A TÁPTALAJ ELŐKÉSZÍTÉSE: CÉLOK ÉS LÉPÉSEK - BIOLÓGIA - 2026

A tápközeg előállítása rutin módszer, amelyet laboratóriumokban használnak a kívánt mikroorganizmusok szaporítására. A tápközegek szilárd, folyékony vagy félszilárd készítmények, amelyek minden szükséges tápanyagot tartalmaznak a mikrobiális populáció kialakulásához.

Általában véve a mikroorganizmusok tenyésztésére szolgáló eszközök gazdagok fehérjékben és aminosavakban, és általában tartalmaznak olyan összetevőket, amelyek elősegítik a vizsgált szervezet növekedését, például vitaminokat, vért, szérumot.

Forrás: pixabay.com

Nincs általános vagy univerzális táptalaj, mivel összetétele változik a kérdéses mikroorganizmus igényeitől függően. Egyes baktériumok bármilyen táptalajon növekedhetnek, de másoknak speciális követelményeik vannak.

Miből áll?

A mikroorganizmusok, például a gombák és baktériumok, apró méretük miatt nem vizsgálhatók külön-külön. Ezért azokat mesterségesen kell termeszteni, amelyek lehetővé teszik a populáció jelentős növekedését.

Például, ha baktériumokat akarunk tanulmányozni, akkor megfelelő feltételeket kell biztosítani számukra, hogy szaporodjanak és kolóniát képezzenek (amelyet szabad szemmel meg lehet figyelni).

A tápközeg előállítása nagyban változik, a mikroorganizmus típusától függően. Előkészítése előtt meg kell ismerni a munkaorganizmus alapvető táplálkozási igényeit.

A tápközegben leggyakrabban használt összetevőket az alábbiakban ismertetjük, hogy általános képet kapjunk előállításukról:

agar

A tenyészetekben gélesítőszerként használják, és szilárd vagy félszilárd közeg keresésekor adják hozzá. Az első szilárdítószer, amelyet a táptalajok előállításához használt, a zselatin volt, de 1883-ban agart vezettek be a bakteriológia világába W. Hesse.

A bakteriológiai agar fő alkotóeleme egy algákból kivont komplex ágakkal rendelkező poliszacharid. Ezt a vegyületet sűrítőszerként használják a közönséges ételekben, például fagylaltban és lekvárokban.

Ez több szempontból is nagyon értékes elem a mikrobiológiában. Főként azért, mert a mikroorganizmusok nem tudják lebontani, 100 ° C hőmérsékleten cseppfolyósodik, és folyékony állapotban marad, amíg el nem éri a 45 ° C-ot.

Abban az esetben, ha szilárd tápközeget kíván előállítani, az agarkoncentrációnak 1,5% körül kell lennie, míg a félszilárd anyagnak 0,3% és 0,5% között kell lennie.

folyadékok

A patogén organizmusok termesztéséhez testnedvekre van szükségük, hogy azok természetes fejlődésükhöz hasonlóan fejlődjenek. Ezért egész vagy defibrillált vért adunk hozzá. A folyadékot egészséges állatból veszik, és sterilizálás után hozzáadják a tápközeghez.

szemelvények

Különböző állati részekből (például hús vagy máj) vagy zöldségből (magból) nyerik őket, és feldolgozásuk során szilárd koncentrátumot kapnak paszta vagy por formájában. A leggyakoribb az élesztő, a maláta és a hús.

peptonokról

Ezeket a szerves vegyületeket állati vagy növényi szövetek enzimes vagy kémiai hidrolízisével nyerik. A cél az aminosavakban gazdag tartalom hozzáadása, amelyek a fehérjék alapvető egységei.

Lengéscsillapítók

A "puffer" vagy puffer rendszer elkerüli a hirtelen pH-változásokat, és segít fenntartani az optimális tartományt, amelyet a test tolerál.

