KUKORICALISZT AGAR: HÁTTÉR, ELŐKÉSZÍTÉS ÉS FELHASZNÁLÁS - BIOLÓGIA - 2026

A kukoricadara agar szilárd tápközeg, alacsony táplálkozási képességgel rendelkezik, felhasználható bizonyos gombák altenyésztésére és a Candida albicans komplex törzseiben található chlamydospórák kimutatására. Angolul Corn Meal Agar néven ismert.

A hagyományos kukoricadara közeg nagyon egyszerű összetételű, kukoricadara, agar-agart és vizet tartalmaz. Alacsony táplálkozási szintje miatt ideális a gombás törzsek, különösen a fekete gombák fenntartásához mérsékelt ideig.

A. A Candida albicans komplex grafikus ábrázolása a kukoricaliszt agaron. B. A Candida albicans komplex chlamydospórái, mikroszkóp alatt látva, kukoricadara agaron. Forrás: A. GrahamColm / B. Írta: CDC / Dr. William Kaplan, jóvoltából: Közegészségügyi Image Library.

Ebben a közegben a Candida albicans komplex sporulációja kedvező, ha a agar előállítása során a Tween 80 1% -át adjuk hozzá. A chlamydospórák kialakulása e fajra jellemző, és gyakorlatilag az egyetlen, amely az embereket érinti.

Vannak más fajok is, amelyek chlamydospores képeznek, de valószínűtlen, hogy befolyásolják az embereket, mint például a pingvin ürülékében jelen lévő Candida australis vagy a ritkán előforduló szaprofit C. clausenii. Hasonlóképpen, kivételesen a C. stellatoidea és a C. tropicalis fajok képezhetik őket.

Másrészről, a glükóz hozzáadása a kukoricadara táptalajhoz elősegíti a pigmentek képződését a Trichophytom rubrum törzsekben.

Fontos kiemelni, hogy vannak olyan gombák, amelyek nem képeznek hyphae vagy pseudohyphae-t a kukoricadara-agarban, például a Cryptococcus neoformans, amelyek különböznek a többi nemzetségtől.

A kukoricamag-agar elkészíthető otthon a laboratóriumban, vagy kereskedelmi közegek is felhasználhatók.

bázis

A kukoricadara a szubsztrát, az agar a megszilárdító anyag, a víz az oldószer.

A kukoricamag-agart tween 80-dal (szorbitán-monooleát vagy poliszorbát-poliészter 80) lehet kiegészíteni. Ez a vegyület emulgeáló ereje miatt csökkenti a közeg felületi feszültségét.

Ez egy olyan ellenséges környezetet is létrehoz, amely gátolja a túlzott sejtszaporodást és serkenti a hyphae növekedését, ugyanakkor elősegíti a chlamydospórák termelődését; ez utóbbi az ellenállás szerkezeteit tekintette meg. Ez a szerkezet segíti a Candida albicans fajok azonosítását.

A glükóz ebben a közegben maga növeli egyes gombák pigmentképző képességét.

Meg kell jegyezni, hogy a kukoricadara tápközeg glükózzal nem használható chlamydospórák kimutatására a Candida albicans komplexben.

Készítmény

Házi kukoricadara készítés

Mérjünk ki 47 g sárga kukoricaliszt és oldjuk fel 500 ml desztillált vízben. Melegítsük 60 ° C-ra, miközben a készítményt körülbelül 1 órán át keverjük. Ezután szűrjük át egy darab gélen és pamuton, adott esetben újra szűrhetjük úgy, hogy a készítményt Whatman No. 2 szűrőpapíron vezetjük.

Töltsük fel 1000 ml-re desztillált vízzel. Adjunk hozzá 17 g agar-agart, melegítsük feloldódásig. Autokláv 15 percig 121 ºC-on.

Tálaljuk steril Petri-csészékben. Hűtőszekrényben tárolandó.

Az elkészített közeg színe fehéres és pontyos.

Ha a fent leírt készítményhez glükózzal kíván készíteni kukoricaliszt, adjon hozzá 10 g glükózt.

Kereskedelmi kukorica liszt agar

Mérjünk be 17 g dehidratált közeget és oldjuk fel 1 liter desztillált vízben. A keveréket melegíthetjük, óvatosan rázva, hogy teljesen feloldódjon. Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on, 15 fontnál, 15 percig.

Öntsön steril Petri-csészékbe. Hagyja megszilárdulni. Fordítsa meg és tárolja a hűtőszekrényben felhasználásig. Használat előtt be kell hűteni.

A pH-nak 25 ° C-on 6,0 ± 0,2-nek kell lennie.

