BAKTERIÁLIS KULTÚRA: TÍPUSOK, JELLEMZŐK, MÓDSZEREK, KÖVETELMÉNYEK - BIOLÓGIA - 2026

A baktériumtenyésztés ezen mikroorganizmusok tápanyagokra történő vetése eredményeként szaporodnak, ami baktériumtelepek megjelenését szilárd közegekben és zavarosságot eredményez folyékony közegekben.

A vetési módszer nagyon fontos ahhoz, hogy az oltóanyagot eloszlassuk oly módon, hogy a jelenlévő baktériumok diszpergálódjanak és megfelelően izolált kolóniákat képezzenek.

Különböző növények, amelyeket a szerző ültet a Carabobo Egyetem Biomedicinális és Technológiai Tudományok Épületének Bakteriológiai Laboratóriumába. Forrás: az MSc szerző által készített fényképek összetétele. Marielsa Gil.

A szilárd tápközegben kapott kolóniák a beoltott mikroorganizmus szaporodásának következményei. Minden kolónia egyetlen baktériumból indul, amely exponenciálisan szaporodhat és makroszkopikusan látható populációt képezhet.

Ugyanez történik a folyékony táptalajokban, de ebben az esetben a baktériumok növekedését zavarosság követi meg.

A baktériumok növekedése akkor lehetséges, ha a választott táptalaj megfelel az adott baktérium fejlődéséhez szükséges táplálkozási és pH-feltételeknek. Ezenkívül ellenőrizni kell más változókat is, például a hőmérsékletet, az inkubációs időt, az oxigénkoncentrációt, a CO ₂ -ot.

Nem minden baktériumpopulációra van szükség ugyanazokra a követelményekre, bár néhányuk szinte mindenkinek közös, például hogy a tápközeg peptoneket tartalmaz, az is igaz, hogy vannak igényesebb mikroorganizmusok, amelyek további speciális anyagokat igényelnek, úgynevezett növekedési faktorokat.

Például megemlíthető, hogy néhány Haemophilusnak szüksége van X faktor (hemin) és V faktor (NAD) jelenlétére a növekedéshez.

A baktériumkultúrák típusai

A baktériumtenyészetek lehetnek polimikrobiálisak, tiszták vagy vegyesek.

Polimikrobiális baktériumtenyészetek

A polimikrobiális tenyészetek olyan minták vetéséből származnak, amelyeket egy olyan helyről nyernek, amelynek normál mikrobiota van, ahol egy bizonyos kórokozó is megtalálható.

Példa: A torokminták kultúrájának kialakításakor olyan kórokozó található, mint például a Streptococcus pyogenes, ám ezt a területet közös mikrobióta kíséri.

Ebben az esetben elengedhetetlen a jó húzás, hogy lehetővé váljon a különféle baktériumtípusok szaporodása.

A Streptococcus pyogenes törzsével kompatibilis kolóniát óvatosan megérintjük a platinahurokkal, majd egy szűz tenyésztő tápközegbe ültetjük, és így kapjuk meg a mikroorganizmus tiszta tenyészetét.

Ebből a tiszta tenyészetből a baktériumok azonosításához szükséges összes vizsgálat elvégezhető.

Tiszta baktériumtenyészet

A mikroorganizmus hatékony azonosítása érdekében tiszta kultúrából kell dolgozni.

Tiszta tenyészeteket lehet előállítani, mint az előző példában, a polimikrobiális tenyészet izolált kolóniájának újratelepítésével, vagy ha egy normál esetben steril helyről származó mintát ültetnek, és csak egy kórokozó létezik (egyetlen baktérium típusa). Példa: amikor CSF-t vetnek be egy bakteriális meningitisben szenvedő betegtől.

Egy másik módszer a régi tiszta kultúrából való visszalépés, ha megújult tiszta kultúrát kapunk.

Vegyes baktériumtenyészetek

Ezek a tenyészetek a természetben előforduló mikroorganizmusok keverékéből állnak. Egyes ipari folyamatokban a vegyes kultúrák használata kényelmes.

Több tiszta kultúra egyesítésével nyerhető, mivel ezek lehetővé teszik a baktériumok kölcsönös kapcsolatának tanulmányozását.

Hasznosak például a xenobiotikumok lebontásában az ipari szennyvízben, mivel biológiailag lebomló anyagokként működnek.