A legtöbb organizmus jól fejlődik 7-es pH mellett, bár egyes baktériumok inkább az lúgos közeget részesítik előnyben. Vannak olyan baktériumok, amelyek ellenállnak a 6 és 9 közötti pH-ingadozásoknak.

A pH-érzékeny fajoknál a károsodást nem a túl sok hidrogén- vagy hidroxilion-mennyiség okozza, hanem a sejtbe belépő gyenge savak vagy bázisok növekedése.

Hasonlóképpen, pH-mutatókkal egészítjük ki annak figyelésére és az erjesztés vagy más folyamatok okozta eltérések elkerülésére.

célok

A tápközeg elkészítésének fő célja az összes szükséges összetevő hozzáadása a szervezet sikeres fejlődésének elkülönítéséhez. Meg kell határozni az összetevők és a tápanyagok leghatékonyabb kombinációját a kívánt tápközeg eléréséhez.

A tápközeg előkészítése és tárolása egyaránt kritikus jelentőségű a sikeres növekedés biztosítása érdekében, mivel a tápközeg összetétele és a tápanyagok rendelkezésre állása ettől a lépéstől függ.

Figyelembe kell venni, hogy a mikroorganizmusok tenyésztése olyan feladat, amelyet a tápközegen kívüli számos tényező befolyásol, például a kapott fény intenzitása, hőmérséklete és a savasság szintje vagy a táptalaj lúgossága. Ezért ezeket a változókat mindenképpen figyelembe kell venni.

Média típusok

Összetétele alapján

Összetételük alapján a növények három fő típusa létezik: természetes vagy empirikus, félig szintetikus és meghatározott szintetikus vagy kémiai közegek.

Természetes környezet

Természetes környezetben a pontos összetétel nem ismert. Ide tartoznak az olyan összetevők, mint a tej, a híg vér, a zöldséglevek, a húsok és a peptonok kivonata és infúziója. Gazdasági okokból gyakran olcsó összetevőket, például szójakivonatot, savót, melaszt stb. Adnak hozzá.

Félszintetikus közegek

Félszintetikus közegnek nevezzük, ha összetétele részben ismert. Bármely táptalaj, amely agart tartalmaz, félszintetikus közeggé válik.

Közöttük többek között burgonya-dextróz-agar, czapek-dox-agar, zab-agar, hús-pepton-agar.

Szintetikus vagy kémiailag meghatározott közeg

Ebben az esetben a közeg összetétele - a szén-, nitrogén-, kén-, foszforforrás és bármilyen egyéb növekedési faktor szempontjából - teljes mértékben ismert. Nagyon hasznos, ha reprodukálható eredményeket szeretne kapni más kutatók számára.

Az úgynevezett "speciális növekedési igényű mikroorganizmusokhoz" hozzá kell adni a szükséges összetevőket. Erre példa a Lactobacillus.

A mikroorganizmus típusa alapján

Hasonlóképpen létezik egy másik osztályozás a táptalajok számára is azon mikroorganizmus típusa alapján, amely rajta növekszik. Ezt az elvet követve a következő általános, dúsító, szelektív és differenciális eszközökkel rendelkezünk. Mindegyiket alább ismertetjük:

Általános média

Ezek támogatják a sokféle mikroorganizmus fejlődését. Ha valamely szervezetnek növekedéséhez speciális körülményekre van szüksége, akkor nem lesz képes sikeresen fejlődni az ilyen típusú kultúrában.

Dúsító közegek

A dúsító táptalaj támogatja egyfajta mikroorganizmus szaporodását, de nem adtak hozzá anyagot annak megakadályozására, hogy más típusú mikrobák növekedjenek benne.

Szelektív média

Keresik a mikroorganizmus fajlagos növekedését, többek között gombáknak, baktériumoknak, protozoáknak. Ehhez gátolják mások fejlődését.

