forrás: Citrulline. Szerkesztett kép.
Technika (félkvantitatív)
Ha a kvalitatív reakcióban a minta erősen pozitív, akkor félig kvantitatív módon meghatározható. Ehhez a mintát sorozatos, kétszer hígítják fiziológiás sóoldattal. Az előzőekben ismertetett eljárást minden hígítással elvégezzük.
Az agglutináció makroszkopikus megfigyelésével is értelmezhető. Az eredmény a legmagasabb hígítás titerje, amelyben pozitív eredményt figyeltek meg.
Az anti-Brucella antitestek hozzávetőleges értékének kiszámításához a következő képletet kell használni:
25 NE / ml x reakciótiter = NE / ml
Példa: ha a fél kvantitatív tesztben a beteg a ½, ¼ és 1/8 hígításnál pozitív eredményt mutat, és az 1/16 hígítástól kezdve negatív, ez azt jelenti, hogy a beteg titere 8.
A képlet alkalmazása:
25 NE / ml x 8 = 200 NE / ml
QA
-A készletek lejárati dátummal rendelkeznek, és azt be kell tartani. Nem szabad használni, ha a reagens lejárt.
- Használat közben ellenőrizze, hogy a reagens nem tartalmaz-e szilárd részecskéket, mivel ez a romlás jele.
- 2 és 8 ° C között tartsuk.
-Ne fagyasztható, ez a csekély módon károsítja a reagenst.
- Mindig végezze el a tesztet a negatív és a pozitív kontrollokkal együtt.
- A technika tolerálja a szérummintákat bizonyos fokú lipemiával és hemolízissel, azonban nem ajánlott túlzottan lipemikus és hemolizált szérumok használata, mindkét feltétel megváltoztatja a teszt eredményét.
- Az elemzés megkezdése előtt a reagenseket szobahőmérsékletre kell hagyni.
- Ne értelmezze az ajánlott időnél hosszabb reakciókat, mivel ez téves pozitív jelentést generál, mivel egy bizonyos idő elteltével a reagens kicsapódik, és a pozitív reakciót szimulálja.
-A technika 100% -ban érzékeny és 98% -os specifitással rendelkezik.
- Az 1000 NE / ml félig kvantitatív meghatározása után lehetőség van megfigyelni egy prozon-hatást (hamis negatív az antitestfelesleg miatt az antigének mennyiségéhez viszonyítva).
Irodalom
- Rubio M, Barrio B és Díaz R. A Rosa de Bengal, Coombs és az immunoelektroforézis teszt értéke az emberi brucellózis eseteinek diagnosztizálására, amelyekben a szérum agglutináció negatív. Mikrobiológiai Tanszék. Klinikai Mikrobiológiai Szolgálat. Egyetemi Klinika. Navarrai Egyetem. 406-407. Elérhető a elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas oldalon
- "Brucellosis." Wikipédia, a szabad enciklopédia. 2019. december 6, 14:37 UTC. 2019. december 18, 18:09 en.wikipedia.org.
- Monlab Laboratories. Monlab Bengáli Rózsa - teszt. 2016. Elérhető a következő címen: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Peru tisztelete. Med. Exp. Közegészségügy 1997; 14 (1): 63-66. Elérhető a scielo.org oldalon
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. A brucellózisos család klinikai, szerológiai és polimeráz láncreakciójának nyomon követése. Rev. chil. Infectol. 2014 31 (4): 425-433. Elérhető a scielo.conicyt oldalon.