A baktériumtenyészetek jellemzői

A baktériumtenyészetekben kapott kolóniák morfológiai tulajdonságai nagyon változatosak lehetnek.

A telepek nagyon kicsik, közepesen nagyok vagy nagyok, száraznak vagy mucoidnak, fényesnek vagy tompanak tűnhetnek. A textúrától függően változhat sima és durva között, és az alaktól függően kör alakú, lapos, domború lehet.

A színtől függően ezek lehetnek: színtelen, fehér, sárga, rózsaszín, fuksia, piros, narancs, bézs, szürkés, zöldes, barna, fekete vagy fémes fényűek, az érintett baktériumoktól és a használt táptalajtól függően.

A kolóniák határok lehetnek szabályosak vagy szabálytalanok. Másrészt viszont egységes filmet mutathatnak be, amelyet szinte az egész közegben eloszlatnak, úgynevezett „rajzásnak”. Ez jellemző a Proteus sp.

Egyes baktériumkultúrák olyan szagot bocsátanak ki, amely nagyon jellemző az érintett fajokra. Például a Pseudomonas aeruginosa kultúrájának jellegzetes gyümölcsszagja van, míg a Proteus nemzetségnek jellegzetesen tompa illata van.

Példák telepekre méretük szerint

Rendkívül kicsi: Mycoplasma pneumoniae, Francisella tularensis.

Kicsi: Streptococcus sp, Enterococcus sp.

Közepes: Enterobacteriaceae család

Nagy: Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa.

Példa a telepekre megjelenésük szerint

Száraz: Lactobacillus confusus.

Mucoidok: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Ragyogó: Klebsiella pneumoniae.

Átlátszatlan: Enterococcus faecalis, néhány Neisseria gonorrhoeae törzs.

Példák telepekre textúrájuk szerint

Sima telepek: Micrococcus luteus

Durva telepek: Sarcina ventriculi tápanyag-agaron.

Példa a kolóniák alakjuk szerint

Körlevelek: Listeria murrayi és Micrococcus luteus tápanyag agaron.

Lapos: Staphylococcus equorum a tápanyag agaron.

Domború: Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae.

Példa a telepekre a határok szerint

Lekerekített él: Staphylococcus aureus, Escherichia coli.

Szabálytalan határ: Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa.

Lobed élek: Bacillus sp.

Példa a kolóniákra színük szerint

Átlátszó vagy színtelen: Shigella sp az XLD agaron.

Fehér: Staphylococcus hominis vér agaron.

Bézs: Bacillus sphaericus és Lactobacillus confusus a tápanyag agaron.

Sárga: Staphylococcus aureus és Elizabethkingia meningoseptica vér agaron, Pediococcus sp, Staphylococcus lentus tápanyag agaron, Rózsaszín: Escherichia coli XLD agaron, Micrococcus roseus tápanyag agaron.

Fukszia: Escherichia coli a Mac Conkey agar agarján.

Ibolya: Chromobacterium violaceum.

Vöröses: Serratia marcescens szobahőmérsékleten tápanyag agaron.

Narancs: Kurthia zopfii tápanyag-agaron.

Szürkés: Sporosarcina karbamid talajkivonat-agarban.

Zöldes: Pseudomonas aeruginosa a BHI agaron.

Barna: Enterococcus sp az epe-esculin agarban.

Fekete: Salmonella enteritidis SS agaron.

Fémes csillogással: Escherichia coli az Endo agaron.

Bakteriális tenyésztési módszerek

Fakultatív aerob vagy anaerob baktériumtenyésztés

Ez a legszélesebb körben alkalmazott termesztési módszer. Ennek oka az a tény, hogy elsősorban az emberre patogén baktériumok többsége aerob vagy fakultatív anaerob; másrészt sokkal olcsóbb és könnyebb, mint az anaerob tenyészetek. Példa: Mycoplasma pneumoniae és Escherichia coli.

Anaerob baktériumtenyészet

Az ilyen típusú tenyészet teljes oxigénelnyomást igényel. Az anaerob baktériumok tápközegeinek általában redukáló anyagokat kell tartalmazniuk, mint például: aszkorbinsav, tioglikolát, cisztein vagy kén a levegőben lévő oxigén toxikus hatásainak kiküszöbölésére.