E cél elérése érdekében olyan kémiai vegyületeket adhatunk hozzá, amelyek a mikroorganizmusok széles csoportjára halálosak és ártalmatlanak az érdeklődésre számot tartó organizmus számára, vagy olyan energiaforrások hozzáadásával, amelyeket csak a kívánt mikrobák képesek befogadni.

A szelektív táptalajokat akkor használják, amikor orvosi mintákat vesznek a patogén mikroorganizmus tenyésztése céljából. Itt elő kell mozdítani a kórokozó növekedését és gátolni kell a normál mikrobiális flóra fejlődését a betegtől.

A bizmut-szulfit-agar például nem engedi meg a gram-pozitív baktériumok és a baktériumok nagy számának növekedését a gyomor-bélüregben. Ezért a székletmintákban a tífuszot, a Salmonella typhit okozó gram-negatív baktériumok tenyésztésére használják.

Differenciál média

Ez a típus az érdeklődésre számot tartó organizmus bizonyos diagnosztikai jellemzőit (például anyagcseréjének sajátosságait) használja, hogy azonosítani lehessen őket egy másik fajjal szemben, amely ugyanabban a környezetben nő.

Mind a differenciális közegek, mind a szelektív közegek nagyon hasznosak a klinikai mikrobiológia és a közegészségügy területén, mivel ezeknek a tudományágaknak fel kell tárniuk a patológiákkal vagy a rossz higiéniai körülményekkel kapcsolatos specifikus mikroorganizmusok jelenlétét.

Indikátor anyagokat adhatunk a tenyészethez, amelyek megkülönböztető tulajdonságot adnak a keresett kolóniához. Például laktózt és pH-indikátort adunk az agar-eozin-metilén-kék (rövidítve EMB) és a MacConkey agarhoz.

Tehát, ha ezekben a közegekben kolónia alakul ki, amely képes fermentálni a laktózt és aldehideket termelni, akkor ezek különleges színben megfigyelhetők.

Lépések

Jelenleg a tápközegek liofilizált formában vásárolhatók meg. Ezért az előkészítés könnyebb, és egyetlen tennivaló a termék rehidrálása. A tartalmat meg kell mérni (figyelembe véve az elkészítendő végső mennyiséget) és desztillált vízben fel kell oldani a termékre vonatkozó összes utalást követve.

A folyékony közegek tartalmát fel kell osztani a kívánt tartályokba (Petri-csészék, csövek stb.) A későbbi sterilizáláshoz. A szilárd közeg eloszlatásához mikrohullámú sütővel vagy az anyag vízfürdővel való megolvasztásához szükséges. A tápközeg pH-ját beállítani kell.

Az agart általában kémcsövekben vagy Petri-csészékben használják. Ha az agar ferde helyzetben megszilárdul, megfelelő szögben úgy, hogy a végső csatlakozóél átlós legyen, ezt az elrendezést csőrnek vagy ferde csőnek nevezzük. Amikor az agar teljesen függőleges helyzetben megszilárdul, "mélynek" nevezzük.

A közegek sterilizálása után - autokláv segítségével - hagyjuk lehűlni. Ezeket mikroorganizmusoktól mentes környezetben kell kezelni, a leggyakoribb az, ha világítanak egy öngyújtóval, amely biztosítja a közelében aszeptikus környezetet.

Irodalom

1. Celis, JE (2006). Sejtbiológia: laboratóriumi kézikönyv (2. kötet). Elsevier.
2. Finegold, SM, Bailey, WR, báró, EJ, Fineglod, SM, és Scott, EG (1991). Bailey Scott: mikrobiológiai diagnózis. Pánamerikai Orvosi.
3. Olivas, E. (2004). I. és II. Mikrobiológiai gyakorlati kézikönyv és parazitológia. Ciudad Juarez Autonóm Egyetem.
4. Schlegel, HG, és Zaborosch, C. (1993). Általános mikrobiológia. Cambridge University Press.
5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Case, CL (2007). Bevezetés a mikrobiológiába. Panamerican Medical Ed.