Kukoricaliszt agar Tween 80-dal

Az ISO 18416 szabványnak való megfelelés érdekében a kukoricadara agart az alábbiak szerint kell elkészíteni:

Mérjünk be 65 grammot literben, és adjunk hozzá 10 ml Tween 80-at. Melegítsük és forraljuk néhány percig, amíg fel nem oldódik, ügyelve arra, hogy ne túlmelegedjenek. Sterilizáljuk 121 ° C-on 15 percig.

Kukoricaliszt agar glükózzal

A Trichophyton rubrum telepek kromogén erejének javítása és a T. mentagrophytes-től való megkülönböztetés céljából 0,2% glükózt adhatunk az eredeti képlethez. Nincs szükség Tween 80-ra, mivel a glükóz gátolja a chlamydospórák képződését.

Használat

Elsősorban a kukoricaliszt-agar felhasználását a Candida törzsek vizsgálatára szánják, elősegítve azok azonosítását az albicans fajokban a chlamydospórák jellegzetes megfigyelése révén. Vagyis ennek az agarnak az alkalmazása az ezen élesztők azonosításának kiegészítő módszerét szolgálja.

Ezen a agaron mind szafitikus, mind patogén fajok fejlődhetnek, de mindegyik jellegzetes micélium-szerkezetet képez. Például a Torulopsis nemzetség fajai nem termelnek micéliumot és csak blastoconidia által szaporodnak.

Hasonlóképpen, a Trichosporon és a Geotrichum fajok artroconidia-kat termelnek a kukoricaliszt agaron, és néha nehéz megkülönböztetni egymást.

A Geotrichum nemzetség Arthroconidia a jégkorong-botra emlékeztető hifák kiterjesztését eredményezi.

A Trichophytom rubrum azonosításához szintén hasznos a pigmentek előállítása glükózzal kiegészített kukoricaliszt-agar felhasználásával.

elvetett

Az elsődleges táptalajban - Sabouraud agarban - a klinikai mintákból, kozmetikumokból és talajokból nyert gyanús Candida kolóniákat, többek között, szubkultúrázzák a kukoricaliszt agaron. A tápközeget oltottuk és inkubáltuk 22 ° C-on 24-48 órán át. Az inkubációs idő meghosszabbítható, ha szükséges.

Chlamydospore demonstráció

Ebből a célból a Tween 80-at tartalmazó kukoricaliszt-agart Dalmau módszerrel kell beoltani. Ez a módszer abból áll, hogy a gyanús kolónia egy részét a platina fogantyúval vesszük, és három párhuzamos vágást végezzünk közepén, a fogantyút 45 ° -on tartva. A darabokat egymástól 1 cm távolságra kell elválasztani.

Ezt követően egy korábban lángolt burkolatot helyeznek az elültetett csíkokra úgy, hogy a felét lefedik, a másikat pedig nem fedik le.

Inkubálja a beoltott lemezeket 30 ° C-on 48-72 órán keresztül, majd mikroszkóp alatt vizsgálja meg a fedőlemezt.

Gomba törzsek fenntartása

A törzsek fenntartása érdekében a beoltott és megnövelt lemezeket hűtőszekrényben tartják (4–8 ° C). Ilyen módon több hetet is igénybe vehetnek és felhasználhatók oktatási vagy kutatási célokra.

QA

A sterilitás ellenőrzése céljából egy lemezt szobahőmérsékleten oltás nélkül inkubálunk, várhatóan nem lesz növekedés vagy színváltozás.

A minőség-ellenőrzés céljából ismert törzseket vethetünk, mint például: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

A várt eredmények a S. aureus és az E. coli részleges gátlása. Noha a törzsek többi részén kielégítő növekedés várható.

Az Aspergillus niger fekete és spórás telepekkel növekszik körülbelül 5 napos inkubációs idő alatt.

Candida albicans élesztőcsaládok chlamydospóratermeléssel.

A Saccharomyces cerevisiae nagy élesztősejteket termel.

korlátozások

A lemez alján sárga csapadék képződik, amelyet nem szabad összekeverni a kolóniákkal.

Irodalom

1. Neogen Laboratories. Kukoricaliszt agar. Elérhető a következő címen: foodsafety.neogen.com.
2. Culture Media Microkit. Kukoricaliszt agar. Elérhető a Medioscultivo.com oldalon.
3. Linares M., Solís F. Élesztő azonosítási útmutató. Elérhető a következő címen: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Közegészségügy, 2002; 19 (4): 206-208. Elérhető a Scielo.com oldalon
5. Casas-Rincón G. Általános mikológia. 1994. Venezuelai Központi Egyetem 2. kiadása, könyvtári kiadások. Venezuela Caracas.
6. Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Bailey és Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. kiadás Szerkesztő Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. A Candida nemzetség izolálására és felismerésére szolgáló néhány makro- és mikroszkópos módszer összehasonlító vizsgálata. Kolumbiai Rev. of Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33-57. Elérhető a Ciencias.unal.edu.co oldalon