Néhány olyan mutatókat tartalmaz, mint például a rezazurin, amely oxigén jelenlétében kék és anaerobiosis során színtelen. Példa: Clostridium tetani.

Bakteriális tenyészet mikroaerofíliában

A tenyésztő lemezeket egy mikroaerofil burkolatba helyezzük, meggyújtott gyertyával, befedve. A gyertya elfogyasztja az oxigént és kialszik. Ebben az állapotban néhány baktérium nő, például a Streptococcus sp.

Anyagok és követelmények

anyagok

A baktériumtenyészet elvégzéséhez a következő anyagok szükségesek: Petri-csészék vagy csövek tápközeggel vagy tápközeggel, platinahurok, minta, Bunsen-égő vagy sütő.

A baktériumtenyésztés elvégzésének követelményei

A baktériumok tenyésztése számos olyan elemet igényel, amelyeket figyelembe kell venni, például a táptalajok a közegben, pH, hőmérséklet, oxigénkoncentráció, CO2, páratartalom.

Tápanyagok

A baktériumtenyészetekhez makroelemeket és mikroelemeket tartalmazó táptalajokra van szükség. A makroelemek közül megemlíthetők szerves anyagok, például peptonok, aminosavak, szénhidrátok, mint szénforrások és nitrogén.

A mikroelemek között szerepel többek között a szervetlen anyagok vagy nyomelemek: mangán, cink, nikkel, bór, klór, szelén, szilícium, kobalt, réz.

Hidrogén-ion koncentráció (pH)

A hidrogénionok (H ⁺) és a hidroxilionok (OH ^-) koncentrációja a tápközegben, ahol a tenyészet fejlődik, létfontosságú, mivel ezek meghatározzák a pH-t.

A leggyakrabban használt pH semleges (pH = 7,0), lehetnek olyan közegek is, amelyekben savas vagy lúgos pH-érték megfelelő, például ha egy acidofil vagy alkalifil baktériumot akarunk izolálni.

Hőfok

A hőmérséklet nagyon fontos tényező, amely befolyásolja a baktériumtenyészet növekedését. A baktériumok lehetnek pszichofiliek (20 ° C alatti hőmérsékleten nőhetnek, mezofil (20 ° C és 42 ° C között), termofil (40 ° C – 70 ° C), hipertermofilok (70–105 ° C).

Oxigénigény

Aerob: növekszik oxigén jelenlétében.

Mikroaerofil: növekednek 5-10% CO ₂ jelenlétében .

Szigorú anaerobok: növekszik oxigén hiányában.

Fakultatív anaerobok: növekszik oxigén jelenlétében vagy anélkül.

Légterelő: jól növekednek oxigén nélkül és kevés oxigént tolerálnak.

Kulturális média

A tápközegek speciális táplálkozási készítmények, amelyeket laboratóriumban készítenek mikrobiális növekedés vagy tenyészet elérésére. Ezeknek a közegeknek a konzisztenciája, összetétele és működése eltérő. Minden laboratórium elkészíti az igényeiknek megfelelő tápközeget.

Bakteriális kultúra gyűjtemény

Vannak intézmények vagy szervezetek, amelyek elkötelezettek a klinikai, környezeti vagy ipari jelentőségű baktériumtörzsek gyűjtése, jellemzése, fenntartása és terjesztése mellett.

Ezeket a törzseket kutatási munkákhoz és a tápközeg minőségének ellenőrzéséhez használják.

Példa: az American Type Culture Collection törzsek, a venezuelai mikroorganizmus-gyűjtő központ (CVCM) és a Kuba Országos Higiéniai, Epidemiológiai és Mikrobiológiai Intézetének (INHEM) törzsei.

Irodalom

1. Benavides G, Hermida A. A natív baktériumflóra izolálása és azonosítása a Cruz Verde és a Guasca páramos talajából. (Cundinamarca). 2008. Bogotá. Elérhető a javeriana.edu.co/biblos oldalon
2. Hans S. Általános mikrobiológia. Omega kiadások. 1991. Barcelona, ​​Spanyolország. Elérhető a következő webhelyen: biolprocariotas.files
3. Weng Z, Junco R., Díaz R. Mikrobiális tenyészetek gyűjteménye: Megjegyzések fejlődésükről. Cubana Rev Epidemiol, 2003; 41 (1). Elérhető a következő címen: scielo.sld.cu/scielo.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
5. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.